發(fā)布時間：2017-08-10 21:01

  本文關鍵詞：LXRs在LPS誘導THP-1巨噬細胞微粒產生中的作用及機制

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【摘要】：研究背景:ALI/ARDS是臨床上常見的危重癥,過度的炎癥反應是ALI/ARDS的特征性表現(xiàn)之一,微粒是炎癥反應的重要生物學標志物,在ALI/ARDS的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。巨噬細胞在ALI/ARDS時迅速增加,并且對其產生重要影響。肝X受體能夠減輕ALI/ARDS及其炎癥反應,但是其具體機制尚不清楚,進一步研究其機制對于ALI/ARDS的防治具有重要意義。目的:通過體外細胞實驗,觀察肝X受體在LPS誘導的THP-1巨噬細胞微粒產生過程中的作用以及微粒濃度與THP-1巨噬細胞炎性反應的關系。方法:1、先用PMA 100 nM刺激THP-1巨噬細胞貼壁,更換新鮮培養(yǎng)基再用LXRs激動劑T0901317(0μM、5μM、10μM、20μM)預處理THP-1巨噬細胞,6h后更換新鮮培養(yǎng)基,然后用0.1μg/ml的LPS培養(yǎng)細胞24h,采用western blot免疫印跡檢測TLR4蛋白的表達、ELISA檢測TNF-α、IL-6、IL-1β的表達和微粒濃度(以磷脂酰絲氨酸濃度表示)。2、先用PMA 100 nM刺激THP-1巨噬細胞貼壁,更換新鮮培養(yǎng)基再用LXRs激動劑T0901317(10μM)預處理THP-1巨噬細胞(0h、6h、12h、24h),再次更換新鮮培養(yǎng)基后用0.1μg/ml的LPS培養(yǎng)細胞24h,采用western blot免疫印跡檢測TLR4蛋白的表達、ELISA檢測TNF-α、IL-6、IL-1β的表達和微粒濃度(以磷脂酰絲氨酸濃度表示)。3、先用PMA 100 nM刺激THP-1巨噬細胞貼壁,更換新ii鮮培養(yǎng)基后將thp-1巨噬細胞分別進行空白對照處理、lxrs激動劑(10μm)處理、tlr4抑制劑tak-242(3μm)處理,6h后再次更換新鮮培養(yǎng)基,用0.1μg/ml的lps培養(yǎng)細胞24h,采用westernblot免疫印跡檢測tlr4蛋白的表達、elisa檢測tnf-α、il-6、il-1β和微粒濃度(以磷脂酰絲氨酸濃度表示)。結果:1、lxrs激動劑t0901317能顯著抑制thp-1巨噬細胞tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β的表達以及微粒的產生,并具有濃度依賴關系。與0μm組相比,lxrs激動劑t0901317在5μm時即有顯著作用,且隨著lxrs激動劑濃度增加抑制作用也增強,20μm組lxrs激動劑對tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β的表達以及微粒的產生抑制作用最為顯著(p0.001)。2、lxrs激動劑t0901317能顯著抑制thp-1巨噬細胞tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β的表達以及微粒的產生,并且在24h內具有時間依賴關系。與0h組相比,lxrs激動劑t090131710μm處理6h時即有顯著作用,且隨著lxrs激動劑作用時間延長抑制作用也增強,24h組lxrs激動劑對tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β的表達以及微粒的產生抑制最為顯著(p0.001)。3、thp-1巨噬細胞微粒濃度與tlr4蛋白表達水平以及tnf-α、il-6、il-1β濃度呈正相關。4、tlr4抑制劑tak-242和lxrs激動劑t0901317都能有效抑制tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β表達以及微粒產生,且tlr4抑制劑tak-242較lxrs激動劑t0901317作用更明顯。結論:1、lxrs激動劑在lps誘導thp-1巨噬細胞的微粒產生中起抑制作用。2、lxrs可能通過tlr4/myd88通路調節(jié)lps誘導的thp-1巨噬細胞微粒產生來調節(jié)巨噬細胞的炎癥反應。
【關鍵詞】：急性肺損傷 微粒 LXRs TLR-4 炎性反應
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 實驗材料16-18
• 2.1 實驗細胞16
• 2.2 主要試劑16
• 2.3 主要儀器設備16-18
• 第3章 實驗方法18-24
• 3.1 細胞的培養(yǎng)18
• 3.2 實驗分組和方法18-23
• 3.3 統(tǒng)計學分析23-24
• 第4章 實驗結果24-32
• 第5章 討論32-36
• 第6章 結論36-38
• 參考文獻38-42
• 附錄42-44
• 文獻綜述44-54
• 參考文獻50-54
• 作者攻讀學位期間的科研成果54-56
• 致謝56

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本文編號：652630