本文關(guān)鍵詞：維吾爾族飼鴿者肺免疫相關(guān)分子基因多態(tài)性、甲基化與細(xì)胞失衡機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:維吾爾族飼鴿者肺免疫相關(guān)分子基因多態(tài)性、甲基化與細(xì)胞失衡機(jī)制的研究(MIP-1α基因單核苷酸多態(tài)性、HLA-DRB5基因甲基化及CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞與維吾爾族飼鴿者肺易感性的相關(guān)研究)方法:1)根據(jù)納入及排除標(biāo)準(zhǔn)收集資料,總納入92例,其中飼鴿者肺組32例、陰性對照組(飼鴿未患病組)30例及正常對照組(健康體檢組)30例。對納入者的全血標(biāo)本進(jìn)行DNA提取,根據(jù)UCSC數(shù)據(jù)庫中SNP位點(diǎn)的序列信息,利用Mass ARRAY技術(shù)設(shè)計引物、完成樣品制備、PCR擴(kuò)增、SAP、單堿基延伸、點(diǎn)樣質(zhì)譜檢測對MIP-1α基因各位點(diǎn)進(jìn)行多態(tài)性分析;2)對納入者的全血標(biāo)本進(jìn)行DNA提取、亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化、PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄和RNase A特異性酶切,并行基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜分析技術(shù)檢測HLA-DRB5基因甲基化情況;3)根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)收集PBL病例組32例,其中急性期15例、慢性期17例,陰性對照組30例。采集所有納入者的血樣標(biāo)本,采用流式細(xì)胞儀檢測受試者外周血的CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例和T淋巴細(xì)胞亞群。上述資料采用SPSS17.0軟件進(jìn)行基本情況統(tǒng)計分析,其他采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,H-W檢驗不平衡者均采用趨勢卡方檢驗。結(jié)果:1)與正常對照組相比,患病組與陰性對照組血清中MIP-1α濃度均有明顯的增高(P0.05);2)檢測已報道的MIP-1α基因24個位點(diǎn),其中rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407 rs1063340、rs190805628七個位點(diǎn)在維吾爾族飼鴿者中存在基因多態(tài)性(見質(zhì)譜圖);3)Hardy-Weinberg平衡檢驗:MIP-1α基因rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407位點(diǎn)的基因型分布經(jīng)檢驗均不符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05),rs1063340位點(diǎn)基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05);4)飼鴿者肺組、陰性對照組及正常對照組三組基因型頻率分布比較:rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407、rs190805628位點(diǎn)的基因型頻率分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);rs1063340位點(diǎn)基因型分布頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);三組間各位點(diǎn)等位基因頻率分布比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);5)飼鴿者肺組與正常組(陰性對照組及正常對照組)兩組之間基因型頻率分布比較:rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407位點(diǎn)基因型分布頻率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);rs1063340及rs190805628位點(diǎn)基因型分布頻率在兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);6)連鎖不平衡檢驗:本組SNPs位點(diǎn)經(jīng)檢驗10組之間存在強(qiáng)的連鎖不平衡:分別是rs1049191與rs1049195、rs1130374、rs3210166、rs5029407之間強(qiáng)LD;rs1049195與rs1130374、rs3210166、rs5029407之間強(qiáng)LD;rs1130374與rs3210166、rs5029407之間強(qiáng)LD;rs3210166與rs5029407之間強(qiáng)LD;C-C-G-G-C-C-C與T-A-G-A-C-G-T兩種單體型可能與疾病發(fā)生相關(guān);7)檢測到HLA-DRB5片段的18個Cp G位點(diǎn),Cp G1、Cp G2/3/4、Cp G5/6/7、Cp G8/9/10、Cp G11/12/13、Cp G14、Cp G16/17/18/19,各個位點(diǎn)在三組樣本中的甲基化率比較差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);8)與對照組相比,急性期組、慢性期組外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例、CD4+CD25+Treg細(xì)胞比例明顯降低,尤以急性期組降低顯著(P0.01);而急性期組和慢性期組比較,CD4+CD25+Treg細(xì)胞比例的差異無顯著性(P0.05);9)與對照組相比,急性期組和慢性期組外周血中CD4+T細(xì)胞%、CD4+/CD8+比值明顯減少、CD8+T細(xì)胞%明顯增加;三組結(jié)果比較差異有具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);10)急性期組和慢性期組外周血中CD4+/CD8+比值與其外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例和CD4+CD25+Treg細(xì)胞的比例均呈正相關(guān)(r值分別為0.864和0.34,P0.05)。結(jié)論:1)MIP-1α基因rs1049191、rs1049195、rs3210166、rs1130374、rs5029407、rs190805628、rs1063340位點(diǎn)在維吾爾人群中存在基因多態(tài)性;2)接觸鴿子會引起MIP-1α濃度的增高,但尚未發(fā)現(xiàn)血清MIP-1α濃度增高與PBL發(fā)病存在相關(guān)性;3)MIP-1α基因單核苷酸多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺遺傳易感性相關(guān)。其作用機(jī)制可能是MIP-1α基因外顯子及啟動子區(qū)SNP影響MIP-1α基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),繼而影響PBL疾病的發(fā)生;4)CC、GG基因型可能是維吾爾族PBL的易感因素,攜帶CC、GG基因型可能會增加維吾爾族飼養(yǎng)鴿子者患PBL的風(fēng)險,這將從基因角度對于疾病的預(yù)防起到十分關(guān)鍵的作用;5)未發(fā)現(xiàn)HLA-DRB5基因甲基化與維吾爾族飼鴿者肺之間存在關(guān)聯(lián);6)維吾爾族飼鴿者肺患者體內(nèi)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的表達(dá)下調(diào)及過度消耗可能是飼鴿者肺發(fā)病機(jī)制中的重要因素,Treg細(xì)胞在維吾爾族飼鴿者肺發(fā)病的主要分子生物學(xué)機(jī)制可能是Th1/Th2機(jī)制失衡。通過流式法檢測外周血Treg細(xì)胞比例及淋巴細(xì)胞亞群變化有助于協(xié)助診斷PBL疾病,目前國內(nèi)外尚無此相關(guān)報道。
【關(guān)鍵詞】：飼鴿者肺 維吾爾族 MIP-1α基因多態(tài)性 HLA-DRB5基因甲基化 Treg細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563.1
【目錄】：

• 摘要9-11
• Abstract11-14
• 前言14-18
• 第一部分 MIP-1α 基因多態(tài)性與維吾爾族飼鴿者肺易感性的相關(guān)研究18-53
• 1 研究內(nèi)容與方法19-28
• 1.1 研究對象19-20
• 1.2 主要試劑和儀器設(shè)備20-21
• 1.3 研究內(nèi)容21
• 1.4 研究方法21-28
• 1.5 技術(shù)路線28
• 1.6 統(tǒng)計學(xué)分析28
• 2 結(jié)果28-47
• 3 討論47-52
• 4 小結(jié)52-53
• 第二部分 HLA-DRB5基因甲基化與維吾爾族飼鴿者肺相關(guān)研究53-72
• 1 研究內(nèi)容與方法53-61
• 1.1 研究對象53-54
• 1.2 主要試劑和儀器設(shè)備54-56
• 1.3 研究內(nèi)容56
• 1.4 實驗方法56-60
• 1.5 技術(shù)路線60
• 1.6 結(jié)果判讀60
• 1.7 統(tǒng)計學(xué)分析60-61
• 2 結(jié)果61-66
• 3 討論66-71
• 4 小結(jié)71-72
• 第三部分 CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與維吾爾族飼鴿者肺的相關(guān)研究72-85
• l 研究內(nèi)容與方法72-75
• 1.1 研究對象72-73
• 1.2 研究內(nèi)容73
• 1.3 研究方法73-75
• 1.4 統(tǒng)計學(xué)分析75
• 2 結(jié)果75-79
• 3 討論79-84
• 4 小結(jié)84-85
• 結(jié)論85-86
• 致謝86-87
• 參考文獻(xiàn)87-100
• 附錄100-106
• 綜述 過敏性肺炎：飼鴿者肺的病因、臨床特點(diǎn)及發(fā)病機(jī)制研究106-117
• 參考文獻(xiàn)113-117
• 攻讀博士學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果117-119
• 個人簡歷119-120
• 導(dǎo)師評閱表120

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 婁春艷;李敏;李麗;;哮喘小鼠氣道重塑過程中CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th17細(xì)胞表達(dá)的動態(tài)變化[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2015年09期

2 Mohammad Reza Abbaszadegan;Omeed Moaven;Hamid Reza Sima;Kamran Ghafarzadegan;Azadeh A'rabi;Mohammad Naser Forghani;Hamid Reza Raziee;Ali Mashhadinejad;Mostafa Jafarzadeh;Ehsan Esmaili-Shandiz;Ezzat Dadkhah;;p16 promoter hypermethylation:A useful serum marker for early detection of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2008年13期

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本文編號：629598