本文關(guān)鍵詞：牛磺熊去氧膽酸緩解轉(zhuǎn)化生長因子-β1誘導(dǎo)的MRC-5纖維化表型

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【摘要】：肺纖維化是慢性彌漫性間質(zhì)炎癥性肺疾病,以進(jìn)行性呼吸困難及肺功能下降為主要臨床表現(xiàn),以持續(xù)的過度的創(chuàng)傷愈合反應(yīng)為特點。纖維化相關(guān)因子,尤其是轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)對于成纖維細(xì)胞的異常調(diào)節(jié)在肺纖維化進(jìn)程中起到了至關(guān)重要的作用。尋找合適的抗纖維化藥物和阻止纖維化疾病的策略,已經(jīng)持續(xù)了好幾十年,但是理想的治療手段還沒有找到。特發(fā)性肺纖維化患者肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress, ER stress)和未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response, UP R)的活化明顯增加,表明ER stress在纖維化的進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。而牛磺熊去氧膽酸(Tauroursodeoxycholic acid, TUDCA)和熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic acid, UDCA)可以減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。為研究TUDCA(?)UDCA對于肺纖維化緩解的作用,建立人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5)纖維化模型,并用TUDCA和UDCA實施干預(yù),檢測纖維化標(biāo)志物α-平滑肌肌動蛋白和纖連蛋白表達(dá)情況。本研究發(fā)現(xiàn),TUDCA對TGF-β1誘導(dǎo)的α-平滑肌肌動蛋白和纖連蛋白升高的纖維化表型,均有明顯預(yù)防和治療作用。所以,�；切苋パ跄懰峥梢云鸬揭欢ǖ木徑廪D(zhuǎn)化生長因子-β1誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞的纖維化作用,待作用機(jī)制摸透,可潛在成為新的抗纖維化藥物。
【關(guān)鍵詞】：�；切苋パ跄懰� 肺纖維化 轉(zhuǎn)化生長因子-β1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 氯喹
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563
【目錄】：

• 中文摘要7-8
• Abstract8-9
• 英文縮略語表9-11
• 前言11-13
• 第一節(jié) MRC-5細(xì)胞纖維化模型的建立13-25
• 1. 實驗材料13-16
• 1.1 細(xì)胞株13
• 1.2 主要化學(xué)試劑和試劑盒13
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)用耗材及試劑13
• 1.4 主要設(shè)備和儀器13
• 1.5 主要溶液配方13-16
• 2. 實驗方法16-21
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-17
• 2.2 RNA樣品的處理17-19
• 2.3 蛋白樣品的處理19-21
• 3. 實驗結(jié)果21-24
• 3.1 實時定量PCR檢測α-SMA mRNA表達(dá)情況21-22
• 3.2 實時定量PCR檢測纖連蛋白mRNA表達(dá)情況22-23
• 3.3 Western Blot檢測α-SMA蛋白水平的表達(dá)情況23
• 3.4 Western Blot檢測纖連蛋白在蛋白水平的表達(dá)情況23-24
• 4. 總結(jié)24-25
• 第二節(jié) 氯喹對于MRC-5細(xì)胞纖維化模型的干預(yù)25-32
• 1. 實驗材料25-26
• 1.1 細(xì)胞株25
• 1.2 主要化學(xué)試劑和試劑盒25
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)用耗材及試劑25
• 1.4 主要設(shè)備和儀器25
• 1.5 主要溶液25-26
• 2. 實驗方法26-27
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)26
• 2.2 RNA樣品的處理26
• 2.3 蛋白樣品的處理26-27
• 3. 實驗結(jié)果27-31
• 3.1 實時定量PCR檢測氯喹干預(yù)MRC-5纖維化模型α-SMAmRNA表達(dá)情況27-28
• 3.2 實時定量PCR檢測氯喹干預(yù)MRC-5纖維化模型纖連蛋白mRNA表達(dá)情況28-29
• 3.3 Western Blot檢測α-SMA蛋白水平的表達(dá)情況29-30
• 3.4 Western Blot檢測纖連蛋白在蛋白水平的表達(dá)情況30-31
• 4. 總結(jié)31-32
• 第三節(jié) TUDCA對于MRC-5細(xì)胞毒性檢測32-34
• 1. 實驗材料32
• 1.1 細(xì)胞株32
• 1.2 主要化學(xué)試劑32
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)用耗材及試劑32
• 1.4 主要設(shè)備和儀器32
• 1.5 主要溶液配方32
• 2. 實驗方法32-33
• 3. 實驗結(jié)果33
• 4. 總結(jié)33-34
• 第四節(jié) TUDCA對于MRC-5細(xì)胞纖維化模型的干預(yù)34-40
• 1. 實驗材料34-35
• 1.1 細(xì)胞株34
• 1.2 主要化學(xué)試劑和試劑盒34
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)用耗材及試劑34
• 1.4 主要設(shè)備和儀器34
• 1.5 主要溶液34-35
• 2. 實驗方法35-36
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)35
• 2.2 RNA樣品的處理35
• 2.3 蛋白樣品的處理35-36
• 3. 實驗結(jié)果36-39
• 3.1 實時定量PCR檢測TUDCA干預(yù)MRC-5纖維化模型=α-SMA mRNA表達(dá)情況36-37
• 3.2 實時定量PCR檢測TUDCA干預(yù)MRC-5纖維化模型纖連蛋白的mRNA表達(dá)情況37
• 3.3 Western Blot檢測TUDCA干預(yù)MRC-5纖維化模型α-SMA蛋白表達(dá)情況37-38
• 3.4 Western Blot檢測TUDCA干預(yù)MRC-5纖維化模型纖連蛋白表達(dá)情況38-39
• 4. 總結(jié)39-40
• 第五節(jié) UDCA對于MRC-5細(xì)胞毒性檢測40-42
• 1. 實驗材料40
• 1.1 細(xì)胞株40
• 1.2 主要化學(xué)試劑40
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)用耗材及試劑40
• 1.4 主要設(shè)備和儀器40
• 2. 實驗方法40
• 3. 實驗結(jié)果40-41
• 4. 總結(jié)41-42
• 第六節(jié) UDCA對于MRC-5細(xì)胞纖維化模型的干預(yù)42-47
• 1. 實驗材料42-43
• 1.1 細(xì)胞株42
• 1.2 主要化學(xué)試劑和試劑盒42
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)用耗材及試劑42
• 1.4 主要設(shè)備和儀器42
• 1.5 主要溶液42-43
• 2. 實驗方法43-44
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)43
• 2.2 RNA樣品的處理43
• 2.3 蛋白樣品的處理43-44
• 3. 實驗結(jié)果44-46
• 3.1 實時定量PCR檢測UDCA干預(yù)MRC-5纖維化模型α-SMA mRNA表達(dá)情況44
• 3.2 實時定量PCR檢測UDCA干預(yù)MRC-5纖維化模型纖連蛋白mRNA表達(dá)情況44-45
• 3.3 Western Blot檢測TUDCA干預(yù)MRC-5纖維化模型α-SMA蛋白表達(dá)情況45-46
• 3.4 Western Blot檢測UDCA干預(yù)MRC-5纖維化模型纖連蛋白表達(dá)情況46
• 4. 總結(jié)46-47
• 討論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 綜述50-55
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 致謝55-57
• 個人簡歷57-58

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本文編號：607697