本文關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞亞型及Lunx基因在滲出性胸腔積液中作用的研究

  更多相關(guān)文章： 巨噬細(xì)胞亞群 肺特異性X蛋白 結(jié)核性胸腔積液 惡性胸腔積液

【摘要】：背景：結(jié)核性胸腔積液和惡性胸腔積液是滲出性胸腔積液中最常見(jiàn)的兩種類型。巨噬細(xì)胞是胸腔積液中的主要細(xì)胞組分，具有吞噬、清除異物和衰老傷亡細(xì)胞的功能，在機(jī)體的固有免疫應(yīng)答中發(fā)揮了重要作用。巨噬細(xì)胞還是一種重要的抗原呈遞細(xì)胞，可以有效的向T細(xì)胞呈遞抗原，進(jìn)而誘導(dǎo)T細(xì)胞的激活。根據(jù)巨噬細(xì)胞的功能巨噬細(xì)胞可以被分為兩種極化類型：M1型和M2型。M1型主要起促炎、抗腫瘤的作用；而M2型主要起炎癥修復(fù)和促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用。巨噬細(xì)胞的不同活化狀態(tài)是決定其在疾病中發(fā)揮作用的基礎(chǔ)。巨噬細(xì)胞是機(jī)體抗結(jié)核免疫的第一道防線，結(jié)核分枝桿菌進(jìn)入機(jī)體后能否存活或復(fù)制，與巨噬細(xì)胞的功能狀態(tài)密切相關(guān)；另一方面,腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞可以通過(guò)釋放許多趨化因子促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和血管生成,并且可以降解基質(zhì)促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。巨噬細(xì)胞在結(jié)核性和惡性胸腔積液患者胸腔局部免疫中到底發(fā)揮了什么作用還有待進(jìn)一步研究。另外，盡管近年來(lái)腫瘤的診療技術(shù)取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但對(duì)于良惡性胸腔積液的鑒別臨床上還存在一定的困難。細(xì)胞學(xué)檢測(cè)是區(qū)分良惡性胸腔積液的最主要的方法，然而胸水中過(guò)度增生的間皮細(xì)胞、組織細(xì)胞和退行性的間皮細(xì)胞通常顯示特殊的形態(tài)學(xué)特征,使得腫瘤細(xì)胞難于識(shí)別。人類肺組織特異性基因Lunx在肺組織中特異表達(dá)，而在其他人類腫瘤及正常組織中極少表達(dá)或不表達(dá)，Lunx基因在快速鑒別漿膜腔積液的良惡性以及在判定漿膜腔積液中惡性腫瘤細(xì)胞的來(lái)源方面,可能具有一定的應(yīng)用價(jià)值。因此本課題旨在明確結(jié)核性和惡性胸腔積液中巨噬細(xì)胞亞群的變化，為進(jìn)一步研究巨噬細(xì)胞在二者的發(fā)生及發(fā)展中所發(fā)揮的作用提供理論基礎(chǔ)；另外通過(guò)進(jìn)一步檢測(cè)胸腔積液中Lunx基因的表達(dá)水平，評(píng)價(jià)Lunx基因檢測(cè)在惡性胸腔積液診斷中的作用及臨床意義。 目的：通過(guò)檢測(cè)巨噬細(xì)胞及其亞型在結(jié)核性胸膜炎和惡性胸腔積液中的表達(dá)，探討巨噬細(xì)胞在滲出性胸腔積液發(fā)病機(jī)制中的作用，進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)惡性胸腔積液中Lunx基因的表達(dá)，，評(píng)估Lunx基因檢測(cè)的價(jià)值及臨床意義。 方法：通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)核性胸膜炎和惡性胸腔積液患者外周血、胸腔積液巨噬細(xì)胞亞型及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)，采用微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù)(CBA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)TNF-, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10,IL-12和TGF-β細(xì)胞因子的含量，并分析其與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系。采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)胸水Lunx mRNA的表達(dá)水平。臨床指標(biāo)中血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血沉、結(jié)核斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)、胸水酸堿度、白蛋白、乳酸脫氫酶、癌胚抗原、脫落細(xì)胞等均由檢驗(yàn)科或病理科�？漆t(yī)生完成。 結(jié)果：1.結(jié)核性胸膜炎患者外周血CD14+CD163-M1、CD14+CD163-IL-12+M1型巨噬細(xì)胞的數(shù)量較健康對(duì)照組明顯增高，但低于相應(yīng)的胸腔積液；增高的外周血CD14+CD163-IL-12+M1型巨噬細(xì)胞的數(shù)量與血清IL-12濃度呈明顯正相關(guān)。 2.結(jié)核性胸膜炎患者外周血CD14+CD163+M2、 CD14+CD163+CD206+M2、CD14+CD163+CD115+M2和CD14+CD163+CD206+CD115+M2型巨噬細(xì)胞的數(shù)量明顯多于相應(yīng)的胸腔積液。 3.結(jié)核性胸膜炎患者外周血CD14+CD163-MAC387+M1和CD14+CD163-MAC387-M1型巨噬細(xì)胞的數(shù)量明顯高于健康對(duì)照組，但是低于相應(yīng)的胸腔積液。 4.結(jié)核性胸膜炎患者血清IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, TNF和TGF-的濃度明顯高于健康對(duì)照組,但低于相應(yīng)的胸腔積液，而血清IL-10濃度和健康對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但仍低于相應(yīng)的胸腔積液水平。 5.結(jié)核性胸膜炎患者血清TNF-和IL-12水平與ESR、 ESAT-6-IFN-γ-T、CFP-10-IFN-γ-T細(xì)胞數(shù)量呈明顯正相關(guān)，而胸水中TNF-水平與ADA和LDH呈明顯正相關(guān)。 6.惡性胸腔積液患者外周血CD14+CD163+M2、CD14+CD163+IL-10+M2型巨噬細(xì)胞的數(shù)量較健康對(duì)照組明顯增高，但低于相應(yīng)的胸腔積液。外周血CD14+CD163-IL-12+M1型巨噬細(xì)胞的數(shù)量明顯低于健康對(duì)照組，但高于相應(yīng)的胸腔積液。 7.惡性胸腔積液患者外周血CD14+CD163+M2、 CD14+CD163+CD206+M2、CD14+CD163+CD115+M2和CD14+CD163+CD206+CD115+M2型巨噬細(xì)胞的數(shù)量較健康對(duì)照組明顯增高，但低于相應(yīng)的胸腔積液。 8.惡性胸腔積液患者外周血CD14+CD163+MAC387+M2和CD14+CD163+MAC387-M2型巨噬細(xì)胞的數(shù)量明顯高于健康對(duì)照組，但是低于相應(yīng)的胸腔積液。 9.惡性胸腔積液患者血清IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, TNF和TGF-的濃度明顯高于健康對(duì)照組,但低于相應(yīng)的胸腔積液，而血清IL-12濃度與健康對(duì)照組和相應(yīng)的胸腔積液比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 10.惡性胸腔積液患者胸水TNF-水平與CEA、LDH呈明顯正相關(guān)，而IL-10水平與CEA呈明顯正相關(guān)。 11. Lunx mRNA診斷肺癌所致惡性胸腔積液的特異性為95.9%，敏感性為84.9%，ROC曲線下面積為0.922，明顯高于胸水脫落細(xì)胞和CEA的0.821和0.798。 12. Lunx mRNA在肺特異性表達(dá)，所有Lunx mRNA陽(yáng)性的惡性胸腔積液患者均被診斷為肺癌，而所有肺外腫瘤所致的惡性胸腔積液患者Lunx mRNA表達(dá)均為陰性，LunxmRNA對(duì)于腫瘤細(xì)胞來(lái)源的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為100%。 13.在CR和PR組, Lunx mRNA的表達(dá)水平在第1療程化療結(jié)束后明顯下降，而在NC組沒(méi)有明顯變化，PD組則顯著增加。 14.在Lunx mRNA表達(dá)下降組，患者的中位生存時(shí)間是53周,而在Lunx mRNA表達(dá)上升組，患者的中位生存時(shí)間是25周，Lunx mRNA表達(dá)下降組的總生存期要明顯長(zhǎng)于Lunx mRNA表達(dá)上升組。 結(jié)論：1.新發(fā)結(jié)核性胸膜炎患者體內(nèi)巨噬細(xì)胞亞型以M1型為主，并且以胸膜腔局部表現(xiàn)更為明顯，提示我們結(jié)核分枝桿菌感染誘發(fā)的促炎的M1型巨噬細(xì)胞反應(yīng)參與了結(jié)核性胸膜炎的早期發(fā)病過(guò)程。 2.惡性胸腔積液患者胸水中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞主要表現(xiàn)為M2型，進(jìn)一步證實(shí)了M2型巨噬細(xì)胞在惡性胸腔積液發(fā)生與發(fā)展中的作用。 3. Lunx mRNA可以作為診斷肺癌所致惡性胸腔積液的標(biāo)志物之一，推薦臨床廣泛應(yīng)用，監(jiān)測(cè)惡性胸腔積液患者化療前后Lunx mRNA表達(dá)水平的變化有助于臨床醫(yī)生預(yù)測(cè)患者對(duì)治療的反應(yīng)性，監(jiān)測(cè)病情并進(jìn)一步評(píng)估患者的預(yù)后。
【關(guān)鍵詞】：巨噬細(xì)胞亞群 肺特異性X蛋白 結(jié)核性胸腔積液 惡性胸腔積液
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R561.3
【目錄】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-17
• 中英文縮略詞對(duì)照表17-19
• 第1章 文獻(xiàn)綜述19-27
• 1.1 巨噬細(xì)胞亞型的研究進(jìn)展19-22
• 1.1.1 巨噬細(xì)胞的分型及功能19-20
• 1.1.2 巨噬細(xì)胞亞型與疾病的關(guān)系20-22
• 1.1.3 展望22
• 1.2 肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的研究現(xiàn)狀22-27
• 1.2.1 神經(jīng)元烯醇化酶(Neuron specific enolase, NSE)22-23
• 1.2.2 前胃泌素釋放肽(ProGRP)和胃泌素釋放肽 (GRP)23
• 1.2.3 半胱天冬酶裂解的細(xì)胞角蛋白 19 片段(CYFRA21.1)23-24
• 1.2.4 組織多肽抗原 (Tissue polypeptide antigen,TPA)24
• 1.2.5 癌胚抗原( Carcinoembryonic antigen，CEA)24-25
• 1.2.6 鱗癌細(xì)胞抗原(Squamous cell carcinoma antigen, SCC-Ag)25
• 1.2.7 肺特異性 X 蛋白（Lunx 蛋白）25-26
• 1.2.8 小結(jié)26-27
• 第2章 巨噬細(xì)胞亞群及其功能在新發(fā)結(jié)核性胸膜炎中作用的研究27-55
• 2.1 引言27-28
• 2.2 材料與方法28-34
• 2.2.1 研究對(duì)象28
• 2.2.2 臨床指標(biāo)28-29
• 2.2.3 標(biāo)本采集29
• 2.2.4 主要試劑和儀器29-31
• 2.2.5 外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMC）分離31
• 2.2.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)31
• 2.2.7 巨噬細(xì)胞的表型測(cè)定31-32
• 2.2.8 巨噬細(xì)胞功能的測(cè)定32
• 2.2.9 微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù)（Cytometric bead array，CBA) 檢測(cè)血漿和胸水炎癥細(xì)胞因子水平32-33
• 2.2.10 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)血清和胸水 TGF-β水平33-34
• 2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法34
• 2.3 結(jié)果34-51
• 2.3.1 結(jié)核性胸膜炎患者的一般信息和臨床特點(diǎn)34-35
• 2.3.2 結(jié)核性胸膜炎患者 T-SPOT.TB 試驗(yàn)的結(jié)果分析35-36
• 2.3.3 結(jié)核性胸膜炎患者 CD14+CD163-M1 型和 CD14+CD163+M2 型巨噬細(xì)胞的表達(dá)36-37
• 2.3.4 結(jié)核性胸膜炎患者 CD14+CD163+M2 型巨噬細(xì)胞相關(guān)受體的表達(dá)37-40
• 2.3.5 結(jié)核性胸膜炎患者 CD14+CD163-M1 型和 CD14+CD163+M2 型巨噬細(xì)胞表面 MAC387 的表達(dá)40-41
• 2.3.6 結(jié)核性胸膜炎患者 CD14+CD163-IL-12+M1 型和 CD14+CD163+ IL-10+M2 型巨噬細(xì)胞的表達(dá)41-44
• 2.3.7 結(jié)核性胸膜炎患者多種炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)44-47
• 2.3.8 結(jié)核性胸膜炎患者巨噬細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子間的相關(guān)性47-48
• 2.3.9 結(jié)核性胸膜炎患者細(xì)胞因子水平和臨床指標(biāo)間的相關(guān)性48-51
• 2.4 討論51-54
• 2.5 小結(jié)54-55
• 第3章 巨噬細(xì)胞亞群及其功能在惡性胸腔積液中作用的研究55-73
• 3.1 引言55-56
• 3.2 材料與方法56-57
• 3.2.1 研究對(duì)象56
• 3.2.2 臨床指標(biāo)56
• 3.2.4 主要試劑和儀器56
• 3.2.5 外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMC）分離56-57
• 3.2.6 細(xì)胞計(jì)數(shù)57
• 3.2.7 巨噬細(xì)胞的表型測(cè)定57
• 3.2.8 巨噬細(xì)胞的功能測(cè)定57
• 3.2.9 CBA 和 ELISA 法檢測(cè)血清和胸水炎癥細(xì)胞因子水平57
• 3.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法57
• 3.3 結(jié)果57-68
• 3.3.1 惡性胸腔積液患者的一般信息和臨床特點(diǎn)57-58
• 2.3.2 惡性胸腔積液患者 CD14+CD163-M1 型和 CD14+CD163+M2 型巨噬細(xì)胞的表達(dá)58-59
• 2.3.3 惡性胸腔積液患者 CD14+CD163+M2 型巨噬細(xì)胞相關(guān)受體的表達(dá)59-61
• 2.3.4 惡性胸腔積液患者 CD14+CD163-M1 型和 CD14+CD163+M2型巨噬細(xì)胞表面 MAC387 的表達(dá)61-62
• 2.3.5 惡性胸腔積液患者 CD14+CD163-IL-12+M1 型和CD14+CD163+IL-10+M2 型巨噬細(xì)胞的表達(dá)62-64
• 2.3.6 惡性胸腔積液患者 M1 型和 M2 型細(xì)胞因子的表達(dá)64-67
• 2.3.7 惡性胸腔積液患者細(xì)胞因子水平和臨床指標(biāo)間的相關(guān)性67-68
• 3.4 討論68-71
• 3.5 小結(jié)71-73
• 第4章 LUNX MRNA 檢測(cè)對(duì)肺癌所致惡性胸腔積液診斷的優(yōu)越性和臨床意義73-89
• 4.1 引言73-74
• 4.2 材料和方法74-77
• 4.2.1 研究對(duì)象74
• 4.2.2 支氣管鏡檢查74-75
• 4.2.3 細(xì)胞學(xué)檢測(cè)75
• 4.2.4 胸膜活檢75
• 4.2.5 胸腔積液的臨床檢測(cè)75
• 4.2.6 實(shí)時(shí)定量 RT-PCR 法檢測(cè) Lunx mRNA 表達(dá)75-77
• 4.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析77
• 4.3 結(jié)果77-85
• 4.3.1 胸腔積液患者的一般信息和臨床特征77
• 4.3.2 肺癌所致惡性胸腔積液患者的化療情況77-80
• 4.3.3 不同組別胸腔積液患者的 Lunx mRNA 的表達(dá)80-82
• 4.3.4 Lunx mRNA 水平、脫落細(xì)胞、CEA 檢測(cè)對(duì)肺癌所致惡性胸腔積液的診斷效益比較82
• 4.3.5 Lunx mRNA 與腫瘤分化程度的相關(guān)性82-83
• 4.3.6 Lunx mRNA 對(duì)腫瘤來(lái)源的預(yù)測(cè)83
• 4.3.7 Lunx mRNA 表達(dá)水平變化與化學(xué)治療反應(yīng)的相關(guān)性83-84
• 4.3.8 治療前后 Lunx mRNA 表達(dá)水平的變化與患者總體生存率的相關(guān)性84-85
• 4.4 討論85-87
• 4.5 小結(jié)87-89
• 第5章 結(jié)論89-90
• 創(chuàng)新點(diǎn)90-91
• 參考文獻(xiàn)91-107
• 附錄107-109
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果109-111
• 致謝111

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 章必成;趙勇;王俊;郭燕;饒智國(guó);高建飛;;人肺腺癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的活化表型鑒定[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年05期

2 馬雅鑾;藺潔;秦明照;曾輝;;單核-巨噬細(xì)胞亞型與動(dòng)脈粥樣硬化[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2010年05期

3 袁祖貽;郜珊珊;;巨噬細(xì)胞亞型在動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中的作用及淋巴細(xì)胞對(duì)其亞型分化作用的影響[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年03期

本文編號(hào)：600427