發(fā)布時間：2017-07-30 05:03

  本文關(guān)鍵詞：KLF2與S1PR1對哮喘患者外周血中性粒細(xì)胞遷移的影響

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【摘要】：目的:通過觀察健康志愿者與不同程度哮喘患者外周血中性粒細(xì)胞(neutrophil,NEU)百分比,分離中性粒細(xì)胞檢測中性粒細(xì)胞KLF2、S1PR1的表達(dá)及中性粒細(xì)胞的遷移率,探討KLF2與S1PR1對哮喘患者外周血中性粒細(xì)胞遷移的影響,從而為哮喘的防治提供新思路。方法:隨機(jī)收取2014年04月-2016年03月于湖南省馬王堆醫(yī)院及長沙市第三醫(yī)院住院的急性發(fā)作期哮喘患者29例,按照病情程度分為輕度哮喘組(L組)、中度哮喘組(M組)、重度哮喘組(S組),選取年齡、性別與哮喘患者相匹配的健康自愿者作為健康對照組(C組)。于入院6小時內(nèi)采取外周血分離中性粒細(xì)胞,隨后進(jìn)行染色鑒定,免疫熒光明確KLF2在中性粒細(xì)胞上的定位,采用Realtime-PCR檢測各組研究對象中性粒細(xì)胞KLF2與S1PR1m RNA的表達(dá),Western-blot檢測各組研究對象中性粒細(xì)胞KLF2與S1PR1蛋白的表達(dá),利用Transwell小室測定中性粒細(xì)胞的遷移率。結(jié)果:1.各組研究對象外周血白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)健康對照組、輕、中、重度哮喘組外周血中性粒細(xì)胞百分比呈升高趨勢,分別為(61.35(51.90~65.70)、62.54(54.75~66.12)、70.20(65.34~75.50)、89.84(73.35~94.57)),且健康對照組、輕度哮喘組與重度哮喘組比較,健康對照組、輕度哮喘組與中度哮喘組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.中性粒細(xì)胞的分離及鑒定采用梯度離心法及時分離外周血中性粒細(xì)胞,然后用PBS重懸,進(jìn)行迪夫染色,油鏡下觀察中性粒細(xì)胞核呈腎型、桿狀及分葉核,純度達(dá)到95%以上。臺盼藍(lán)染色鑒定存活率大于90%。3.外周血中性粒細(xì)胞KLF2的定位免疫熒光結(jié)果示:KLF2在人外周血中性粒細(xì)胞中表達(dá),主要定位于中性粒細(xì)胞胞核,胞漿亦有少量表達(dá)。4.各組研究對象外周血中性粒細(xì)胞KLF2與S1PR1 m RNA的表達(dá)對于健康對照組、輕、中、重度哮喘組,KLF2 m RNA的表達(dá)(1.00(0.96~1.05)、0.80(0.77~0.85)、0.49(0.45~0.52)、0.33(0.32~0.35))依次呈下降趨勢,而S1PR1 m RNA的表達(dá)(0.99(0.76~1.21)、2.45(2.11~2.81)、3.68(3.41~5.50)、7.52(6.89~7.98))依次呈上升趨勢。這兩個因子,中、重度哮喘組與健康對照組比較,重度哮喘組與輕度哮喘組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。5.各組研究對象外周血中性粒細(xì)胞KLF2與S1PR1蛋白的表達(dá)Western-blot分析結(jié)果示:對于健康對照組、輕、中、重度哮喘組,KLF2蛋白的表達(dá)(0.515(0.390~0.605),0.450(0.385~0.545),0.370(0.310~0.430),0.260(0.245~0.300))依次呈下降趨勢,而S1PR1蛋白的表達(dá)(0.250(0.233~0.345),0.350(0.290~0.435),0.400(0.360~0.410),0.540(0.490~0.615))依次呈上升趨勢,且以上兩個因子,中、重度哮喘組與健康對照組比較,重度哮喘組與輕度哮喘組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.各組研究對象外周血中性粒細(xì)胞遷移率的測定根據(jù)我室前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取0.1u M的S1P進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn),遷移率結(jié)果顯示:健康對照組、輕、中、重度哮喘組中性粒細(xì)胞遷移率依次(4.28(3.04~5.06),10.35(9.40~11.18),16.05(14.70~18.15),20.70(19.05~22.80))呈增加趨勢。輕、中、重度哮喘組與健康對照組比較,重度哮喘組與輕度哮喘組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7.研究對象外周血中性粒細(xì)胞KLF2 m RNA及蛋白與S1PR1 m RNA及蛋白表達(dá)的相關(guān)分析所有研究對象外周血中性粒細(xì)胞KLF2與S1PR1 m RNA表達(dá)做Pearson相關(guān)分析(r=-0.891,P0.01),而KLF2與S1PR1蛋白的Pearson相關(guān)分析顯示(r=-0.671,P0.01),提示無論在m RNA或蛋白表達(dá)水平KLF2與S1PR1的表達(dá)量均呈負(fù)相關(guān)。8.研究對象中性粒細(xì)胞KLF2、S1PR1蛋白表達(dá)與中性粒細(xì)胞遷移率的相關(guān)分析KLF2蛋白表達(dá)與中性粒細(xì)胞遷移率做Pearson相關(guān)分析,結(jié)果示(r=-0.664,P0.01),提示兩者呈負(fù)相關(guān)。S1PR1蛋白表達(dá)與中性粒細(xì)胞遷移率做Pearson相關(guān)分析,結(jié)果顯示(r=0.810,P0.01),提示兩者呈正相關(guān)。結(jié)論:1.哮喘患者中性粒細(xì)胞KLF2的表達(dá)隨著哮喘嚴(yán)重程度的加重而下降,趨化因子受體S1PR1的表達(dá)隨著哮喘嚴(yán)重程度的加重而上升,中性粒細(xì)胞的遷移率隨之而升高。2.哮喘患者外周血中性粒細(xì)胞KLF2表達(dá)下調(diào)可能通過負(fù)調(diào)控趨化因子受體S1PR1的表達(dá),促進(jìn)中性粒細(xì)胞遷移。
【關(guān)鍵詞】：哮喘 中性粒細(xì)胞 遷移 KLF2 S1PR1
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-13
• 主要縮略詞13-14
• 第一章 前言14-16
• 第二章 材料與方法16-30
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-36
• 第四章 討論36-40
• 第五章 結(jié)論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 附圖46-54
• 綜述 哮喘相關(guān)炎癥細(xì)胞及其老齡化改變54-66
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 碩士期間撰寫論文66-68
• 致謝68-69

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳萍,謝華,吳志家,孔令菲,李永春,于日新,趙海濤;遼寧省大中城市及郊區(qū)老年人支氣管哮喘患病率調(diào)查[J];中華老年醫(yī)學(xué)雜志;2004年02期

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本文編號：592574