本文關鍵詞：茶堿通過抑制NF-κB活性而減輕過氧化氫暴露下骨骼肌細胞的炎癥

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【摘要】：目的觀察茶堿對過氧化氫暴露下C2C12小鼠成肌細胞(C2C12細胞)炎癥的抑制作用。方法 (1)觀察不同濃度過氧化氫(H2O2)和茶堿對細胞生長的影響：以C2C12細胞為研究對象,細胞分化成熟后使用終濃度分別為0.1mmol/L、 0.2mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L和0.8mmol/L的H2O2,和終濃度分別為1 mol/L、0.1 mol/L、0.01 mol/L、0.001 mol/L和0.0001 mol/L的茶堿干預細胞24h,進一步采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法確定對C2C12細胞的合適藥物濃度。(2)觀察茶堿是否能下調過氧化氫暴露下C2C12細胞內核因子-κB(NF-κB)的表達和炎癥介質釋放：將分化好的細胞分為空白對照組、過氧化氫組(過氧化氫干預細胞24小時)、茶堿組(茶堿干預細胞24小時)、過氧化氫+茶堿組(過氧化氫和茶堿共同干預細胞24小時)、吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)+過氧化氫組。采用酶聯免疫吸附試驗(ELIS A)檢測細胞培養(yǎng)上清白細胞介素-8(IL-8)口腫瘤壞死因子-a(TNF-a)的含量,實時熒光定量聚酶鏈反應(RT-PCR)檢測細胞內NF-κB mRNA相對表達量的情況,蛋白印跡實驗(Western blot)檢測細胞內NF-κB蛋白的表達情況,凝膠遷移實驗(EMSA)檢測細胞核內NF-κB活性。數據采用SPSS17.0統計軟件進行統計分析。結果 (1)選擇濃度為0.4%的過氧化氫和0.001 mol/L的茶堿對C2C12細胞生長無明顯影響。(2)茶堿對炎癥因子(IL-8、TNF-α)的影響：過氧化氫組細胞上清液炎癥因子(IL-8、TNF-α)含量明顯高于空白對照組及茶堿組(P0.05),茶堿+過氧化氫組IL-8、TNF-α較過氧化氫組減少(P0.05)；PDTC+過氧化氫組炎癥因子(IL-8、TNF-a)明顯低于過氧化氫組(P0.05)。(3)茶堿對NF-κB的mRNA相對表達量的影響：過氧化氫組NF-κB的mRNA相對表達量明顯高于空白對照組及茶堿組(P0.05),茶堿+過氧化氫組NF-κB的mRNA相對表達量較過氧化氫組減少(P0.05); PDTC+過氧化氫組NF-κB的mRNA相對表達量明顯低于過氧化氫組(P0.05)。(4)茶堿對NF-κB蛋白表達量的影響：過氧化氫組NF-κB蛋白表達量明顯高于空白對照組及茶堿組(P0.05),茶堿+過氧化氫組NF-κB蛋白表達量較過氧化氫組減少(P0.05)；PDTC+過氧化氫組NF-κB蛋白表達量明顯低于過氧化氫組(P0.05)。(5)茶堿對NF-κB細胞核內活性的影響：過氧化氫組NF-κB細胞核內活性明顯高于空白對照組及茶堿組(P0.05),茶堿+過氧化氫組NF-κB細胞核內活性較過氧化氫組減少(P0.05),較PDTC+過氧化氫組升高(P0.05); PDTC+過氧化氫組NF-κ B細胞核內活性明顯低于過氧化氫組(P0.05)。結論 茶堿可以下調過氧化氫暴露下C2C12小鼠成肌細胞內N F-κB的活性,減少IL-8和TNF-α的釋放,抑制骨骼肌細胞炎癥。
【關鍵詞】：氧化應激 核因子-κB 骨骼肌炎癥
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 主要縮略詞表5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-37
• 實驗結果37-46
• 討論46-51
• 結論51-52
• 參考文獻52-57
• 綜述57-74
• 參考文獻64-74
• 致謝74-76
• 2013年-2016年攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文76

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