本文關(guān)鍵詞：6-姜烯酚通過(guò)NF-κB途徑對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠的保護(hù)作用機(jī)制研究

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【摘要】：急性肺損傷／急性呼吸窘迫綜合征(iute lung injury,ALI/acute respiratory distress syndrome,ARDS)是指發(fā)生于嚴(yán)重感染、休克、創(chuàng)傷及燒傷等疾病過(guò)程中,由于肺的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞損傷,肺泡毛細(xì)血管通透性增加,肺泡腔內(nèi)含有蛋白的水腫液集聚,而引起的彌漫性肺間質(zhì)水腫,并導(dǎo)致的以進(jìn)行性低氧血癥、呼吸窘迫為特征的臨床綜合征。就其病程階段來(lái)看,急性肺損傷是急性呼吸窘迫綜合征的早期階段。就其病因來(lái)看,多種病因均可導(dǎo)致急性呼吸窘迫綜合癥,肺外源性肺損傷因素主要有：各種嚴(yán)重感染、膿毒癥休克、出血壞死性胰腺炎、嚴(yán)重創(chuàng)傷應(yīng)激、大面積燒傷、大量輸血、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、嚴(yán)重過(guò)敏、羊水栓塞等。肺內(nèi)源性肺損傷因素主要包括：重癥肺炎、肺部創(chuàng)傷、肺栓塞、放射性肺炎、氧中毒、誤吸、溺水等。報(bào)道顯示：美國(guó)每年19萬(wàn)人發(fā)病,其中74500人死亡。因其病情進(jìn)展迅速,病死率高,缺乏有效的治療手段,已成為當(dāng)前呼吸危重癥領(lǐng)域亟待解決的難題。當(dāng)前研究認(rèn)為,環(huán)境內(nèi)外多種致病因素導(dǎo)致的全身性炎癥反應(yīng)是ARDS的根本原因。當(dāng)炎性細(xì)胞因子大量釋放,導(dǎo)致肺組織出現(xiàn)炎性反應(yīng),從而使肺泡毛細(xì)血管通透性增加,肺泡內(nèi)滲出的大量炎性體液難以清除,進(jìn)而出現(xiàn)急性肺損傷的臨床表現(xiàn)。核因子-κB(NF-κB)廣泛存在于人體細(xì)胞中,它作為生物體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子,擔(dān)負(fù)著重要的生理功能。在病理?xiàng)l件下,它能夠起到調(diào)控炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡的作用。例如,經(jīng)典的炎性細(xì)胞因子：腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)等就受到NF-κB的調(diào)控。以往大量實(shí)驗(yàn)證實(shí),在脂多糖(LPS)等致炎因素的刺激下,NF-κB可以從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核,從無(wú)活性的狀態(tài)變?yōu)榛钚越Y(jié)構(gòu),從而在轉(zhuǎn)錄水平啟動(dòng)各種炎性介質(zhì)、趨化因子等基因轉(zhuǎn)錄,從而加劇炎癥反應(yīng)的程度和持續(xù)時(shí)間,在臨床上呈現(xiàn)頑固性低氧血癥和難治性呼吸衰竭。因此針對(duì)NF-κB活性位點(diǎn)的干預(yù)措施勢(shì)在必行。純天然植物產(chǎn)品由于其顯著的療效和毒性相對(duì)較低用來(lái)治療ALI受到了廣泛的關(guān)注。姜是多年生草本植物(zingiber ofFicinale Rose.),它的新鮮或干燥根莖就是我們?nèi)粘Ｉ钪谐Ｓ玫纳蛘吒山�。這種植物產(chǎn)于印度、南亞、東南亞,非洲,拉丁美洲和澳大利亞等地,可以單獨(dú)使用或作為香料化合物以及藥物使用。關(guān)于它的功效,最早在古代伊朗傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的食譜(ITM)中有記載,主要包括改善記憶和消化系統(tǒng)、壯陽(yáng)、潤(rùn)膚、驅(qū)蟲(chóng)以及治療咽喉痛、癱瘓、腹瀉和阻塞性黃疸。生姜的現(xiàn)代植物療法證實(shí)了其中的一些屬性。有的屬性仍有待研究。我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論認(rèn)為,生姜味辛性溫?zé)?具有解毒、發(fā)散風(fēng)寒、溫中止嘔、止咳化痰、溫肺化飲等功效。隨著現(xiàn)代中藥提純工藝和研究水平的提高,我們發(fā)現(xiàn)姜類(lèi)化合物在抗炎、抗腫瘤治療方面具有很好的療效。6-姜烯酚(6-shogoal,6-SH)是干姜中的主要活性成分,具有治療心血管疾病、胃潰瘍、老年癡呆、肝病等生物學(xué)活性。最近,其抗炎、抗腫瘤、抗氧化效應(yīng)等生物學(xué)活性亦逐漸得到了實(shí)驗(yàn)的印證。因此,關(guān)于6-姜烯酚的臨床及基礎(chǔ)研究備受?chē)?guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注。研究表明,6-SH不僅可以抑制環(huán)氧化酶、花生四烯酸等生成,抑制脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的前列腺素E2(PGE2)的產(chǎn)生,還能夠抑制中性粒細(xì)胞激活及抑制TNF-a、IL-1p、IL-6等炎性細(xì)胞因子釋放,但能否對(duì)急性肺損傷起到保護(hù)作用及其機(jī)制研究報(bào)道甚少。近年來(lái),計(jì)算機(jī)技術(shù)蓬勃發(fā)展,通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件來(lái)輔助藥物設(shè)計(jì)已日益成熟,因其迅捷、經(jīng)濟(jì)、高效的優(yōu)勢(shì),在藥物研發(fā)中發(fā)揮出日益重要的作用,其中,分子對(duì)接技術(shù)作為計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的關(guān)鍵技術(shù),已成為藥物研發(fā)中的一種重要方法,并成為國(guó)內(nèi)外研究的前沿課題。分子對(duì)接的原理是基于受體與配體之間的相互作用,通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件技術(shù)來(lái)分析預(yù)測(cè)其結(jié)合模式及親合力,從而實(shí)現(xiàn)基于分子結(jié)構(gòu)的一種藥物設(shè)計(jì)方法。在藥物設(shè)計(jì)的實(shí)踐中,我們發(fā)現(xiàn)它既可以針對(duì)藥物分子和其相應(yīng)的靶標(biāo)之間的作用信息,也可以用來(lái)開(kāi)發(fā)具有潛在作用的新藥。隨著計(jì)算機(jī)軟件的迅猛發(fā)展,一些簡(jiǎn)便易用的蛋白質(zhì)模擬、藥物的設(shè)計(jì)與優(yōu)化工具應(yīng)運(yùn)而生。通過(guò)高質(zhì)量的圖形界面、科學(xué)的函數(shù)計(jì)算以及集成的數(shù)字環(huán)境,使微觀的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能呈現(xiàn)于眼前。這種方法能夠從整體上觀察到配體與受體的結(jié)合效果,很好地避免了其他方法只研究微觀表現(xiàn),而缺乏整體認(rèn)識(shí)的弊端,因此,分子對(duì)接的方法可以與基因、蛋白表達(dá)方法互為補(bǔ)充,相得益彰。因此,本課題擬通過(guò)復(fù)制LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠動(dòng)物模型,從肺泡毛細(xì)血管通透性、炎癥因子表達(dá)、肺組織病理學(xué)表現(xiàn)、NF-κB定量分析及6-SH與NF-κB分子對(duì)接構(gòu)象分析五個(gè)方面探討6-姜烯酚對(duì)ALI的保護(hù)作用及機(jī)制。第一部分6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺泡毛細(xì)血管通透性的影響目的研究6-姜烯酚(6-shogoal,6-SH)對(duì)脂多糖(Lipopolysac-charide,LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(Acute Lung Injury,ALI)小鼠肺泡毛細(xì)血管通透性的影響。方法 健康雄性小鼠72只,隨機(jī)分為6組(n=12)：生理鹽水對(duì)照組(NS組),LPS模型組(L組),6-姜烯酚處理組1(L+SH1組,10mg/kg),6-姜烯酚處理組2(L+SH2組,20mg/kg),6-姜烯酚處理組3(L+SH3組,40mg/kg),地塞米松處理組(L+DEX 5mg/kg)。(1)生理鹽水對(duì)照組(NS組)：腹腔注射0.9%氯化鈉注射液(NS),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入NS50μl; (2)LPS模型組(L組)：腹腔注射0.9%氯化鈉注射液(NS),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl) (3)6-姜烯酚處理組1(L+SH1組,10mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 10mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl) (4)6-姜烯酚處理組2(L+SH2組,20mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 20mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入.LPS(10μg/50μl)(5)6-姜烯酚處理組3(L+SH3組,40mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 40mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl)。(6)地塞米松處理組(L+DEX組,5mg/kg):腹腔注射地塞米松(DEX 5mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS(10μg/50μl)。LPS或NS滴入后6h,頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物。檢測(cè)每組動(dòng)物支氣管肺泡灌洗液(BALF)中總細(xì)胞數(shù),中性粒細(xì)胞百分比,白蛋白濃度,檢測(cè)肺組織濕重與干重比(W/D)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用Dunnet T檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05,p≤0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。結(jié)果(1)BALF總細(xì)胞數(shù)：Dunnett方差分析顯示,與NS相比,L組BALF總細(xì)胞數(shù)增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),與L組相比,6-SH組和DEX組BALF中總細(xì)胞數(shù)降低(p0.01)。(2)BALF中性粒細(xì)胞數(shù)百分比：與NS組比較,L組BALF中性粒細(xì)胞數(shù)百分比升高(p0.01)；與L組比較,6-SH組和DEX組BALF中中性粒細(xì)胞數(shù)百分比降低(p0.01)；(3)BALF白蛋白濃度：與NS組比較,L組BALF白蛋白濃度升高(P0.01)；與L組比較,6-SH組和DEX組BALF中白蛋白濃度降低(p0.01),差異有顯著性。(4)W/D：與NS組比較,L組肺組織W/D升高(P0.01)；與L組比較,6-SH組和DEX組W/D降低(P0.01)。結(jié)論6-姜烯酚能夠減輕LPS誘導(dǎo)的ALI,其部分機(jī)制可能與抑制中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、降低肺泡毛細(xì)血管通透性、減輕肺水腫有關(guān),其效果與激素的抗炎作用相似。第二部分6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺泡灌洗液炎癥因子的影響目的 研究6-姜烯酚對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷(Acute Lung Injury,ALI)小鼠肺泡灌洗液炎癥因子的影響。方法 健康雄性小鼠72只,隨機(jī)分為6組(n=12)：生理鹽水對(duì)照組(NS組),LPS模型組(L組),6-姜烯酚處理組1(L+SH1組,10mg/kg),6-姜烯酚處理組2(L+SH2組,20mg/kg),6-姜烯酚處理組3(L+SH3組,40mg/kg),地塞米松處理組(L+DEX 5mg/kg)。(1)生理鹽水對(duì)照組(NS組)：腹腔注射0.9%氯化鈉注射液(NS),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入NS50μl; (2) LPS模型組(L組)：腹腔注射0.9%氯化鈉注射液(NS),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS(10μg/50μl)(3)6-姜烯酚處理組1(L+SH1組,10mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 10mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl )(4)6-姜烯酚處理組2(L+SH2組,20mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 20mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS(10μtg/50μl)(5)6-姜烯酚處理組3(L+SH3組,40mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 40mg/kg), 1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg /50μl)。(6)地塞米松處理組(L+DEX組 ,5mg/kg):腹腔注射地塞米松(DEX 5mg/kg), Ⅰ小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl)。LPS或NS滴入后6h,頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物。每組動(dòng)物檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細(xì)胞介素-113 (IL-1β),腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)的濃度。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用Dunnet T檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05,p≤0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0.結(jié)果(1)TNF-a:與NS組比較,L組肺組織TNF-a濃度升高(P0.01)；與L組相比,6-SH組和DEX組肺組織TNF-a濃度降低(P0.01)。(2) IL-1β:與NS組比較,L組肺組織IL-1p濃度升高(P0.01)；與L組相比,6-SH組和DEX組肺組織IL-1p濃度降低(P0.01) (3)IL-6:與NS組比較,L組肺組織IL-6濃度升高(P0.01)；與L組相比,6-SH組和DEX組肺組織IL-6濃度降低(P0.01)。結(jié)論6-姜烯酚能夠抑制LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠肺泡灌洗液中TNF-a、IL-1 β、IL-6濃度,其肺保護(hù)作用可能與抑制炎癥因子有關(guān)。第三部分6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性及肺組織病理學(xué)變化的影響目的研究6-姜烯酚對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(Acute Lung Injury,ALI)小鼠肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性及肺組織病理學(xué)變化的的影響。方法 健康雄性小鼠72只,隨機(jī)分為6組(n=12)：生理鹽水對(duì)照組(NS組),LPS模型組(L組),6-姜烯酚處理組1(L+SH1組,10mg/kg),6-姜烯酚處理組2(L+SH2組,20mg/kg),6-姜烯酚處理組3(L+SH3組,40mg/kg),地塞米松處理組(L+DEX 5mg/kg)。(1)生理鹽水對(duì)照組(NS組)：腹腔注射0.9%氯化鈉注射液(NS),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入NS50μl; (2)LPS模型組(L組)：腹腔注射0.9%氯化鈉注射液(NS),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl)(3)6-姜烯酚處理組1(L+SH1組,10mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 10mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl)(4)6-姜烯酚處理組2(L+SH2組,20mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 20mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS(10μg/50μl)(5)6-姜烯酚處理組3(L+SH3組,40mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH40mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl)。(6)地塞米松處理組(L+DEX組,5mg/kg):腹腔注射地塞米松(DEX 5mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl)。LPS或NS滴入后6h,頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物。取部分肺組織進(jìn)行病理切片染色,其余肺組織用來(lái)檢測(cè)肺組織勻漿中髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用Dunnet T檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05,p≤0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。結(jié)果病理所見(jiàn)：生理鹽水對(duì)照組表現(xiàn)為小鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常,細(xì)胞完整,肺泡腔清晰可見(jiàn),肺泡間隔未見(jiàn)水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。L組出現(xiàn)的肺損傷改變明顯：包括肺泡結(jié)構(gòu)破壞、細(xì)胞破壞、肺泡壁嚴(yán)重水腫、肺間質(zhì)部分增厚、肺泡腔滲出增多,大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、血管充血、出血。6-SH組和DEX組,均有不同程度的肺損傷,但較L組損傷減輕,其肺泡組織結(jié)構(gòu)尚可,肺間質(zhì)和肺泡腔內(nèi)滲出物較L組明顯減少,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象亦減輕。MPO：與NS組比較,L組肺組織MPO活性升高(P0.01)；與L組相比,6-SH組和DEX組肺組織MPO活性降低(P0.01)。結(jié)論 1、組織病理學(xué)檢查證實(shí)：6-姜烯酚能夠改善病理狀態(tài)下的肺組織,且成劑量依賴(lài)性。2、6-姜烯酚的肺組織保護(hù)作用可能與抑制MPO活性相關(guān)。第四部分6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織NF-κB信號(hào)通路的抑制作用目的研究6-姜烯酚對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALl)小鼠肺組織NF-κB信號(hào)通路的影響。方法 健康雄性小鼠72只,隨機(jī)分為6組(n=12)：生理鹽水對(duì)照組(NS組),LPS模型組(L組),6-姜烯酚處理組1(L+SH1組,10mg/kg),6-姜烯酚處理組2(L+SH2組,20mg/kg),6-姜烯酚處理組3(L+SH3組,40mg/kg),地塞米松處理組(L+DEX 5mg/kg)。(1)生理鹽水對(duì)照組(NS組)：腹腔注射0.9%氯化鈉注射液(NS),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入NS 50μl; (2) LPS模型組(L組)：腹腔注射0.9%氯化鈉注射液(NS),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl)(3)6-姜烯酚處理組1(L+SH1組,10mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 10mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μl)(4)6-姜烯酚處理組2(L+SH2組,20mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 20mg/kg), 1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS(10μg/50μl)(5)6-姜烯酚處理組3(L+SH3組,40mg/kg):腹腔注射6-姜烯酚(6-SH 40mg/kg), 1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS(10μg /50μl)。(6)地塞米松處理組(L+DEX 組,5mg/kg):腹腔注射地塞米松(DEX 5mg/kg),1小時(shí)后經(jīng)鼻氣管內(nèi)滴入LPS (10μg/50μ1)。LPS或NS滴入后6h,頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物。取部分肺組織液氮保存,用Western Blotting檢測(cè)肺組織NF-κB表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用Dunnet T檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,p≤0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,數(shù)據(jù)處理采用SPSS17.0。結(jié)果L組肺組織細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65含量顯著高于生理鹽水對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；與L組相比,6-SH干預(yù)組肺組織細(xì)胞核內(nèi)NF-κB p65含量下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論6-姜烯酚的肺組織保護(hù)作用可能與抑制NF-κB表達(dá)相關(guān)。第五部分6-姜烯酚與NF-κB分子對(duì)接蛋白構(gòu)象分析目的利用分子對(duì)接技術(shù),研究受體-配體間相互的作用,通過(guò)對(duì)6-姜烯酚與NF-κB分子對(duì)接蛋白構(gòu)象分析,評(píng)價(jià)6-姜烯酚對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響。方法使用Discoveray Studio 2.5新一代分子建模和模擬環(huán)境軟件,基于形狀匹配的分子對(duì)接程序,采用模擬蒙特卡羅方法在LigandFit模塊中將6-姜烯酚與NF-κB分子的活性位點(diǎn)進(jìn)行柔性對(duì)接,觀察配體結(jié)合取向、結(jié)合構(gòu)象以及形狀匹配等多種表現(xiàn)。整個(gè)過(guò)程分為9步：(1)載入受體蛋白文件(2)定義受體,在受體中搜索結(jié)合位點(diǎn)(3)運(yùn)行對(duì)接流程分析對(duì)接結(jié)果(4)優(yōu)化對(duì)接poses(5)配體對(duì)接pose的優(yōu)化(6)對(duì)優(yōu)化后的對(duì)接poses重新打分(7)分析優(yōu)化后重新打分的配體pose(8)運(yùn)行一致性打分(Consensus Score)流程(9)分析一致性打分結(jié)果結(jié)果6-SH與NF-κB的Lys145和Lys146氨基酸殘基末端結(jié)合,并且與Lysl45之間產(chǎn)生交互作用。同時(shí),6-SH能夠作用于深埋于NF-κB位于A鏈和B鏈之間的活性位點(diǎn),它們是位于NF-κB p50 B鏈的深裂內(nèi)層結(jié)構(gòu)的氨基酸殘基Tyr57, Val58, Cys59,Tyr143, Lys145, Lys146o最終一致性分析得分為41.27,配體內(nèi)部的能量為-3.52。結(jié)論6-姜烯酚通過(guò)與NF-κB活性位點(diǎn)結(jié)合,影響其調(diào)控的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
【關(guān)鍵詞】：6-姜烯酚 脂多糖 急性肺損傷 肺水腫 6-姜烯酚 脂多糖 急性肺損傷 炎癥細(xì)胞因子 6-姜烯酚 脂多糖 急性肺損傷 髓過(guò)氧化物酶 6-姜烯酚 脂多糖 急性肺損傷 NF-κB 6-姜烯酚 急性肺損傷 NF-κB 分子對(duì)接
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R563
【目錄】：

• 摘要3-11
• ABSTRACT11-30
• 前言30-34
• 第一部分 6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺泡毛細(xì)血管通透性的影響34-44
• 1 材料和方法35-37
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料35-36
• 1.2 方法36-37
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理37
• 2 結(jié)果37-40
• 2.1 BALF總細(xì)胞數(shù)37
• 2.2 BALF中性粒細(xì)胞數(shù)百分比37-38
• 2.3 BALF白蛋白濃度38
• 2.4 肺濕/千重比(W/D)38-40
• 3 討論40-43
• 4 結(jié)論43-44
• 第二部分 6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺泡灌洗液炎性因子的影響44-54
• 1 材料和方法45-48
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料45-46
• 1.2 方法46-48
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析48
• 2 結(jié)果48-50
• 2.1 BALF中TNF-α濃度檢測(cè)48
• 2.2 BALF中IL-1β濃度檢測(cè)48
• 2.3 BALF中IL-6濃度檢測(cè)48-50
• 3 討論50-53
• 4 結(jié)論53-54
• 第三部分 6-姜烯酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷小鼠肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性及肺組織病理學(xué)變化的影響54-63
• 1 材料和方法55-59
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料55-56
• 1.2 方法56-59
• 2 結(jié)果59-60
• 2.1 肺組織病理學(xué)檢查59-60
• 2.2 各組肺組織MPO活性比較60
• 3 討論60-62
• 4 結(jié)論62-63
• 第四部分 6-姜烯酚對(duì)NF-KB信號(hào)通路的抑制作用63-70
• 1 材料和方法64-67
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料64-65
• 1.2 方法65-67
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析67
• 2 結(jié)果67-68
• 3 討論68-69
• 4 結(jié)論69-70
• 第五部分 6-姜烯酚與NF-KB分子對(duì)接蛋白構(gòu)象分析70-80
• 1 材料和方法71-76
• 1.1 實(shí)驗(yàn)所需軟件71
• 1.2 所需功能模塊71
• 1.3 所需數(shù)據(jù)文件71
• 1.4 所需時(shí)間71
• 1.5 原理71-72
• 1.6 具體對(duì)接步驟72-76
• 2 結(jié)果76-77
• 3 討論77-79
• 4 結(jié)論79-80
• 參考文獻(xiàn)80-91
• 綜述91-106
• 參考文獻(xiàn)99-106
• 縮略詞簡(jiǎn)表106-107
• 博士研究生期間發(fā)表論文情況107-108
• 參加國(guó)內(nèi)國(guó)際會(huì)議108-109
• 致謝109-110

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本文編號(hào)：577344