本文關(guān)鍵詞：Ac-SDKP調(diào)節(jié)α-Ac-Tub對(duì)矽肺纖維化的抑制作用及其機(jī)制

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【摘要】：第一部分α-Ac-Tub在人體(煤)矽肺標(biāo)本中的表達(dá)及其病理學(xué)意義目的:觀察與分析α-Ac-Tub在人體(煤)矽肺標(biāo)本中表達(dá)及其臨床病理學(xué)的意義。方法:1(煤)矽肺患者樣本來(lái)自于59例尸檢病例,年齡最小30歲,最大77歲,平均年齡52歲。分別來(lái)自內(nèi)蒙、山西、湖南、河北等省煤礦以及水泥、陶瓷、耐火材料廠的工人(煤礦井下作業(yè)工人45例、其他作業(yè)工人14例)。其中Ⅰ期(煤)矽肺22例、Ⅱ期(煤)矽肺8例、Ⅲ期(煤)矽肺7例,(煤)矽塵性反應(yīng)22例。最短接塵史7年,最長(zhǎng)為46年,平均22年。13例對(duì)照組選取外科手術(shù)切除肺組織標(biāo)本(均為年齡相近無(wú)接塵史的臨床患者)。2 HE染色、Masson染色觀察病理形態(tài)變化。免疫組織化學(xué)染色法用以檢測(cè)肺組織中α-SMA、vimentin和α-Ac-Tub的表達(dá)情況。免疫熒光法檢測(cè)α-Ac-Tub和vimentin以及α-Ac-Tub和SP-A的共定位表達(dá)情況。結(jié)果:1在人體(煤)矽肺標(biāo)本中,能夠較好的觀察到矽肺病變發(fā)生演變的過(guò)程。既吞噬粉塵的巨噬細(xì)胞性肺泡炎---細(xì)胞性結(jié)節(jié)---細(xì)胞纖維性結(jié)節(jié)---纖維性結(jié)節(jié)(包括玻璃樣變性的結(jié)節(jié))。2α-SMA陽(yáng)性標(biāo)記的肌成纖維細(xì)胞定位分布于結(jié)節(jié)性病灶和彌漫性間質(zhì)纖維化區(qū)域。3α-Ac-Tub可表達(dá)于正常肺組織的多種細(xì)胞(包括支氣管上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞和肺成纖維細(xì)胞等)。在人體(煤)矽肺標(biāo)本中于病變區(qū)(結(jié)節(jié)性病灶和彌漫性間質(zhì)纖維化區(qū)域)缺失表達(dá)。4免疫熒光結(jié)果顯示在人體矽肺標(biāo)本中有α-Ac-Tub和vimentin、α-Ac-Tub和SP-A陽(yáng)性共定位表達(dá)的細(xì)胞,其中vimentin在病變纖維化區(qū)域的表達(dá)明顯增強(qiáng),而α-Ac-Tub和SP-A在病變的結(jié)節(jié)病灶和間質(zhì)纖維化區(qū)域缺失表達(dá)。第二部分ac-sdkp靶向調(diào)節(jié)α-ac-tub的表達(dá)對(duì)抑制大鼠矽肺纖維化的調(diào)控作用目的:采用支氣管灌注sio2構(gòu)建矽肺大鼠模型,并予以ac-sdkp抗纖維化治療和預(yù)防治療。通過(guò)對(duì)α-ac-tub、hdac6和α-sma在矽肺大鼠肺組織中的定位、分布與表達(dá)的觀察與分析,研究與探討α-ac-tub在矽肺發(fā)生過(guò)程中的作用,以及ac-sdkp對(duì)α-ac-tub調(diào)節(jié)在抑制矽肺纖維化形成時(shí)的作用與機(jī)制。方法:1采用非暴露式一次性灌注sio2構(gòu)建矽肺大鼠模型。實(shí)驗(yàn)分組為:1)對(duì)照4w組:在腹腔內(nèi)埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內(nèi)灌注1ml生理鹽水,飼養(yǎng)4w后處理動(dòng)物;2)對(duì)照8w組:腹腔內(nèi)埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內(nèi)灌注1ml生理鹽水,飼養(yǎng)8w后處理動(dòng)物;3)矽肺模型4w組:在腹腔內(nèi)埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內(nèi)灌注含有50mgsio2的1ml生理鹽水,飼養(yǎng)4w后處理動(dòng)物;4)矽肺模型8w組:在腹腔內(nèi)埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內(nèi)灌注含有50mgsio2的1ml生理鹽水,飼養(yǎng)8w后處理動(dòng)物;5)ac-sdkp抗纖維化治療組:支氣管內(nèi)灌注含有50mgsio2的1ml生理鹽水,在腹腔內(nèi)埋入注有2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,4w后更換為含有800μg/kg/dac-sdkp的2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,持續(xù)至8w后處理;6)ac-sdkp預(yù)防治療組:灌塵前48h腹腔內(nèi)埋入含有800μg/kg/dac-sdkp的2ml生理鹽水的微量緩釋膠囊,支氣管內(nèi)灌注含有50mgsio2的1ml生理鹽水,持續(xù)至8w后處理。2he染色觀察肺組織病理形態(tài);免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)α-ac-tub、α-sma、hdac6在肺組織中的定位、分布與表達(dá)。免疫熒光法檢測(cè)α-ac-tub和α-tub、α-ac-tub和sp-a、α-ac-tub和vimentin、hdac6和α-ac-tub、hdac6和α-sma的共表達(dá)。免疫印跡法(westernblot)檢測(cè)α-sma、α-ac-tub、hdac6和i型膠原的表達(dá)水平。結(jié)果:1he染色結(jié)果顯示,對(duì)照4w組和8w組大鼠雙側(cè)肺組織結(jié)構(gòu)清晰,未見(jiàn)明顯異常。矽肺模型4w組可見(jiàn)肺泡壁增寬,多伴有巨噬細(xì)胞和炎細(xì)胞的浸潤(rùn),可見(jiàn)細(xì)胞性矽結(jié)節(jié)的形成;矽肺模型8w組多見(jiàn)矽結(jié)節(jié)的融合,伴有間質(zhì)肺纖維化的形成。無(wú)論是ac-sdkp抗纖維化治療組還是預(yù)防治療組,其矽結(jié)節(jié)的面積較矽肺模型8w組顯著減小,肺組織內(nèi)纖維化程度明顯降低。2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,α-ac-tub除可強(qiáng)表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞外,還可在肺泡壁上的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá),使用不同公司商品化抗體均獲得一致的結(jié)果。免疫熒光結(jié)果顯示α-ac-tub存在和sp-a以及vimentin陽(yáng)性共表達(dá)細(xì)胞。3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,在對(duì)照組中,α-sma僅陽(yáng)性表達(dá)于氣管、血管的平滑肌細(xì)胞,而在矽肺模型組中,α-sma可強(qiáng)表達(dá)于矽結(jié)節(jié)和間質(zhì)纖維化區(qū)。而α-ac-tub除可陽(yáng)性表達(dá)于支氣管纖毛上皮細(xì)胞,而在肺泡壁上多種細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá);在矽肺模型組中,α-ac-tub在矽結(jié)節(jié)和間質(zhì)纖維化區(qū)域中缺失表達(dá),尚在矽結(jié)節(jié)周圍較為正常肺泡壁中仍存在明顯的陽(yáng)性表達(dá)。免疫印跡(westernblot)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,矽肺模型組的i型膠原、α-sma表達(dá)水平上調(diào),而α-ac-tub的表達(dá)下調(diào);給予ac-sdkp抗纖維化治療組或預(yù)防治療后,能夠顯著上調(diào)α-ac-tub的表達(dá),同時(shí)下調(diào)i型膠原和α-sma蛋白水平。4免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,hdac6在正常對(duì)照組中可陽(yáng)性表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞(胞漿表達(dá))和部分肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(核表達(dá))中,而在模型組中多表達(dá)于巨噬細(xì)胞和間質(zhì)纖維化區(qū)域(胞漿表達(dá))。免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,hdac6與α-sma多高表達(dá)于矽結(jié)節(jié)區(qū)域,而α-ac-tub陽(yáng)性表達(dá)多位于矽結(jié)節(jié)邊緣以及較為正常的肺泡壁上。免疫印跡(westernblot)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,模型組hdac6的表達(dá)顯著上調(diào),而給予ac-sdkp抗纖維化治療和預(yù)防治療均能夠顯著抑制hdac6的表達(dá)。第三部分ac-sdkp對(duì)α-ac-tub的調(diào)節(jié)抑制angⅡ介導(dǎo)的肌成纖維細(xì)胞分化的作用及其機(jī)制目的:原代培養(yǎng)的大鼠肺成纖維細(xì)胞,并予以angⅡ誘導(dǎo)分化為肌成纖維細(xì)胞。給予ac-sdkp、at1抑制劑valsartan、hdac6特異性抑制劑tcshdac620b和rock信號(hào)抑制劑y-27632預(yù)處理,觀察ac-sdkp是否可通過(guò)對(duì)at1、rock信號(hào)通路的調(diào)節(jié)而抑制hdac6的表達(dá),進(jìn)而穩(wěn)定α-ac-tub,發(fā)揮其抑制肌成纖維細(xì)胞分化的作用。方法:將原代培養(yǎng)大鼠肺成纖維細(xì)胞分組為:1)對(duì)照組;2)angⅡ誘導(dǎo)組;3)AngⅡ+Ac-SDKP組;4)AngⅡ+valsartan組;5)AngⅡ+TCS HDAC6 20b組;6)AngⅡ+Y-27632組。結(jié)果:1免疫熒光結(jié)果顯示,AngⅡ誘導(dǎo)后,α-Tub熒光強(qiáng)度并無(wú)明顯變化,而α-Ac-Tub熒光強(qiáng)度顯著降低。2免疫熒光結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,AngⅡ能夠顯著誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化,胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量交叉和平行排列的肌絲樣α-SMA蛋白在胞漿內(nèi)呈現(xiàn)少量綠色的微弱熒光表達(dá),α-Ac-Tub蛋白在胞漿以細(xì)胞核為中心呈現(xiàn)出放射狀細(xì)絲樣紅色熒光表達(dá);AngⅡ顯著促進(jìn)α-SMA的表達(dá),胞漿內(nèi)α-SMA呈現(xiàn)為或交叉或平行的肌絲樣結(jié)構(gòu),而標(biāo)記α-Ac-Tub的熒光明顯減弱。予以Ac-SDKP、valsartan、TCS HDAC620b以及Y-27632預(yù)處理,較于AngⅡ誘導(dǎo)組比較,能夠顯著減弱α-SMA的熒光強(qiáng)度,而增加α-Ac-Tub熒光表達(dá)。免疫印跡(western blot)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,AngⅡ組的Ⅰ型膠原和α-SMA表達(dá)水平顯著上調(diào),而α-Ac-Tub的表達(dá)下調(diào);予以Ac-SDKP、valsartan、TCS HDAC620b以及Y-27632預(yù)處理能夠顯著抑制AngⅡ誘導(dǎo)的相應(yīng)蛋白變化。3免疫印跡法結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,AngⅡ能夠顯著上調(diào)HDAC6的蛋白表達(dá)水平,而予以Ac-SDKP、valsartan、TCS HDAC620b以及Y-27632預(yù)處理,均能夠顯著抑制HDAC6蛋白水平表達(dá)的上調(diào)。結(jié)論:1α-Ac-Tub蛋白表達(dá)下調(diào)參與了矽肺纖維化發(fā)生、發(fā)展的調(diào)控。2 Ac-SDKP能夠通過(guò)AT1、HDAC6和ROCK信號(hào)的調(diào)節(jié),穩(wěn)定α-Ac-Tub蛋白的表達(dá),從而發(fā)揮抗矽肺纖維化的作用。
【關(guān)鍵詞】：N-乙酰基-絲氨酰-天冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸 矽肺 肌成纖維細(xì)胞 微管蛋白 乙�；�
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R135.2
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-14
• 英文縮寫(xiě)14-15
• 引言15-18
• 第一部分 α-Ac-Tub在人體（煤）矽肺標(biāo)本中的表達(dá)及其病理學(xué)意義18-43
• 前言18-20
• 材料與方法20-23
• 結(jié)果23-25
• 附圖25-36
• 討論36-39
• 小結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 第二部分 Ac-SDKP靶向調(diào)節(jié) α-Ac-Tub的表達(dá)對(duì)抑制大鼠矽肺纖維化的調(diào)控作用43-71
• 前言43-44
• 材料與方法44-49
• 結(jié)果49-51
• 附圖51-61
• 附表61-62
• 討論62-67
• 小結(jié)67-68
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 第三部分 Ac-SDKP對(duì) α-Ac-Tub的調(diào)節(jié)抑制AngⅡ介導(dǎo)的肌成纖維細(xì)胞分化的作用及其機(jī)制71-92
• 前言71-72
• 材料與方法72-77
• 結(jié)果77-79
• 附圖79-82
• 附表82-83
• 討論83-87
• 小結(jié)87-88
• 參考文獻(xiàn)88-92
• 結(jié)論92-93
• 綜述一 腎素-血管緊張素系統(tǒng)與器官纖維化93-106
• 參考文獻(xiàn)101-106
• 綜述二 微管蛋白的乙�；揎椗c器官纖維化106-120
• 參考文獻(xiàn)115-120
• 致謝120-122
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷122-124

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐洪;薛新新;杜世璞;李世峰;孫月;袁媛;鄧海靜;魏中秋;王瑞敏;楊方;;Ac-SDKP抗矽肺纖維化作用的比較蛋白組學(xué)研究[J];中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2014年08期

2 徐洪;孫月;徐丁潔;魏中秋;鄧海靜;杜世璞;薛新新;楊方;;α-平滑肌肌動(dòng)蛋白、波形蛋白在大鼠矽肺模型中表達(dá)的病理形態(tài)學(xué)特點(diǎn)及其意義[J];解剖學(xué)雜志;2014年03期

3 陳曉敏;郭俊明;樂(lè)東海;夏天;李克強(qiáng);;上皮 間質(zhì)轉(zhuǎn)化:腫瘤轉(zhuǎn)移的重要調(diào)控機(jī)制[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2013年09期

4 李旭;寧佐偉;羅薇;張文雍;余常輝;孟瑩;;腹腔持續(xù)注射血管緊張素(-1-7)對(duì)膽管結(jié)扎大鼠肝纖維化的抑制作用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年07期

5 尹剛;朱為勇;張華;李越凡;張春玲;;坎地沙坦對(duì)染塵大鼠肺纖維化的影響[J];中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2012年04期

6 史媛媛;申鳳俊;楊芳;;貝那普利對(duì)肝纖維化大鼠ACE2和Ang-(1-7)的影響[J];臨床肝膽病雜志;2011年03期

7 Regina Maria Pereira;Robson Augusto Souza dos Santos;Filipi Leles da Costa Dias;Mauro Martins Teixeira;Ana Cristina Simoes e Silva;;Renin-angiotensin system in the pathogenesis of liver fibrosis[J];World Journal of Gastroenterology;2009年21期

8 英嵩崧;李旭;黃茂梁;孟瑩;張振書(shū);;血管緊張素1-7對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)的影響[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年04期

9 錢桐蓀;;腎素-血管緊張素系統(tǒng)的新概念(下)[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2007年07期

10 劉成海;呂靖;;美國(guó)肝病學(xué)會(huì)肝纖維化專題會(huì)議報(bào)道[J];肝臟;2007年02期

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本文編號(hào)：542939