本文關(guān)鍵詞：肺炎支原體感染的臨床治療分析及免疫學(xué)致病機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae, MP)是人類支原體性肺炎的病原菌,近年來其感染表現(xiàn)為肺外并發(fā)癥多樣,難治性肺炎病例增多,其具體致病機制目前尚不明確。臨床治療MP感染的首選藥物是大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,然而MP23SrRNA基因突變會導(dǎo)致大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥,國內(nèi)外報道,MP耐藥基因突變株不斷增多,我國北京地區(qū)MP耐藥基因檢出率甚至高達90%。然而體外藥物敏感性試驗的結(jié)果不能代表藥物體內(nèi)真實的治療效果,而且由于肺炎支原體分離培養(yǎng)困難,目前MP對大環(huán)內(nèi)酯類藥物的體外敏感性試驗并不是臨床常規(guī)檢測項目。學(xué)者們建立了各種耐藥基因突變檢測方法,希望可以應(yīng)用于臨床肺炎支原體耐藥性檢測。本實驗旨在通過分析大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的臨床治療效果,評價進行MP耐藥基因檢測的臨床意義,并通過MP感染的大鼠模型探討MP致病的免疫學(xué)機制,以期為臨床治療肺炎支原體感染提供依據(jù)。 方法 1.MP感染的臨床治療分析。選取符合納入條件的66例疑為支原體肺炎的住院患者,男33例,女33例,采集患者肺泡灌洗液、痰及咽拭子標(biāo)本,PCR方法進行MP DNA檢測及包含有突變位點的933bp片段擴增,擴增片段進行核酸序列測定。結(jié)合病歷資料,選擇病人發(fā)熱天數(shù)、住院天數(shù)、使用激素及并發(fā)癥出現(xiàn)情況做為分析指標(biāo),對耐藥基因突變株與非突變株進行比較,分析大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的臨床治療效果。 2.MP免疫學(xué)致病機制研究。45只大鼠隨機分為感染組25只,對照組20只,感染組在無菌操作臺經(jīng)鼻連續(xù)4天接種100μ1 (106CFU/ml)MP,對照組同樣條件下經(jīng)鼻連續(xù)4天接種100μ1MP液體培養(yǎng)基。接種完成后1、3、5、8、10天時,分批處死感染組和對照組大鼠,采集肺泡灌洗液和肺組織。采用熒光定量PCR方法測定大鼠肺泡灌洗液中MP DNA含量,ELISA方法檢測肺泡灌洗液Th1/Th2類細胞因子,對大鼠肺組織標(biāo)本進行HE染色后進行肺組織病理學(xué)評分。分析大鼠感染MP后肺泡灌洗液中Th1、Th2類細胞因子的動態(tài)變化,研究MP感染與機體免疫系統(tǒng)間的相互作用,了解其致病機制。 結(jié)果 1.66例病人中46例病人MPDNA陽性,20例為陰性,肺泡灌洗液、痰液、咽拭子MP分離率分別為69.7%、18.2%、6.1%,肺泡灌洗液分離率高于痰液和咽拭子(P0.01)；46份MPDNA樣品中有31份存在耐藥基因突變,突變率為67.4%(31/46),均為2063A→G突變,并未發(fā)現(xiàn)其它位點突變；耐藥基因突變株(macrolide-resistant, MR)與非突變株(macrolide-susceptible, MS)病人的發(fā)熱天數(shù)、住院天數(shù)、激素使用及并發(fā)癥出現(xiàn)情況均無統(tǒng)計學(xué)差異(P值分別為0.459、0.632、0.793、0.575)。 2.感染組大鼠造模后第三天炎癥達到最重,肺組織病理評分為14.7(最高分為16分),第五天炎癥評分有所下降,病理評分為9.7分,對照組無明顯病理改變,感染組熒光定量PCR在整個過程中均能檢測到MP,且MPDNA含量相對穩(wěn)定,天間相比并無統(tǒng)計學(xué)差異;大鼠Thl類細胞因子IFN-γ在感染MP后升高,第3天達到峰值,且IFN-γ的水平與肺組織病理學(xué)評分呈正相關(guān)(R=0.900,P0.05),而Th2細胞因子IL-4在感染后并無明顯變化。 結(jié)論 本研究結(jié)果表明：MP大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因突變檢出率為63.4%,均為2063A→G突變；MP耐藥基因突變株與非突變株病人在發(fā)熱天數(shù)、住院天數(shù)、激素使用情況及并發(fā)癥情況上均無差別,大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的治療效果可能與其抑制細菌蛋白合成外的免疫調(diào)節(jié)活性有關(guān),因此建議臨床不必常規(guī)開展MP耐藥基因檢測；MP耐藥不導(dǎo)致患者病程延長及并發(fā)癥增多,因此推測本身攜帶耐藥基因可能不是導(dǎo)致難治性MP肺炎的主要原因,具體機制還有待于進一步研究；MP感染大鼠后促進炎癥的Thl類細胞因子升高,且其濃度與肺組織病理評分具有相關(guān)性,而起抗炎作用的Th2類細胞因子并無明顯變化,大鼠Thl/Th2類細胞因子表達失衡,這初步揭示了MP致病的免疫學(xué)機制,也提示我們對于MP感染的治療,可以從其致病的免疫學(xué)機制方面入手,采用一些免疫調(diào)節(jié)劑進行治療。
【關(guān)鍵詞】：肺炎支原體 大環(huán)內(nèi)酯類抗生素 耐藥基因 細胞因子
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R563.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-17
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-17
• 一、肺炎支原體感染的臨床治療分析17-26
• 1.1 對象和方法17-22
• 1.1.1 研究對象17-18
• 1.1.2 試劑與儀器18
• 1.1.2.1 材料與試劑18
• 1.1.2.2 實驗儀器與設(shè)備18
• 1.1.3 方法18-22
• 1.1.3.1 標(biāo)本采集18-19
• 1.1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株及臨床標(biāo)本中DNA的提取19-20
• 1.1.3.3 PCR反應(yīng)20
• 1.1.3.4 PCR擴增產(chǎn)物凝膠電泳分析20-21
• 1.1.3.5 PCR產(chǎn)物測序21
• 1.1.3.6 治療效果分析指標(biāo)21-22
• 1.1.4 統(tǒng)計學(xué)處理22
• 1.2 結(jié)果22-23
• 1.2.1 MP確證PCR結(jié)果22
• 1.2.2 耐藥基因檢測結(jié)果22-23
• 1.2.3 MR病人與MS病人治療效果評價結(jié)果23
• 1.3 討論23-26
• 二、肺炎支原體致病免疫機制研究26-35
• 2.1 對象和方法26-31
• 2.1.1 試劑與儀器26-27
• 2.1.2 方法27-31
• 2.1.2.1 MP復(fù)蘇培養(yǎng)及濃度測定27
• 2.1.2.2 實驗動物及接種27
• 2.1.2.3 標(biāo)本采集27-28
• 2.1.2.4 肺組織病理學(xué)評分28-29
• 2.1.2.5 肺泡灌洗液實時熒光定量PCR29-30
• 2.1.2.6 肺泡灌洗液IL-4、IFN-γ測定30-31
• 2.2 結(jié)果31-33
• 2.2.1 病理結(jié)果31
• 2.2.2 TH1/TH2細胞因子結(jié)果31-33
• 2.3 討論33-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-40
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明40-41
• 附錄41-44
• 綜述 肺炎支原體感染及耐藥研究進展44-60
• 綜述參考文獻56-60
• 致謝60

【引證文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 鞠麗麗;任歡;齊穎;顏廷宇;崔志剛;;肺炎支原體感染的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2013年26期

  本文關(guān)鍵詞：肺炎支原體感染的臨床治療分析及免疫學(xué)致病機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：414747