本文關(guān)鍵詞：同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)光氣引起肺損傷的保護(hù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離提純、鑒定及分化目的：探討SD大鼠BMD-MSCs進(jìn)行體外擴(kuò)增,并觀察其的生物學(xué)特性,表面標(biāo)記物及分化能力的鑒定。方法：全骨髓貼壁分離法分離SD大鼠骨髓細(xì)胞,傳代擴(kuò)增,倒置相差顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞。結(jié)果：原代細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形、旋渦狀生長(zhǎng),傳代細(xì)胞多成纖維形狀,第3代培養(yǎng)細(xì)胞表面分子CD29, CD90, CD44呈陽(yáng)性表達(dá),但不表達(dá)CD34及CD45。結(jié)論：1.全骨髓細(xì)胞貼壁分離法可以成功分離培養(yǎng)出干細(xì)胞并傳代擴(kuò)增至多代形態(tài)不變。2.經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定傳代過(guò)程中純度不斷提高。3.在體外一定誘導(dǎo)條件下成功誘導(dǎo)分化成成骨細(xì)胞和成脂肪細(xì)胞。第二部分同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)光氣引起肺損傷的保護(hù)作用目的：通過(guò)觀察光氣致肺損傷后大鼠癥狀、炎癥指標(biāo)及肺泡上皮細(xì)胞標(biāo)志物的變化,來(lái)探討B(tài)MD-MSCs干預(yù)是否對(duì)肺組織有保護(hù)作用。方法：1.取96只SD大鼠隨機(jī)分為4組,即K組：正常對(duì)照組經(jīng)尾靜脈注射1ml PBS:PH組：暴露與濃度為8.33g/m3的光氣中染毒；PM組：經(jīng)染毒后,經(jīng)尾靜脈注射1×106BMD-MSCs 1ml;KM組：干細(xì)胞對(duì)照組經(jīng)尾靜脈注射1×106 BMD-MSCs 1ml;造模后于6、24、48小時(shí)處死動(dòng)物收取標(biāo)本。2.腹主動(dòng)脈采血測(cè)血?dú)夥治?余離心留取上清后轉(zhuǎn)入-80℃保存待測(cè)。取右肺下葉測(cè)定肺濕重及干重,右肺中葉立即放入液氮中冷凍,后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中保存待測(cè)。取部分右肺上葉放入多聚甲醛中固定,用于組織形態(tài)學(xué)觀察,后通過(guò)氣管往肺葉內(nèi)注入適量OCT稀釋液,收集標(biāo)本制成冰凍切片,并在熒光顯微鏡下觀察攜帶GFP的干細(xì)胞。左肺行支氣管肺泡灌洗留取灌洗液待測(cè)。分別測(cè)定肺濕干比,血清及肺泡灌洗液TNF-α及IL-10及肺組織AQP5及SPC的mRNA表達(dá)量。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。不同處理組間資料均數(shù)比較采用析因設(shè)計(jì)資料的方差分析。各組間同一時(shí)間點(diǎn)之間的比較及組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)間的比較采用完全隨機(jī)資料的方差分析(one-way ANOVA法),以P0.05判斷差異有顯著性。結(jié)果：一般情況：PH組及PM組大鼠染毒后出現(xiàn)呼吸急促,肢體無(wú)力,嗜睡等表現(xiàn),但PM組癥狀較輕及恢復(fù)較快。W/D：PH組較K組的濕干比明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),PM組較PH組的濕干比下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。血?dú)夥治觯篜H組較K組的氧分壓低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；PM組較PH組的氧分壓高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。病理學(xué)：K組及KM組：肺組織結(jié)構(gòu)清晰,肺泡腔內(nèi)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡壁薄,間質(zhì)血管無(wú)擴(kuò)張,支氣管粘膜上皮完整。PH組：肺泡結(jié)構(gòu)廣泛被破壞,肺間質(zhì)輕度水腫,肺泡腔內(nèi)有較多量滲出的紅細(xì)胞及炎性細(xì)胞浸潤(rùn),后逐漸恢復(fù)。PM組：少部分肺泡結(jié)構(gòu)破壞,余肺組織及間質(zhì)結(jié)構(gòu)尚完整,部分肺泡間隔稍增寬,可見輕度肺間質(zhì)水腫,有少量紅細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。歸巢：PM組及KM組可見攜帶GFP的干細(xì)胞,但PM組明顯多于KM組。血清及BALF:1) TNF-α; PH組較K組的TNF-α濃度明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),PM組較PH組的TNF-α濃度低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2)IL-10：PH組較K組的IL-10濃度明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；PM組較PH組的IL-10濃度高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。肺組織肺泡上皮細(xì)胞標(biāo)志物mRNA含量：PH組及PM組的AQP5及SPC的mRNA含量在6小時(shí)開始下降,24小時(shí)下降至最低點(diǎn),后逐漸上升,PM與PH組間相同時(shí)間點(diǎn)及組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：經(jīng)尾靜脈注射BMD-MSCs后可以使大鼠的血液及肺泡灌洗液中抗炎因子IL-10升高、促炎因子TNF-α下降以及減緩SPC及AQP5下降,因此認(rèn)BMD-MSCs對(duì)光氣致急性肺損傷大鼠肺具有保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 鑒定 分化 光氣 急性肺損傷 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563.8
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 第一部分 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離提純、鑒定及分化10-23
• 前言10
• 1. 材料與方法10-14
• 2. 結(jié)果14-19
• 3. 討論19-22
• 4. 結(jié)論22-23
• 第二部分 同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)光氣引起肺損傷的保護(hù)作用23-43
• 前言23
• 1. 材料與方法23-30
• 2. 結(jié)果30-38
• 3. 討論38-42
• 4. 結(jié)論42-43
• 全文結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 綜述48-61
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 致謝61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 張智琳;周麗梅;江沂;林宏;;清熱化痰法對(duì)急性肺損傷大鼠干預(yù)作用的研究[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2013年12期

2 夏愛軍;張獻(xiàn)清;穆士杰;海春旭;梁欣;劉志新;張秋會(huì);張小樂;;紫外線照射充氧自血回輸對(duì)光氣中毒家兔氧自由基代謝的影響[J];西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志;2011年05期

3 許欣婷;董明清;胡美;徐敦全;李志超;吳昌歸;;骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液減輕脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷[J];中國(guó)病理生理雜志;2014年02期

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本文編號(hào)：407571