目的1探討共培養(yǎng)條件下轉染miRNA-101的骨髓間充質干細胞對大鼠肺泡巨噬細胞(Alveolar macrophages of rats,AMs)的內質網(wǎng)應激是否具有保護作用。2通過檢測AM內ERS相關標志物的變化,探討轉染miRNA-101的BMSCs發(fā)揮作用的可能機制。方法實驗分組及模型制備:選取4周齡左右的SPF級雄性SD大鼠全骨髓貼壁法體外培養(yǎng)SD大鼠BMSCs至第三代。使用CD90、CD106、CD45抗體經(jīng)流式細胞術對BMSCs進行鑒定,構建穩(wěn)轉miRNA-101的BMSCs,CCK-8檢測BMSCs,轉染miRNA-101的BMSCs,轉染空質粒的BMSCs的細胞活性;與經(jīng)過Si O2刺激的大鼠肺泡巨噬細胞株NR8383細胞構建transwell共培養(yǎng)體系,上室培養(yǎng)NR8383細胞,下室培養(yǎng)BMSCs,中間隔有通透性的聚碳酸酯膜,孔徑為0.4μm;實驗分為5組。對照組:NR8383細胞完全培養(yǎng);模型組:NR8383+Si O2(50μg/ml);BMSCs干預組BMSCs+(NR8383+Si O2)共培養(yǎng)組;miRNA-101組:過表達miRNA-101的BMSCs+...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1倒置相差顯微鏡下觀察BMSCs形態(tài)×200

華北理工大學碩士學位論文-14-設置酶標儀參數(shù)（測定波長為450nm，參比波長為650nm），利用酶標儀測量各組的OD值。2）Westernblot的測定及結果判定利用imagelab分析蛋白條帶的光密度值，計算各組目的蛋白與內參的比值，進行后續(xù)統(tǒng)計學分析。3）統(tǒng)計學處理建立EX....

圖2倒置相差顯微鏡下觀察NR8383細胞形態(tài)A×100,B×200

第1章實驗研究-15-細胞處于懸浮狀態(tài)。鏡下觀察見多為扁圓形或偶爾類似偽足樣的細胞形態(tài)（圖2）。1.2.3BMSCs表型鑒定結果流式細胞檢測第三代BMSCs表型鑒定結果顯示，CD106，CD90，陽性細胞總數(shù)占比分別為94.45%，99.26%；CD45陽性細胞占17.50%，符....

圖3流式細胞術對P3代BMSCs的表型鑒定

第1章實驗研究-15-細胞處于懸浮狀態(tài)。鏡下觀察見多為扁圓形或偶爾類似偽足樣的細胞形態(tài)（圖2）。1.2.3BMSCs表型鑒定結果流式細胞檢測第三代BMSCs表型鑒定結果顯示，CD106，CD90，陽性細胞總數(shù)占比分別為94.45%，99.26%；CD45陽性細胞占17.50%，符....

圖4熒光顯微鏡下觀察miRNA-101慢病毒轉染BMSCs結果×40

華北理工大學碩士學位論文-16-時間逐漸增加，并在72小時左右達到高峰。當MOI=5pfu/細胞時，可獲得最佳熒光強度和最高轉染效率。BMSC生長良好，無明顯死亡，表明轉染滴度對細胞生長和增殖影響很校慢病毒轉染72小時后，慢病毒的轉染效率達到約95％，滿足了本實驗的需要（圖4）。....

本文編號：3919503