本文關(guān)鍵詞：縫隙連接蛋白40與肺血管通透性的相關(guān)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察縫隙連接蛋白40(connexin 40,Cx40)以及參與維持血管屏障完整性的血管內(nèi)皮細(xì)胞鈣黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)在C57BL/6小鼠急性肺損傷模型不同時期的表達(dá)變化情況,并探究Cx40與肺血管通透性的功能相關(guān)性。方法C57BL/6小鼠腹腔注射內(nèi)毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),以腹腔注射生理鹽水為對照組,24小時后,分別行離體肺灌注,平穩(wěn)灌注后將左心房壓提高10cm H2O,檢測其肺重量變化情況以確保內(nèi)毒素引起急性肺損傷模型的可靠性,進(jìn)而采用蛋白免疫印跡的方法檢測腹腔注射LPS后6小時、24小時、3天后Cx40和VE-cadherin蛋白表達(dá)情況,以未處理組為空白對照;為研究Cx40與肺血管通透性的功能相關(guān)性,在C57BL/6小鼠離體肺灌注系統(tǒng)中使用血小板激活因子(platelet-activating factor,PAF)建立急性肺水腫模型,運用Cx40特異抑制模擬肽gap2740以及非選擇性縫隙連接抑制劑甘珀酸(carbenoxolone)進(jìn)行干預(yù),通過離體肺灌注系統(tǒng)檢測gap2740以及甘珀酸對PAF效果的影響,初步確定Cx40與肺血管通透性的功能相關(guān)性;使用凝血酶(thrombin)處理人肺血管內(nèi)皮細(xì)胞建立內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能破壞(即通透性增高)模型作為對照,運用甘珀酸進(jìn)行干預(yù),經(jīng)ECIS(Electric Cell-Substrate Impedance Sensing)檢測縫隙連接與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的關(guān)系;為進(jìn)一步探究敲除Cx40基因?qū)Ψ窝芡ㄍ感缘挠绊?通過離體肺灌注系統(tǒng)觀察PAF對Cx40基因敲除C57BL/6小鼠的影響,記錄肺重量變化情況,以使用PAF處理正常C57BL/6小鼠為對照結(jié)果腔注射LPS 24小時后其肺重量升高的程度明顯高于生理鹽水對照組,腹腔注射LPS可有效建立急性肺損傷模型,蛋白免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn),Cx40蛋白表達(dá)在腹腔注射LPS 6小時后明顯低于空白對照組,至24小時其蛋白表達(dá)水平繼續(xù)降低,第3天Cx40蛋白表達(dá)相較于第24小時的表達(dá)有所回升,VE-cadherin的蛋白表達(dá)水平變化與Cx40一致;C57BL/6小鼠離體肺灌注實驗中,PAF在短時間內(nèi)就可以引起肺重量急劇升高,導(dǎo)致強烈的肺水腫,而gap2740和甘珀酸均可以顯著緩解PAF致肺水腫效應(yīng),gap2740和甘珀酸的作用相當(dāng);經(jīng)ECIS檢測發(fā)現(xiàn),凝血酶可以明顯降低人肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的電阻抗,提示人肺血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加,而甘珀酸可以顯著緩解凝血酶的作用;在Cx40基因敲除C57BL/6小鼠離體肺灌注實驗中,相較于正常C57BL/6小鼠,PAF引起Cx40基因敲除C57BL/6小鼠發(fā)生急性肺水腫的作用明顯降低。結(jié)論在內(nèi)毒素引起的相對慢性肺損傷過程中,Cx40與VE-cadherin表達(dá)水平逐漸降低,并伴隨著血管通透性的增高;兩者表達(dá)水平在損傷和修復(fù)階段不斷發(fā)生變化,其變化情況一致。而在PAF以及凝血酶引起的相對急性肺損傷過程中,抑制Cx40以及縫隙連接可以有效緩解肺血管通透性的增加。總而言之,Cx40和VE-cadherin之間的聯(lián)系以及Cx40和縫隙連接調(diào)控肺血管通透性的分子機制有待于更加深入的研究。
【關(guān)鍵詞】：急性肺損傷 肺血管通透性 縫隙連接蛋白40 血管內(nèi)皮細(xì)胞鈣黏蛋白
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12-16
• 第一節(jié) Cx40及VE-cadherin在肺損傷不同時期的表達(dá)變化情況16-21
• 1 實驗材料16
• 1.1 實驗儀器16
• 1.2 實驗試劑與藥品16
• 2 實驗方法16-17
• 2.1 腹腔注射LPS 24h后行離體肺灌注檢測Kf16-17
• 2.2 Western Blot方法檢測Cx40和VE-cadherin表達(dá)17
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)方法17
• 3 結(jié)果17-21
• 3.1 LPS有效建立急性肺損傷模型17-18
• 3.2 LPS引起C57BL/6 小鼠肺中Cx40及VE-cadherin的表達(dá)隨時間發(fā)生變化18-21
• 第二節(jié) 研究Cx40與肺血管通透性的關(guān)系21-27
• 1 實驗材料21-22
• 1.1 實驗儀器21
• 1.2 實驗抗體及試劑21
• 1.3 主要工作液配制21-22
• 2 實驗方法22-24
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)22
• 2.2 離體肺灌注系統(tǒng)中使用PAF建立急性肺水腫模型22
• 2.3 PAF建立急性肺水腫模型中應(yīng)用gap27~(40)及甘珀酸22-23
• 2.4 ECIS檢測運用凝血酶建立內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能破壞模型和運用gap27~(40)及甘珀酸干預(yù)效果23
• 2.5 Cx40基因敲除C57BL/6 小鼠離體肺灌注23-24
• 3 結(jié)果24-27
• 討論27-30
• 參考文獻(xiàn)30-36
• 綜述36-55
• 參考文獻(xiàn)47-55
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文55-56
• 致謝56

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