目的:通過探究轉染DCN基因對成纖維細胞TGF-β1、Smad3、Smad7表達及細胞增殖的影響,探討DCN基因對TGF-β1/Smads信號通路的調控作用機制。方法:采用Real time PCR檢測TGF-β1、Smad3和Smad7基因的表達變化。結果:通過對轉染后的成纖維細胞進行Real time PCR檢測、細胞增殖檢測:轉染組與對照組相比,DCNmRNA、Smad7mRNA表達量明顯增加,而TGF-β1mRNA、Smad3mRNA表達量明顯減少,差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論:通過轉染DCN基因對COPD大鼠氣道成纖維細胞影響的實驗觀測(TGF-β1、Smad3和Smad7)基因的表達變化,轉染DCN基因對TGF-β1/Smads信號通路產(chǎn)生抑制作用,干預成纖維細胞增殖速度。

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【文章目錄】：
1 試驗材料與分組
    1.1 試驗材料
    1.2 實驗分組
2 實驗方法
    2.1 從大鼠氣道成纖維細胞細胞中抽提總RNA
    2.2 基因的PCR擴增
    2.3 目的基因和載體連接、克隆
    2.4 質粒擴增
    2.5 質粒提取
    2.6 質粒鑒定
    2.7 質粒濃度純度測定
3 實驗結果
    3.1 菌落PCR鑒定結果
    3.2 菌落PCR呈陽性的質粒雙酶切鑒定結果
    3.3 質粒測序結果
    3.4 質粒濃度、純度測定
4 轉染DCN基因對COPD大鼠氣道成纖維細胞生物學行為影響
    4.1 組質粒轉染成纖維細胞
    4.2 Real time PCR檢測TGF-β1、Smad3和Smad7基因的表達變化
        4.2.1 Trizol法提取總RNA
        4.2.2 RNA的濃度、純度檢測
        4.2.3 變性瓊脂糖凝膠電泳(完整性檢測)
        4.2.4 Real time PCR檢測
5 統(tǒng)計學方法
6 實驗結果
    6.1 重組DCN基因質粒轉染成纖維細胞細胞48 h后顯微鏡觀察
    6.2 細胞提取總RNA的濃度、純度及完整性檢測
    6.3 轉染DCN基因后對各組TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA表達量影響
        6.3.1 DCN與TGF-β1、Smad3、Smad7的溶解和擴增曲線
        6.3.2 轉染DCN基因后各組TGF-β1、Smad3、Smad7,mRNA相對表達量變化
7 討 論
    7.1 TGF-β1/Smads信號傳導通路在COPD氣道重塑中的作用
    7.2 DCN對TGF-β1/Smads 信號傳導通路影響
    7.3 DCN、TGF-β1/Smads 信號傳導通路的動物實驗研究



本文編號：3786153