目的：本實(shí)驗(yàn)旨在研究細(xì)菌內(nèi)毒素(LPS)介導(dǎo)的肺巨噬細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB激活及其在細(xì)胞凋亡中的作用和機(jī)制，探討蛋白激酶C(PKC)在內(nèi)毒素激活NF-κB中的作用及地位。 方法：分離、純化及培養(yǎng)大鼠肺巨噬細(xì)胞；以不同濃度的LPS(0μg/ml，0.01μg/ml，0.1μg/ml，1μg/ml，10μg/ml)和不同作用時(shí)間(0min，5min，15min，30min，60min，120min)分別刺激小室培養(yǎng)的細(xì)胞單層，觀察NF-κB的核內(nèi)濃度及NO合成量的動(dòng)態(tài)變化，選擇LPS的最佳用量和作用時(shí)間；然后分成四組實(shí)驗(yàn)，設(shè)正常對照組，LPS處理組，特異性PKC抑制劑(Cal C)阻斷組，NF-κB抑制劑(PDTC)阻斷組；收集培養(yǎng)的單層細(xì)胞及培養(yǎng)液；采用夾心ELISA法定量測定細(xì)胞核提取物中的NF-κB水平；免疫組化法檢測NF-κB的核內(nèi)移位變化；硝酸還原酶法測定細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量；吖啶橙染色觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，凋亡電泳實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞凋亡后基因組DNA的斷裂情況。 結(jié)果： 1. 隨著LPS用量的增加及作用時(shí)間的延長，細(xì)胞核內(nèi)的NF-κB水平和培養(yǎng)液中NO含量逐漸增高。NF-κB核...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮寫一覽表
英文摘要
中文摘要
論文正文NF-κB、PKC在內(nèi)毒素誘導(dǎo)肺巨噬細(xì)胞活化及凋亡中的作用和機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    致謝
    圖片
    參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述LPS激活靶細(xì)胞NF-κB的機(jī)制與途徑的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
在讀研究生期間發(fā)表的文章



本文編號：3782196