目的探討干擾素-γ（IFN-γ）作用后的小鼠肺微血管內(nèi)皮細胞（PMVECs）對共培養(yǎng)T淋巴細胞增殖的影響,并探討其可能的機制。方法分離雌性Balb/C小鼠肺組織,采用組織塊貼壁法培養(yǎng)PMVECs;經(jīng)倒置顯微鏡、透射電鏡觀察及內(nèi)皮細胞表面標志CD31熒光檢測鑒定,證實為PMVECs且純度＞ 95%。在Transwell板下層小室中加入PMVECs,隨機分為空白對照組、10 ng/m L組、20 ng/m L組、50 ng/m L組、80 ng/m L組,加入終濃度分別為0、10、20、50、80 ng/m L的IFN-γ,Transwell板上層小室中加入T淋巴細胞進行共培養(yǎng),采用流式細胞術(shù)檢測上層小室T淋巴細胞增殖指數(shù)。將第3代PMVECs隨機分為觀察組和對照組,分別加入終濃度為80 ng/m L的IFN-γ及等量PBS;采用反相高效液相色譜法檢測細胞培養(yǎng)上清中色氨酸、犬尿氨酸水平及吲哚胺2,3-加氧酶（IDO）活性,RT-PCR法及Western blotting法檢測細胞IDO mRNA及蛋白表達。結(jié)果空白對照組、10 ng/m L組、20 ng/m L組、50 ng/m L組、8... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 小鼠PMVECs分離、培養(yǎng)及鑒定
        1.2.1 小鼠PMVECs分離、培養(yǎng)
        1.2.2 小鼠PMVECs鑒定
            1.2.2. 1 形態(tài)學觀察
            1.2.2. 2 細胞表面抗原檢測
    1.3 不同濃度IFN-γ作用后的PMVECs對共培養(yǎng)T淋巴細胞增殖能力影響的觀察
        1.3.1 T淋巴細胞分離
        1.3.2 分組處理及T淋巴細胞增殖能力觀察
    1.4 IFN-γ對PMVECs培養(yǎng)液上清色氨酸、犬尿氨酸水平及細胞IDO表達影響的觀察
        1.4.1 細胞分組處理
        1.4.2 細胞培養(yǎng)上清中色氨酸、犬尿氨酸水平及IDO活性檢測
        1.4.3 細胞IDO mRNA表達檢測
        1.4.4 細胞IDO蛋白表達檢測
    1.5 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 各組T淋巴細胞增殖指數(shù)比較
    2.2 觀察組和對照組細胞培養(yǎng)上清中色氨酸、犬尿氨酸水平及IDO活性比較
    2.3 觀察組和對照組細胞IDO mRNA及蛋白表達比較
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]骨髓間充質(zhì)干細胞的吲哚胺2,3-雙加氧酶活性抑制T淋巴細胞的增殖[J]. 唐曉瓊,趙智剛,鄒萍.  中華器官移植雜志. 2005(11)



本文編號：3707685