目的:通過體外細胞實驗和整體動物模型,體、內(nèi)外研究異硫氰酸烯丙酯（AITC）對慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺支氣管上皮MRP1和Nrf2表達的影響。方法:體外:首先,自制香煙煙霧提取物（CSE）,采用MTT法觀察其對16HBE細胞的毒性,篩選CSE對16HBE細胞活力無明顯影響的濃度;其次,觀察CSE刺激16HBE細胞后,以Real time RT-PCR和Western Blotting法檢測Nrf2和MRP1的m RNA和蛋白表達;再次,仍采用Real time RT-PCR和Western Blotting法測定,在AITC干預作用下,CSE誘導的16HBE的Nrf2和MRP1的m RNA和蛋白表達。體內(nèi):首先采用煙熏復合氣管滴入脂多糖的方法制備大鼠COPD模型;然后觀察AITC對COPD大鼠呼吸功能及肺組織病理學改變的影響,并采用Real time RT-PCR技術檢測肺組織中MRP1,Nrf2基因的表達。結(jié)果:1.連續(xù)7天自制的香煙煙霧提取物經(jīng)分析表明其穩(wěn)定性好。2.MTT結(jié)果顯示香煙煙霧提取物對16HBE細胞的抑制率具有濃度依賴性和時間依賴性。10%及以下濃度對16HBE細... 

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
前言
    1. COPD
    2. 香煙煙霧與COPD
    3. MRP1
    4. AITC
    5. Nrf2
第一部分 AITC體外上調(diào)CSE誘導的MRP1和Nrf2基因和蛋白表達
    1 材料與儀器
        1.1 細胞株
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗試劑的配制
        1.4 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 香煙煙霧提取物的制備
        2.2 細胞培養(yǎng)技術
            2.2.1 細胞復蘇
            2.2.2 細胞傳代
            2.2.3 細胞凍存
        2.3 MTT法檢測香煙煙霧提取物對 16HBE細胞的毒性
        2.4 香煙煙霧提取物刺激 16HBE細胞后MRP1和Nrf2的基因和蛋白表達
            2.4.1 CSE干預細胞
            2.4.2 Real time RT-PCR方法檢測細胞m RNA
                2.4.2.1 細胞總RNA的提取
                2.4.2.2 RNA定量及純度鑒定
                2.4.2.3 RNA逆轉(zhuǎn)錄為c DNA
                2.4.2.4 Real time RT-PCR擴增目的基因
                2.4.2.5 Real time RT-PCR分析方法
            2.4.3 Western blotting檢測 16HBE細胞蛋白表達
                2.4.3.1 16HBE細胞總蛋白的提取
                2.4.3.2 BCA總蛋白定量法
                2.4.3.3 Western blotting操作步驟
        2.5 AITC預處理細胞后，CSE刺激 16HBE的MRP1和Nrf2基因和蛋白表達
        2.6 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計
    3.結(jié)果
        3.1 CSE的制備和OD值測定
        3.2 CSE對 16HBE細胞毒性的測定
        3.3 CSE干預 16HBE不同時間點MRP1和Nrf2的基因和蛋白表達
            3.3.1 CSE干預 16HBE不同時間點MRP1和Nrf2m RNA的表達
            3.3.2 CSE干預 16HBE不同時間點MRP1和Nrf2蛋白的表達
        3.4 AITC預處理后,CSE誘導 16HBE細胞MRP1和Nrf2的表達32
            3.4.1 AITC預處理后，CSE誘導 16HBE細胞MRP1和Nrf2的m RNA表達
            3.4.2 AITC預處理后，CSE誘導 16HBE細胞MRP1和Nrf2的蛋白表達
    4.討論
第二部分 AITC對COPD大鼠肺支氣管上皮中Nrf2、MRP1表達的影響
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗試劑
        1.3 實驗儀器
    2 方法
        2.1 COPD大鼠模型的建立
        2.2 分組及給藥
    3 指標的測定
        3.1 呼吸功能測定
        3.2 病理學檢查
            3.2.1 肺組織取材及石蠟切片的制作
            3.2.2 肺組織標本切片HE染色
        3.3 Real time RT-PCR技術檢測肺組織標本中MRP1、Nrf2基因表達
            3.3.1 肺組織總RNA的提取
            3.3.2 RNA定量及純度鑒定
            3.3.3 RNA逆轉(zhuǎn)錄為c DNA
            3.3.4 Real time RT-PCR擴增目的基因
            3.3.5 Real time RT-PCR分析方法
    4 結(jié)果
        4.1 大鼠一般情況
        4.2 大鼠肺功能變化
        4.3 光鏡下觀察HE染色后各組肺組織的病理學改變
        4.4 Real time RT-PCR技術檢測肺組織標本中MRP1、Nrf2基因表達
    5.討論
總結(jié)
參考文獻
綜述
    參考文獻
個人簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]化痰降氣膠囊對COPD模型大鼠支氣管上皮細胞中多藥耐藥相關蛋白1功能和表達的影響[J]. 汪電雷,張弦,陶秀華,張瑞,蔡莉,彭波,李澤庚.  中國中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2012(07)
[2]HE染色原理和試劑配制及染色過程中的若干問題的探討[J]. 李紅芬,鄭肇巽,馬品耀,平國強.  醫(yī)學信息(上旬刊). 2011(04)
[3]脂多糖結(jié)合熏煙法和單純熏煙法建立慢性阻塞性肺病大鼠模型的比較[J]. 宋小蓮,王昌惠,白沖.  第二軍醫(yī)大學學報. 2010(03)
[4]慢性阻塞性肺疾病動物模型研究進展[J]. 周紅艷,李建生.  中醫(yī)研究. 2009(05)
[5]N-乙酰半胱氨酸對煙霧暴露所致大鼠慢性阻塞性肺疾病模型的影響[J]. 蔡珊,陳平,張程,陳劍波,吳杰,羅曼.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2008 (08)

博士論文
[1]轉(zhuǎn)錄因子Nrf2在香煙煙霧誘導粘蛋白MUC5AC表達中的作用[D]. 應英華.浙江大學 2012

碩士論文
[1]慢性阻塞性肺疾病患者肺組織中Nrf2、Bach1、γ-GCS表達的研究[D]. 馮青青.鄭州大學 2013



本文編號：3674616