目的:研究血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2（angiotensin converting enzyme-2,ACE2）在大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（rat pulmonary microvascular endothelial cell ,RPMVEC）上的表達(dá),觀察脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）對(duì)RPMVEC的損傷作用及ACE2表達(dá)的影響。方法:采用RT-PCR、Western blot和免疫組化方法,檢測(cè)體外培養(yǎng)的RPMVEC是否表達(dá)ACE2;引入內(nèi)參半定量分析10μg/ml的LPS孵育RPMVEC后不同時(shí)相點(diǎn)ACE2表達(dá)的變化;用MTT比色法測(cè)定不同劑量LPS（0.1μg/ml-100μg/ml）作用后RPMVEC在540nm處的吸光度,以反映細(xì)胞存活率和代謝活性的變化。結(jié)果:1.體外成功分離培養(yǎng)出RPMVEC,并經(jīng)形態(tài)學(xué)及FITC-BSI結(jié)合實(shí)驗(yàn)證實(shí)。2.RT-PCR法從細(xì)胞總RNA中擴(kuò)增出ACE2的特異性條帶,Western blot法在細(xì)胞蛋白提取液中檢測(cè)出ACE2的蛋白印跡條帶,免疫組化實(shí)驗(yàn)表明ACE2免疫組化反應(yīng)產(chǎn)物主要位于RPMVEC的胞膜和胞漿。3.以10μg/... 

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞RPMVEC(原代)×100Fig.1PrimaryculturedRPMVEC×100

大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞RPMVEC(原代單層匯合)×100Fig.2PrimaryculturedRPMVECmonolayer×100

RPMVEC植物凝血素結(jié)合特性觀察×400Fig.3RPMVECboundtoFITC-labeledBSIunderfluorescencemicroscopy×400


本文編號(hào)：3671006