目的:特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化（IPF）是一種發(fā)病率和死亡率均較高的疾病,目前臨床上缺乏有效的治療措施。大量研究資料表明,TGF-β1是目前已知的最強(qiáng)烈的致纖維化細(xì)胞因子,在肺纖維化疾病進(jìn)程中,TGF-β1成為關(guān)鍵性因子之一,因此,抑制TGF-β1的基因表達(dá)有可能會(huì)延緩肺纖維化進(jìn)程。近年來隨著RNA干擾技術(shù)的開展,利用其可以產(chǎn)生相關(guān)基因的功能缺失,故被廣泛應(yīng)用到基因調(diào)控的研究中。本研究通過針對人TGF-β1的mRNA序列設(shè)計(jì)并構(gòu)建ShRNA真核表達(dá)載體,通過脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人LFb,觀察并分析其對人類肺成纖維細(xì)胞TGF-β1表達(dá)的抑制作用,探討用ShRNA防治肺纖維化的新途徑。方法:針對人類TGF-β1 mRNA的952-970的核苷酸序列合成1條TGF-β1 siRNA綠色熒光蛋白融合表達(dá)質(zhì)粒載體,在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人肺成纖維細(xì)胞,于轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h收集細(xì)胞和上清,在熒光顯微鏡下觀察干擾效果,采用ELISA動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞上清液中TGF-β1蛋白表達(dá)的變化及抑制效率、通過RT-PCR動(dòng)態(tài)觀察人肺成纖維細(xì)胞TGF-β1 mRNA的... 

【文章頁數(shù)】：38 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
提要
英文縮略表
第1章 前言
第2章 材料及方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器及材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)路線
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 TGF-Β15HRNA 真核表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
    3.2 人肺成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定
    3.3 綠色熒光顯微鏡下觀察質(zhì)粒轉(zhuǎn)染TGF-Β1 后的基因干擾效果
    3.4 人肺成纖維細(xì)胞中TGF-Β1 的MRNA 含量測定
    3.5 人肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清TGF-Β1 ELISA 測定結(jié)果
第4章 討論
    4.1 特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的治療現(xiàn)狀
    4.2 TGF-Β1 與肺纖維化的關(guān)系
    4.3 RNAI 技術(shù)靶向治療肺纖維化
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師及作者簡介
致謝
中文摘要
ABSTRACT



本文編號：3665257