MAPK4在內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷中的作用研究
發(fā)布時(shí)間：2022-02-15 02:29
本課題研究包括二部分,分述如下:目的:第一部分檢測(cè)MAPK4在內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷中的表達(dá);觀察MAPK4敲除對(duì)急性肺損傷的影響并探討其相關(guān)機(jī)制。第二部分觀察干擾MAPK4表達(dá)對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的影響。方法:第一部分1.利用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）按照10mg/kg的劑量對(duì)C57BL/6野生型小鼠（Wild type,WT）進(jìn)行腹腔注射,構(gòu)建小鼠急性肺損傷（Acute lung injury,ALI）模型;Real-time PCR檢測(cè)小鼠肺臟組織中MAPK4的mRNA水平;免疫印跡（Western blot,WB）檢測(cè)小鼠肺臟組織中MAPK4的蛋白水平;免疫熒光（Immunofluorescence,IF）檢測(cè)小鼠肺臟組織中MAPK4的表達(dá)及定位情況。2.利用LPS腹腔注射WT和MAPK4基因敲除(MAPK4-/-)小鼠,分別構(gòu)建ALI模型;觀察記錄兩組小鼠的生存情況;24h后取小鼠肺臟組織,記錄小鼠體重指數(shù)和肺臟臟器指數(shù)變化,并檢測(cè)肺臟干濕重比;BCA法檢測(cè)小鼠肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavag...
【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省
【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
正常肺臟與ALI/ARDS急性期肺臟Fig1.ThehealthlylungandtheactuephaseofALI/ARDS.(ThompsonBTetal.NEnglJMed.2017.)
遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文冒靈14重要原因之一就是，ALI/ARDS發(fā)生的分子病理機(jī)制十分復(fù)雜。因此，探討ALI/ARDS發(fā)生的分子病理機(jī)制，將會(huì)為臨床治療和預(yù)防藥物的開發(fā)提供新的潛在靶點(diǎn)。2MAPK家族概述絲裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinases,MAPKs)，即絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，可將細(xì)胞外信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)，參與真核細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等多種生物學(xué)過(guò)程[9-11]。MAPK家族分子包括經(jīng)典MAPK分子和非經(jīng)典MAPK分子，其中經(jīng)典MAPK分子有：細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶家族(JNK1/2/3)、p38異構(gòu)體(p38α/β/γ/δ)和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5(ERK5)，非經(jīng)典MAPK分子有：Nemo樣激酶(NLK)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶3(ERK3)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶4(ERK4)和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶7/8(ERK7/8)(圖2)[12,13]。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典MAPK分子中多個(gè)成員參與ALI的病理發(fā)生過(guò)程，如：圖2.MAPK信號(hào)通路Fig2.TheMAPKsignalingpathway.(CargnelloMetal.MicrobiolMolBiolRev.2011.)Carnesecchi等[14]研究發(fā)現(xiàn)在低氧誘導(dǎo)的小鼠ALI中，p-JNK和p-ERK的表達(dá)明顯增多；Schnyder-Candrian等[15]研究發(fā)現(xiàn)p38MAPK調(diào)節(jié)小鼠ALI急性期支氣管收縮，并且影響中性粒細(xì)胞招募過(guò)程；Schuh等[16]研究發(fā)現(xiàn)，使用ERK1/2的抑制劑U0126處理小鼠可以明顯減輕LPS誘導(dǎo)的肺損傷，表現(xiàn)為肺泡灌洗液中
遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文冒靈433結(jié)果3.1MAPK4-/-小鼠的鑒定根據(jù)TheJacksonLaboratory[18]，MAPK4-/-小鼠的構(gòu)建是利用基因同源重組，將MAPK4外顯子2的部分區(qū)域進(jìn)行了置換。我們提取小鼠基因組DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增后，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示：MAPK4-/-小鼠的PCR產(chǎn)物出現(xiàn)在330bp的位置，而WT小鼠的PCR產(chǎn)物出現(xiàn)在220bp的位置(圖1)，與公司提供的資料一致。圖1鑒定小鼠基因型。Fig.1Identificationgenetypeofmice.TheelectrophoresisofPCRproductsofWTandMAPK-/-miceon1%agarosegel.3.2MAPK4在小鼠ALI中的表達(dá)3.2.1小鼠ALI模型的建立我們根據(jù)前期研究利用LPS誘導(dǎo)小鼠ALI模型，如圖2-1A所示。HE染色結(jié)果顯示：與對(duì)照組小鼠相比，ALI模型小鼠肺臟組織中肺泡間質(zhì)明顯增厚，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)顯著增加(圖2-1B)。這些結(jié)果表明，我們成功建立了小鼠ALI模型。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MAPK4敲除對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的影響[J]. 冒靈,胡琳,劉士明,褚風(fēng)云,賈力,陳超,徐林. 中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2019(11)
[2]Upregulation of nemo-like kinase is an independent prognostic factor in colorectal cancer[J]. Wei Zhang,Jian He,Yan Du,Xian-Hua Gao,Yan Liu,Qi-Zhi Liu,Wen-Jun Chang,Guang-Wen Cao,Chuan-Gang Fu. World Journal of Gastroenterology. 2015(29)
本文編號(hào)：3625732
【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省
【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
正常肺臟與ALI/ARDS急性期肺臟Fig1.ThehealthlylungandtheactuephaseofALI/ARDS.(ThompsonBTetal.NEnglJMed.2017.)
遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文冒靈14重要原因之一就是，ALI/ARDS發(fā)生的分子病理機(jī)制十分復(fù)雜。因此，探討ALI/ARDS發(fā)生的分子病理機(jī)制，將會(huì)為臨床治療和預(yù)防藥物的開發(fā)提供新的潛在靶點(diǎn)。2MAPK家族概述絲裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinases,MAPKs)，即絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，可將細(xì)胞外信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)，參與真核細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等多種生物學(xué)過(guò)程[9-11]。MAPK家族分子包括經(jīng)典MAPK分子和非經(jīng)典MAPK分子，其中經(jīng)典MAPK分子有：細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶家族(JNK1/2/3)、p38異構(gòu)體(p38α/β/γ/δ)和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5(ERK5)，非經(jīng)典MAPK分子有：Nemo樣激酶(NLK)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶3(ERK3)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶4(ERK4)和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶7/8(ERK7/8)(圖2)[12,13]。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典MAPK分子中多個(gè)成員參與ALI的病理發(fā)生過(guò)程，如：圖2.MAPK信號(hào)通路Fig2.TheMAPKsignalingpathway.(CargnelloMetal.MicrobiolMolBiolRev.2011.)Carnesecchi等[14]研究發(fā)現(xiàn)在低氧誘導(dǎo)的小鼠ALI中，p-JNK和p-ERK的表達(dá)明顯增多；Schnyder-Candrian等[15]研究發(fā)現(xiàn)p38MAPK調(diào)節(jié)小鼠ALI急性期支氣管收縮，并且影響中性粒細(xì)胞招募過(guò)程；Schuh等[16]研究發(fā)現(xiàn)，使用ERK1/2的抑制劑U0126處理小鼠可以明顯減輕LPS誘導(dǎo)的肺損傷，表現(xiàn)為肺泡灌洗液中
遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文冒靈433結(jié)果3.1MAPK4-/-小鼠的鑒定根據(jù)TheJacksonLaboratory[18]，MAPK4-/-小鼠的構(gòu)建是利用基因同源重組，將MAPK4外顯子2的部分區(qū)域進(jìn)行了置換。我們提取小鼠基因組DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增后，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示：MAPK4-/-小鼠的PCR產(chǎn)物出現(xiàn)在330bp的位置，而WT小鼠的PCR產(chǎn)物出現(xiàn)在220bp的位置(圖1)，與公司提供的資料一致。圖1鑒定小鼠基因型。Fig.1Identificationgenetypeofmice.TheelectrophoresisofPCRproductsofWTandMAPK-/-miceon1%agarosegel.3.2MAPK4在小鼠ALI中的表達(dá)3.2.1小鼠ALI模型的建立我們根據(jù)前期研究利用LPS誘導(dǎo)小鼠ALI模型，如圖2-1A所示。HE染色結(jié)果顯示：與對(duì)照組小鼠相比，ALI模型小鼠肺臟組織中肺泡間質(zhì)明顯增厚，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)顯著增加(圖2-1B)。這些結(jié)果表明，我們成功建立了小鼠ALI模型。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MAPK4敲除對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的影響[J]. 冒靈,胡琳,劉士明,褚風(fēng)云,賈力,陳超,徐林. 中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2019(11)
[2]Upregulation of nemo-like kinase is an independent prognostic factor in colorectal cancer[J]. Wei Zhang,Jian He,Yan Du,Xian-Hua Gao,Yan Liu,Qi-Zhi Liu,Wen-Jun Chang,Guang-Wen Cao,Chuan-Gang Fu. World Journal of Gastroenterology. 2015(29)
本文編號(hào)：3625732
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