目的白細胞介素（interleukin,IL）-37是IL-1家族第7個成員,共有5種亞型（a-e）,對IL-37b的研究最為集中,在多種炎癥性疾病中發(fā)揮著重要的抗炎作用。香煙煙霧是慢性阻塞性肺疾�。╟hronic obstructive pulmonary disease,COPD）發(fā)病的主要因素,而COPD的發(fā)病進程與炎癥反應密切相關。近期研究發(fā)現(xiàn)在COPD患者的血清中,IL-37的表達水平較健康對照組顯著升高,表明IL-37可能參與COPD炎癥反應的過程。因此本研究制備IL-37慢病毒,構建香煙煙霧誘導的小鼠肺部炎癥模型,將IL-37慢病毒通過鼻滴注射到小鼠體內,使其在小鼠肺部過表達,探討IL-37在香煙誘導小鼠肺部炎癥中的作用和機制,為IL-37的臨床運用進一步提供實驗基礎。方法1.把IL-37慢病毒表達載體與3個慢病毒輔助質粒去除內毒素后,共轉染293T細胞。收集48 h、72 h、96 h產(chǎn)生的病毒上清,純化濃縮后得到IL-37慢病毒,使用梯度稀釋法測其滴度并檢測病毒的感染活性。2.建立香煙煙霧誘導的小鼠肺部炎癥模型,將收集到的慢病毒通過鼻腔進入到小鼠體內。C57BL/6雄... 

【文章來源】：寧波大學浙江省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
引言
1 IL-37 慢病毒表達載體的轉化及慢病毒包裝
    1.1 材料
        1.1.1 載體和菌株
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要培養(yǎng)基配置
    1.2 方法
        1.2.1 引物的設計與合成
        1.2.2 制備感受態(tài)細胞
        1.2.3 轉化
        1.2.4 菌落PCR鑒定
        1.2.5 質粒小量提取
        1.2.6 雙酶切鑒定
        1.2.7 無內毒素質粒的提取
        1.2.8 細胞的復蘇和培養(yǎng)
        1.2.9 IL-37 慢病毒包裝
        1.2.10 慢病毒滴度測定
        1.2.11 慢病毒活性檢測
    1.3 結果
        1.3.1 IL-37 慢病毒表達載體的轉化鑒定
        1.3.2 慢病毒包裝
        1.3.3 慢病毒滴度測定
        1.3.4 慢病毒表達檢測
    1.4 小結
2 IL-37 在香煙煙霧誘導小鼠肺部炎癥中的作用
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑及溶液配置
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 動物模型的建立
        2.2.2 小鼠組織標本的收集
        2.2.3 BALF細胞計數(shù)
        2.2.4 RT-PCR檢測肺組織中細胞因子的表達情況
        2.2.5 ELISA檢測細胞因子的變化
        2.2.6 檢測髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的變化
        2.2.7 HE染色
        2.2.8 PAS染色
        2.2.9 Western blot檢測NF-κB p65的表達
        2.2.10 統(tǒng)計學分析
    2.3 結果
        2.3.1 小鼠體重變化
        2.3.2 細胞計數(shù)
        2.3.3 RT-PCR檢測肺組織中細胞因子的變化
        2.3.4 BALF和肺組織細胞因子濃度的檢測
        2.3.5 檢測肺組織和血清中MPO濃度變化情況
        2.3.6 病理切片分析
        2.3.7 Western blot檢測NF-κB p65的表達
    2.4 小結
結論
參考文獻
附錄A 綜述
    參考文獻(References)
在學研究成果
致謝
Abstract



本文編號：3592508