目的白細(xì)胞介素（interleukin,IL）-37是IL-1家族第7個(gè)成員,共有5種亞型（a-e）,對(duì)IL-37b的研究最為集中,在多種炎癥性疾病中發(fā)揮著重要的抗炎作用。香煙煙霧是慢性阻塞性肺疾�。╟hronic obstructive pulmonary disease,COPD）發(fā)病的主要因素,而COPD的發(fā)病進(jìn)程與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。近期研究發(fā)現(xiàn)在COPD患者的血清中,IL-37的表達(dá)水平較健康對(duì)照組顯著升高,表明IL-37可能參與COPD炎癥反應(yīng)的過程。因此本研究制備IL-37慢病毒,構(gòu)建香煙煙霧誘導(dǎo)的小鼠肺部炎癥模型,將IL-37慢病毒通過鼻滴注射到小鼠體內(nèi),使其在小鼠肺部過表達(dá),探討IL-37在香煙誘導(dǎo)小鼠肺部炎癥中的作用和機(jī)制,為IL-37的臨床運(yùn)用進(jìn)一步提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1.把IL-37慢病毒表達(dá)載體與3個(gè)慢病毒輔助質(zhì)粒去除內(nèi)毒素后,共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。收集48 h、72 h、96 h產(chǎn)生的病毒上清,純化濃縮后得到IL-37慢病毒,使用梯度稀釋法測(cè)其滴度并檢測(cè)病毒的感染活性。2.建立香煙煙霧誘導(dǎo)的小鼠肺部炎癥模型,將收集到的慢病毒通過鼻腔進(jìn)入到小鼠體內(nèi)。C57BL/6雄... 

【文章來源】：寧波大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
引言
1 IL-37 慢病毒表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化及慢病毒包裝
    1.1 材料
        1.1.1 載體和菌株
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要培養(yǎng)基配置
    1.2 方法
        1.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        1.2.2 制備感受態(tài)細(xì)胞
        1.2.3 轉(zhuǎn)化
        1.2.4 菌落PCR鑒定
        1.2.5 質(zhì)粒小量提取
        1.2.6 雙酶切鑒定
        1.2.7 無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒的提取
        1.2.8 細(xì)胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)
        1.2.9 IL-37 慢病毒包裝
        1.2.10 慢病毒滴度測(cè)定
        1.2.11 慢病毒活性檢測(cè)
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 IL-37 慢病毒表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化鑒定
        1.3.2 慢病毒包裝
        1.3.3 慢病毒滴度測(cè)定
        1.3.4 慢病毒表達(dá)檢測(cè)
    1.4 小結(jié)
2 IL-37 在香煙煙霧誘導(dǎo)小鼠肺部炎癥中的作用
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑及溶液配置
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 動(dòng)物模型的建立
        2.2.2 小鼠組織標(biāo)本的收集
        2.2.3 BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.2.4 RT-PCR檢測(cè)肺組織中細(xì)胞因子的表達(dá)情況
        2.2.5 ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子的變化
        2.2.6 檢測(cè)髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的變化
        2.2.7 HE染色
        2.2.8 PAS染色
        2.2.9 Western blot檢測(cè)NF-κB p65的表達(dá)
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 小鼠體重變化
        2.3.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.3.3 RT-PCR檢測(cè)肺組織中細(xì)胞因子的變化
        2.3.4 BALF和肺組織細(xì)胞因子濃度的檢測(cè)
        2.3.5 檢測(cè)肺組織和血清中MPO濃度變化情況
        2.3.6 病理切片分析
        2.3.7 Western blot檢測(cè)NF-κB p65的表達(dá)
    2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A 綜述
    參考文獻(xiàn)(References)
在學(xué)研究成果
致謝
Abstract



本文編號(hào)：3592508