目的：慢性阻塞性肺疾病（COPD）沒有公認(rèn)的血液標(biāo)記物來幫助病情嚴(yán)重度和預(yù)后評估。肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子/趨化因子配體18（PARC/CCL-18）又名趨化因子配體-18（CCL18）是一種在血清中發(fā)現(xiàn)的肺部表達(dá)占優(yōu)勢的炎癥蛋白。本實(shí)驗(yàn)旨在利用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）測量不同分期慢性阻塞性肺疾�。–OPD）患者、健康體檢老年人血清中CCL18、白介素-16（IL-16）、白介素-6（IL-6）濃度，從而探討CCL18在COPD中應(yīng)用價值，以期評價其在慢性阻塞性肺疾病預(yù)后、嚴(yán)重程度的應(yīng)用價值。方法：選擇2012年9月1日至2014年3月10日于中國人民解放軍第309醫(yī)院呼吸內(nèi)科病房及門診就診的符合2011年慢性阻塞性肺疾病全球倡議（GlobalInitiative for Chronic Obstructive Lung Disease，GOLD）診斷標(biāo)準(zhǔn)的-COPD患者。實(shí)驗(yàn)分三組，A組為AECOPD組，B組為COPD穩(wěn)定期組，C組為健康體檢老年人作為對照組。其中AECOPD患者72人，COPD穩(wěn)定期48人，健康對照組40人。采集AECOPD患者入院第1天清晨空腹血清樣本，測定血清... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CCL18濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖 3 IL-16 濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線1.3.4 血清 IL-6 ELISA 步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋與加樣：標(biāo)準(zhǔn)品按說明書稀釋成五個梯度，各梯度每孔加樣為 50μl。2. 加樣：分別設(shè)待測樣品孔、空白孔。在酶標(biāo)包被板上待測孔中先加樣品液40μl，然后加待測樣品10μl。將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，不觸及孔壁，輕動混勻。3. 溫育：封板膜封板后置于37℃溫育30 分鐘。4. 配液洗滌：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍稀釋后備用；揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 棄去，重復(fù)5 次，拍干。5. 加酶：除了空白孔外，每孔加入酶標(biāo)試劑50μl。6. 溫育：同步驟3。

7℃避光顯色15分鐘。. 終止：每孔需加終止液50μl來終止反應(yīng)。（終止液顏色由藍(lán)色變黃色）0. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長按照順序測量各孔的吸光度（OD 值）。定必須在加終止液后15 分鐘內(nèi)進(jìn)行。1.計算：以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品OD 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物濃度與OD計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豚鼠中性粒細(xì)胞性哮喘模型的建立[J]. 李海銀,朱黎明,戴愛國,黃進(jìn),曾丹.  中華哮喘雜志(電子版). 2012(04)
[2]慢性阻塞性肺疾病診治指南（2007年修訂版）[J].   中華結(jié)核和呼吸雜志. 2007(01)



本文編號：3578613