鈣激活氯通道（Ca CC）廣泛表達(dá)于各組織及細(xì)胞中,在多種病理生理過程中起著舉足輕重的作用。研究表明,表達(dá)在氣道上皮細(xì)胞中的Ca CC介導(dǎo)了多種炎癥因子對黏液高分泌的調(diào)控過程�？缒さ鞍�16A（TMEM16A）已被證實是Ca CC的分子基礎(chǔ),可能是參與該過程的關(guān)鍵因子。本課題中,我們用白介素-13（IL-13）分別刺激人支氣管上皮細(xì)胞（HBE16）24-48小時后,結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)TMEM16A的m RNA和蛋白的表達(dá)均上調(diào)。而用信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子6（STAT6）特異性抑制劑AS1517499處理細(xì)胞后卻能下調(diào)TMEM16A的表達(dá)。該結(jié)果表明STAT6參與了IL-13對TMEM16A的調(diào)控機制過程。我們進一步研究發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染TMEM16A質(zhì)粒的HBE16細(xì)胞中,TMEM16表達(dá)增多,同時引起細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK1/2）的活化增強。而TMEM16A基因敲除或用T16Ainh-A01（TMEM16A特異性抑制劑）處理HBE16后,細(xì)胞內(nèi)TMEM16A表達(dá)被抑制,相應(yīng)地p-ERK1/2表達(dá)減少,并伴隨粘蛋白5AC（MUC5AC）m RNA及蛋白水平的下降。此外,我們在用TMEM16A質(zhì)粒... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

調(diào)節(jié)IL-13誘導(dǎo)TMEM16A表達(dá)Fig.1RegulationofIL-13inducedTMEM16A.TheHBE16cellswereexposedto100ng/mlIL-13for24,36,and48hours.(A)qRT-PCR

表達(dá)為了解 STAT6 的激活是否參與 IL-13 誘導(dǎo)的 TMEM16A 表達(dá)過程，我siRNA 敲除 HBE16 細(xì)胞中的 STAT6 基因后加入 IL-13 刺激。用 western blo測 p-STAT6、TMEM16A 的蛋白水平，用 ELISA 檢測 MUC5AC 的蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn)，與對照組細(xì)胞相比，特異性敲除 STAT6 基因后，明顯減弱了 p-STAT性（圖 2A），TMEM16A（圖 2B，圖 1C））和 MUC5AC（圖 2D，圖 2E）達(dá)也相應(yīng)地減少。另外，我們用 AS1517499，一種 STAT6 特異性抑制劑，處理 H細(xì)胞后，細(xì)胞中 TMEM16A（圖 2B，圖 1C））及 MUC5AC（圖 2D，圖 2平也都明顯降低。在相應(yīng)的藥物濃度條件下，細(xì)胞的數(shù)目未發(fā)生明顯改變，說明抑制劑對細(xì)胞本身沒有明顯的毒性作用。總之，上述結(jié)果表明，STAT6 參與了 HBE16 細(xì)胞中 IL-13 誘導(dǎo)的 TME及 MUC5AC 的表達(dá)。

TMEM16A調(diào)控ERK活性Fig.3ERK1/2activityassociatedwithTMEM16A.TheHBE16cellsweretransfectedwithcontrolorTMEM16Aexpressionvector.(A)TheexpressionofTMEM16AproteinwasmeasuredbyWesternblotting.(B)Theexpressionof


本文編號：3573257