研究目的:1、L929被TGF-β1刺激后miR-154的表達變化;2、過表達、干擾miR-154對L929生物學特性的影響;3、初步探索miR-154通過上調(diào)Wnt/β-catenin信號通路促進L929表型轉(zhuǎn)化的分子機制。研究方法:1、TGF-β1刺激L929表型轉(zhuǎn)化為肺肌成纖維細胞;2、將上述細胞分為5組:空白對照（Blank）組,干擾慢病毒空載體（sh-NC）組,過表達慢病毒空載（MCS-SV40-NC）組,干擾慢病毒（shmiR-154）組,過表達慢病毒（MCS-SV-miR-154）組分別轉(zhuǎn)染肺肌成纖維細胞,構(gòu)建過表達miR-154、干擾miR-154的細胞模型。3、q RT-PCR方法檢測慢病毒轉(zhuǎn)染5組細胞后miR-154表達情況;4、CCK8實驗檢測各組慢病毒轉(zhuǎn)染后的細胞活力;劃痕實驗和Transwell實驗觀察各組慢病毒轉(zhuǎn)染后細胞的遷移能力;流式細胞技術(shù)檢測各組慢病毒轉(zhuǎn)染后對細胞周期的影響;5、Western Blot、q RT-PCR檢測5組細胞慢病毒轉(zhuǎn)染后α-SMA、β-catenin、DKK2的蛋白、m RNA表達水平;研究結(jié)果:1、TGF-β1（5ng/ml/... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英縮略詞表
第1章 前言
    1.1 肌成纖維細胞生成是肺纖維化發(fā)生的重要環(huán)節(jié)
    1.2 Wnt/β-catenin信號通路激活肌成纖維細胞
    1.3 miRNAs與Wnt/β-catenin的交互作用成為研究肺纖維化的新寵
    1.4 本研究主要內(nèi)容
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗細胞來源
        2.1.2 主要試劑及來源
        2.1.3 主要儀器和設(shè)備
        2.1.4 主要試劑及液體配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞的復蘇、培養(yǎng)
        2.2.2 建立體外細胞模型
        2.2.3 L929細胞慢病毒轉(zhuǎn)染及分組
        2.2.4 qRT-PCR檢測L929細胞中miR-154表達
        2.2.5 Transwell實驗檢測轉(zhuǎn)染后L929細胞遷移能力的變化
        2.2.6 劃痕實驗
        2.2.7 CCK8實驗檢測L929細胞活力
        2.2.8 流式細胞儀分析細胞周期分布
        2.2.9 Western blot印跡法檢測蛋白表達
        2.2.10 qRT-PCR法檢測mRNA表達
    2.3 統(tǒng)計學處理
第3章 結(jié)果
    3.1 Western Blot檢測體外細胞模型結(jié)果
    3.2 L929細胞慢病毒轉(zhuǎn)染及分組
    3.3 qRT-PCR檢測L929細胞中miR-154表達
    3.4 Trannswell實驗檢測轉(zhuǎn)染miR-154后L929細胞遷移能力的變化
    3.5 劃痕實驗
    3.6 CCK8實驗轉(zhuǎn)染miR-154后檢測L929細胞增殖
    3.7 流式細胞儀分析細胞周期分布
    3.8 Western blot印跡法、qRT-PCR法檢測基因表達
第4章 討論
第5章 結(jié)論
第6章 不足與展望
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Bcl-2/Beclin-1復合體在自噬中的調(diào)節(jié)作用[J]. 葉挺,邵增務(wù).  中國生物化學與分子生物學報. 2013(06)
[2]DAPT對肺成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化中Wnt信號通路的影響[J]. 龔文穎,曾林祥.  實用醫(yī)學雜志. 2013(02)



本文編號：3569373