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哮喘發(fā)作患者外周血嗜酸細(xì)胞差異表達(dá)基因克隆及特性研究

發(fā)布時間:2022-01-03 03:16
  研究背景 支氣管哮喘(簡稱哮喘)是常見的慢性疾病,目前認(rèn)為哮喘是多種類型細(xì)胞控制和參與的以氣道炎癥、氣道重建及氣道反應(yīng)性增高為主要特征的慢性非特異性炎癥。由于哮喘臨床表型及對治療反應(yīng)的不均一性,哮喘更像是一種綜合征,而不是一個特殊的疾病實(shí)體。哮喘一直是全球關(guān)注的一個重要疾病,對哮喘的發(fā)病機(jī)制的研究也在不斷地深入。當(dāng)前哮喘的基礎(chǔ)研究涉及諸多領(lǐng)域,包括哮喘的遺傳學(xué)基礎(chǔ)、環(huán)境因素與哮喘、免疫機(jī)制(包括抗原遞呈、早期生活事件與哮喘,Th1/Th2平衡)及免疫治療、氣道炎癥及抗炎治療、氣道重建及防治措施等諸多方面。分子遺傳學(xué)的研究已經(jīng)證實(shí),哮喘是一種復(fù)雜的多基因遺傳病,哮喘的發(fā)生、發(fā)展是基因與環(huán)境因素共同導(dǎo)致的復(fù)雜過程。遺傳學(xué)為宿主對不同環(huán)境因素產(chǎn)生反應(yīng)提供了很好的基礎(chǔ),這在復(fù)雜疾病研究上起著重要作用,因此理解基因與環(huán)境相互作用的真正分子機(jī)制也是研究者所面臨的重要挑戰(zhàn)。 當(dāng)前針對哮喘氣道炎癥機(jī)制的研究則是哮喘藥物開發(fā)、哮喘基因治療的基礎(chǔ),也是當(dāng)前治療的主要靶點(diǎn)。盡管近十年來在哮喘的遺傳學(xué)方面取得了巨大的進(jìn)步,而哮喘變應(yīng)性炎癥產(chǎn)生有賴于眾多基因的調(diào)節(jié),因此去證實(shí)某些特異的與疾病發(fā)展相關(guān)... 

【文章來源】:南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】:105 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

哮喘發(fā)作患者外周血嗜酸細(xì)胞差異表達(dá)基因克隆及特性研究


圖I-2:EOS瑞士握姆薩染色:A10(10X凡I一二wiigt-CliemsastainingofEOS10f)0XB4印XB粼刃X

亮帶,治療前后


二_一一一一一一一翌進(jìn)坐竺湯一一一一l一4,圖1一5可以看出,etsetr在27個循環(huán)達(dá)平臺期,dri臺期。從此實(shí)驗(yàn)可知,用SPuerSMARTDcNAs”thessi增出質(zhì)高量足的EOSds一cDNA。果分析(圖-14,圖1·5)治療前后所擴(kuò)增出的EOSds一cD段集中于300bp一3以刃bp,其中在looobp處可見一亮帶,說量較好。

序列,接頭連接,效率,引物


酶切片段5’端分別與接頭1和接頭ZR連接后,利用接頭序列引物Pri刃nerl和G3PDH3’引物、G3PDH3’和5’引物分別擴(kuò)增看家基因G3PDH。PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳分析,并將圖像經(jīng)凝膠成像系統(tǒng)軟件分析,結(jié)果(見圖2一1)接頭序列引物Primerl和G3PDH3’引物擴(kuò)增產(chǎn)物較G3PDH3’和5’引物所得產(chǎn)物相差小于4倍,說明大多數(shù)cDNA片段都己經(jīng)連接上了設(shè)計(jì)的接頭,連接效率較高。圖2一l:接頭連接效率檢測Ijnlel:接頭R仙陰rl和G3DPH基因3’引物擴(kuò)增以連接A山甲tor產(chǎn)物沁川e:2G3DPH基因5’和3’引物擴(kuò)增以連接Ad即otrl的l的怡sertlcDNA為模板的etsertlcDNA為模板的產(chǎn)物;

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]嗜酸性粒細(xì)胞參與哮喘氣道重建的機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 趙海金,蔡紹曦.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2005(01)
[2]應(yīng)用Super SMART cDNA合成技術(shù)擴(kuò)增哮喘嗜酸性粒細(xì)胞總RNA[J]. 趙海金,蔡紹曦,鄒飛,佟萬成,萬為人.  第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(09)
[3]應(yīng)用抑制消減雜交克隆支氣管哮喘病人嗜酸細(xì)胞差異表達(dá)基因[J]. 徐勁松,蔡紹曦,鄒飛,佟萬成,趙海金.  第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(05)
[4]支氣管哮喘防治指南(支氣管哮喘的定義、診斷、治療及教育和管理方案)[J]. 中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組.  中華內(nèi)科雜志. 2003(11)



本文編號:3565452

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