目的:明確腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）對肺上皮A549細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）和金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs）家族基因表達(dá)的影響,初步探討晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（receptor for advanced glycation end products,RAGE）在肺上皮細(xì)胞炎性損傷后細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix,ECM）代謝中的作用及機(jī)制,為靶向調(diào)控急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）病程中ECM重塑提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:（1）通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測1ng/m L、10 ng/m L和50ng/m L TNF-α對A549細(xì)胞增殖活力的影響;（2）采用10ng/m L TNF-α誘導(dǎo)A549細(xì)胞構(gòu)建ARDS體外模型,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time polymerase c... 

【文章來源】：右江民族醫(yī)學(xué)院廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

總RNA樣本瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果圖

圖 2-1 TNF-α 對 A549 細(xì)胞活力的影響igure 2-1 The effect of TNF-α on the viability ofA549 ce（ ± ，*P< 0.05，vs. control)中 IL-8、RAGE、MMPs 和 TIMPs 轉(zhuǎn)錄水平的度、純度及完整性檢測檢測結(jié)果如表 2-1、圖 2-2 所示，結(jié)果提示，樣驗(yàn)需求，可用于后續(xù)的 RNA 反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)。表 2-1 樣品總 RNA 濃度和純度able 2-1 The concentration and purity of the total RNA1 組 2 組 control TNF-α control TNF-α con 772 1060 716 1014 672.042 2.008 2.023 2.028 2.0

2.2.2 TNF-α 對 A549 細(xì)胞中炎癥因子和 RAGE mRNA 轉(zhuǎn)錄水平的影響前炎癥因子 TNF-α 可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生炎癥損傷，為明確本研究 TNF-α 對 A549 的炎癥刺激效果，我們通過 qRT-PCR 技術(shù)分析 TNF-α 處理 A549 細(xì)胞對炎癥因子 IL-8 的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，RAGE 和 IL-8 基因的相對表達(dá)量與對照組相比，10ng/mL TNF-α 刺激A549 細(xì)胞 8h 后，細(xì)胞內(nèi) IL-8 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平升高約 100 倍（P＜0.01），且 TNF-α 組中 RAGE mRNA 較對照組明顯增加（P＜0.01），結(jié)果見表 2-2 和圖 2-3。表 2-2A549 細(xì)胞中 IL-8 和 RAGE 基因 mRNA 相對表達(dá)量（ ± ）Table 2-2 The relative mRNAexpression of IL-8 and RAGE inA549 cells指標(biāo) control TNF-α 組 t 值 P 值IL-8 1.00±0.01 103.97±2.07 49.642 ＜0.001RAGE 1.00±0.03 1.60±0.04 11.288 ＜0.001

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博士論文
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本文編號：3544728