本文關鍵詞：Fasudi1對脂多糖誘導小鼠急性肺損傷的保護作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：急性肺損傷(acute lung injury, ALI)／急性呼吸窘迫綜合癥(acute respiratory distress syndrome, ARDS)是一系列損傷因素如創(chuàng)傷、微生物感染、誤吸及藥物等所致的臨床危重癥,發(fā)病率及死亡率極高,目前治療手段有限,預后極差。級聯(lián)放大、失控的炎癥反應是發(fā)病的中心環(huán)節(jié),貫穿病程始終。研究證實Rho激酶可能是炎癥調(diào)控通路中的重要激酶之一。由于感染性致病因素是ALI/ARDS最常見的病因之一,本研究通過脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)建立小鼠敗血癥性ALI模型,探討Rho激酶抑制劑法舒地爾(fasudil)對LPS誘導的小鼠ALl的保護作用及其可能的機制。 方法：將C57BL/6小鼠按照隨機對照原則分為4組,即對照(control)組、LPS (30mg/kg)組、fasudil (10mg/kg)+LPS組、地塞米松(dexamethasone, Dex;5mg/kg)+LPS組。造模后統(tǒng)計各組不同時間點的生存率,通過分析生存曲線,評估fasudil對LPS導致的小鼠ALI的保護作用。其余小鼠于造模后6h處死,收集小鼠血清、支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)及肺組織標本。稱量肺組織濕重及干重,計算肺組織濕干重比(wet dry ratio, W/D)評估肺水腫程度；蘇木素-伊紅(haematoxylineosin, HE)染色觀察肺組織切片中炎癥細胞浸潤及組織損傷情況；檢測BALF中細胞數(shù)量及蛋白濃度反映肺部炎細胞及組織滲出程度變化；酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme-linked immunosorbent assay, ELIS A)法測定肺組織中性粒細胞髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)含量評價肺組織中性粒細胞浸潤情況；ELISA測定血清中腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor, TNF-α)、白細胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-10含量評價系統(tǒng)炎癥反應水平；蛋白質(zhì)印跡法(western blot)分析各組肺組織中B細胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2, bcl-2)、bcl-2相關X蛋白(bcl-2associated x protein,bax)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteine aspartic specific proteases,caspase)-3蛋白的表達以評估肺實質(zhì)細胞凋亡情況。 結果：1、LPS30mg/kg腹腔注射可誘導小鼠發(fā)生敗血癥ALI、死亡率顯著增加,fasudil和Dex可顯著改善ALl小鼠生存率、延長生存時間；2、LPS組W/D比值(5.10±0.61)較control組(4.01±0.41)顯著升高(P0.05),LPS+fasudil組(4.32±0.32)和LPS+Dex(4.27±0.33)組較LPS組顯著降低(P0.05)；3、HE染色觀察肺組織病理學變化,control組肺泡結構完整、肺泡壁僅有少許炎癥細胞,肺組織無出血、水腫改變,評分為10.83±0.87,LPS組小鼠肺泡結構紊亂,肺組織出血、水腫,存在炎細胞浸潤、肺泡壁增厚等現(xiàn)象,評分為10.83+0.87,顯著高于control組(P0.05)。LPS+fasudil組及LPS+Dex組肺組織病理學損傷評分分別為7.33+0.88和6.67±1.11,較LPS組顯著降低(P0.05)；4、LPS組BALF中細胞總數(shù)和中性粒細胞數(shù)分別為(17.92±2.99)×106/ml和(10.33±2.49)×106/ml,較control組(4.08±1.08)×106/ml和(1.92±0.66)×106/ml升高(P0.05),LPS+fasudil組、LPS+Dex組細胞總數(shù)分別為(14.17±2.21)×106/ml和(12.33±2.77)×106/ml,中性粒細胞數(shù)分別為(7.08±0.99)×106/ml和(5.08±1.93)×106/ml,均較LPS組降低(P0.05)。LPS組BALF中蛋白含量為(1032±207.2)μg/ml,較control組[(295.5±78.65)μg/m1]顯著升高(P0.05),LPS+fasudil組、LPS+Dex組BALF中蛋白含量分別為(563.3±96.60)μg/ml和(495.2±1469)μg/ml,較LPS組顯著下降(P0.05)；5、LPS組(3.46±0.62)小鼠肺組織MPO的含量顯著高于control組(1.07±0.44)(P0.05),LPS+fasudil組(2.42+0.70)和LPS+Dex組(2.19±0.40)MPO含量均較LPS組顯著降低(P0.05)；6、LPS組血清中TNF-α、IL-1p水平分別為(614.8±30.85) pg/ml、(88.45±7.47) pg/ml,均顯著高于control組[分別為(19.19±2.80) pg/ml、(23.02±3.39) pg/ml](P0.05); LPS+fasudil組、 LPS+Dex組TNF-α分別為(377.1±33.68)pg/ml和(39.08±5.723)pg/ml,IL-1β分別為(56.76+5.62)pg/ml和(47.14+3.70)pg/ml,較LPS組均顯著降低(P0.05)。LPS組血清中IL-10水平為(117.7+36.26)pg/ml,較control組[(16.734±3.66)pg/ml]顯著升高(P0.05), LPS+fasudil組、LPS+Dex組IL-10水平分別為(248.3±56.10)pg/ml和(311.6±51.5)pg/ml,較LPS組顯著升高(P0.05)；7、LPS組bax、cleaved caspase-3表達顯著高于control組(P0.05),LPS+fasudil組和LPS+Dex組較LPS組表達顯著降低(P0.05)。而bcl-2在fasudil組表達較LPS組升高(P0.05),LPS組bcl-2/bax較control組顯著降低(P0.05),LPS+fasudil組及LPS+Dex組較LPS組升高(P0.05)。 結論：Fasudil預保護可顯著減輕LPS誘導的小鼠ALI,改善小鼠的一般狀態(tài)及生存率,其保護作用可能通過緩解小鼠肺水腫和肺部炎癥細胞浸潤,平衡促炎和抗炎細胞因子的表達,減輕全身炎癥反應,抑制組織細胞凋亡實現(xiàn)。
【關鍵詞】：法舒地爾 急性肺損傷 TNF-α IL-1β IL-10 凋亡
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 中英文對照表5-7
• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-18
• 材料和方法18-31
• 結果31-40
• 討論40-44
• 結論44-45
• 參考文獻45-51
• 附錄 文獻綜述51-70
• 參考文獻62-70
• 攻讀學位期間發(fā)表論文情況70-71
• 致謝71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Min-Fu Tsan;;Heat Shock Protein and Innate Immunity[J];Cellular & Molecular Immunology;2004年04期

  本文關鍵詞：Fasudi1對脂多糖誘導小鼠急性肺損傷的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：332159