慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種具有氣道氣流受限特征的疾病,其氣流受限不完全可逆、呈進行性發(fā)展,與肺部對有害顆粒物或有害氣體異常炎癥反應有關�，F已公認,慢性持續(xù)性炎癥和氣道重塑是COPD的最主要的病理改變。作為世界第四大致死疾病,研究COPD的防治有著重要意義。 結締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一種促纖維化生長因子,它可以介導細胞外基質的產生和分化,可能成為纖維化疾病治療的新的靶點。 曲尼司特(tranilast)作為一種抗變態(tài)反應藥,可以穩(wěn)定肥大細胞和嗜堿粒細胞的細胞膜,抑制過敏性物質釋放。近年來發(fā)現其與轉化生長因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor,PDGF)和單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic peptide-1,MCP-1)等細胞因子有密切聯系,可抑制臟器纖維化、動脈粥樣硬化等。本研究通過曲尼司特對實驗性COPD大鼠模型進行干預研究,以期探討曲尼司特對COPD氣道重塑的可能作用。 第一部分COPD大鼠模型建立及曲尼司特對其形態(tài)學影響 目的:觀察曲尼司特對COPD實驗大鼠氣道重塑的干預作用,尤其是對膠原和病理形態(tài)的影響。 方法:將48只SD大鼠隨機分為模型組和治療組,另取8只SD大鼠作為對照組。模型組和治療組均用煙熏和氣管內注入脂多糖的方法建立COPD大鼠模型;每日胃管內灌注等量生理鹽水或曲尼司特(400mg·kg-1·d-1);對照組胃管內灌注以等量生理鹽水代替。每組動物分別于處理后第7d、14d、28d各處死8只進行相關檢測。檢測支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細胞總數及細胞分類;取肺組織作HE染色,行病理形態(tài)學檢查;天狼猩紅偏振光法觀察大鼠Ⅰ、Ⅲ型膠原分布和沉積情況,并行圖像分析。 結果:同模型組相比,治療組各組的BALF細胞總數和細胞分類中巨噬細胞的比率均明顯下降(P0.05);病理形態(tài)分析提示治療組的氣道壁厚度及腺體厚度/氣道壁厚度、血管壁厚度等均較模型組有所改善(P0.05);與對照組比較,模型組膠原沉積以Ⅰ型為主,28d時增生明顯;治療組與模型組相比,Ⅰ型膠原的沉積減少,但仍高于對照組。 結論:曲尼司特可以通過抑制肺內巨噬細胞來減輕氣道炎癥,還可以抑制肺內Ⅰ型膠原的合成,從而改善COPD大鼠的氣道重塑。 第二部分曲尼司特對COPD大鼠CTGF表達的影響 目的:探討曲尼司特對COPD大鼠肺組織中結締組織生長因子(CTGF)表達的影響。方法:48只SD大鼠隨機分為模型組和治療組,另取8只SD大鼠作為對照組。模型組和治療組均用煙熏和氣管內注入脂多糖的方法建立COPD大鼠模型;每日胃管內灌注等量生理鹽水或曲尼司特(400mg·kg~(-1)·d~(-1));對照組胃管內灌注以等量生理鹽水代替。每組動物分別于處理后第7d、14d、28d各處死8只。應用免疫組化法檢測COPD大鼠CTGF的表達,并與對照組比較。 結果:對照組及模型7d組和治療7d組肺組織CTGF蛋白均未表達,模型14d組和治療14d組開始表達,28d組表達最強。但曲尼司特治療28d組(2.8±0.3)與模型28d組(3.8±0.4)相比較,CTGF的表達減弱(P0.05)。 結論:脂多糖及煙熏能導致COPD大鼠氣道CTGF表達增強,而曲尼司特能在一定程度上抑制其表達,從而可能減輕COPD的氣道重塑。
【學位單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2005
【中圖分類】：R563.9
【部分圖文】：

近來許多病理學和形態(tài)學的研究進一步證實了這一氣道結構的改變（如圖 1 所示）。圖 1 氣道重塑的示意圖1.2.2 氣道重塑的發(fā)生機制氣道重塑的發(fā)生機制尚未完全闡明，但顯然與慢性炎癥密切相關，支氣管、肺的結構改圖 1 氣道重塑示意圖1.2.2 氣道重塑的發(fā)生機制氣道重塑的發(fā)生機制尚未完全闡明，但顯然與慢性炎癥密切相關，支氣管、肺的結構改變往往是慢性炎癥的后果，二者的發(fā)生機制也是環(huán)環(huán)相扣的�？梢哉f，氣道重塑這一復雜過程是從上皮損傷和炎癥反應開始的，上皮表型的改變不斷加重和放大這一過程。成纖維細胞和 ECM 在氣道重塑中起關鍵作用。ECM 蛋白不僅使氣道壁增厚僵硬，還促使炎性細胞活化并抑制其凋亡。成纖維細胞在氣道重塑過程中數量劇增，極為活躍，能產生膠原及無定形 ECM，使氣道壁纖維化。肌成纖維細胞還能分化成平滑肌細胞[23]。生長因子是一類調節(jié)細胞有絲分裂增殖的活性多肽，在氣道平滑肌增殖及 ECM 沉積中起重要作用。炎性細胞釋放的蛋白酶或化學因子，可將無活性生長因子前體轉為活性型。與氣道重塑關系較密切的生長因子有 TGF-β、表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)、堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor

α、EL-4、ET-1 等都具有上述生物活性。在對哮喘的研究中也發(fā)現：IGF-1 表達與膠原厚度、成纖維細胞數顯著相關；在含牛血清白蛋白的培養(yǎng)基中，TGF-β、EGF 能增加氣道平滑肌細胞 DNA 合成以促進細胞分裂增殖。研究表明，氣道慢性炎癥可激活某些細胞，使其釋放生長因子及其他致纖維化因子，誘導成纖維細胞轉化為成肌纖維細胞，使細胞增殖加速并合成、分泌細胞外基質成分，特別是膠原纖維，此種改變是 ECM 增厚的主要原因。2． 結締組織生長因子的研究進展.結締組織生長因子是新近報道的高度保守的即刻早期基因 CNN(CTGF，cyr，nov)家族成員之一，該家族包括CTGF(fisp12)、CYR61(cysteinerich61/CEFl0)、Nov(nephro blastomaover expressed)以及最新發(fā)現的 WISP1/elm1、WISP2/rCop1 和 WISP3(WISP、Wntinducible secreted protein)，其中的某些成員與機體組織的創(chuàng)傷修復過程密切相關，而這種關系是通過細胞的增殖分化過程中基因調控的具體形式表現出來的。CTGF 分子量為36～38KD，為一富含半胱氨酸的多肽，含 349 個氨基酸殘基。編碼人 CTGF 的基因位于染色體 6q23.1，內含 5 個外顯子和 4 個內含子（如圖 2 所示）。CTGF 基因最初是從人的臍靜脈內皮細胞 cDNA 文庫中克隆到的[31]。CTGF 的主要作用是：①促進細胞有絲分裂和成纖維細胞增殖，合成膠原[32]；②介導細胞趨化作用[33]；③誘導細胞凋亡[34]；④促進血管形成[35]。另外，在正常的生理過程如胚胎發(fā)生、移植及傷口愈合等的 ECM代謝中，CTGF 也起到重要作用。

0123456對照組M7天組M14天組M28天組T7天組T14天組T28天組原/Ⅲ膠ⅠIOD值Ⅲ型膠原*圖 1-4 各組大鼠Ⅰ、Ⅲ型膠原 IOD 值（n=8）與對照組比較 * P＜0.05；與相應模型組比較# P＜0.05
【參考文獻】

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