本文關(guān)鍵詞：SEC3對(duì)中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞黏蛋白分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 探討栓鏈因子復(fù)合物亞基Sec3對(duì)中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（NE）誘導(dǎo)的氣道上皮細(xì)胞黏蛋白分泌的影響。 方法： 1、體外培養(yǎng)人氣道上皮細(xì)胞16HBE，隨機(jī)分為8組： A組：空白對(duì)照組； B組：AG1487（表皮生長(zhǎng)因子受體磷酸化抑制劑）組； C組：Sec3siRNA組； D組：陰性siRNA對(duì)照組； E組：NE組； F組：NE+AG1478； G組：NE+Sec3siRNA組； H組：NE+陰性siRNA組； 2、以中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶（NE）作為刺激因素，構(gòu)建黏液高分泌模型，分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（rt-PCR）分析受刺激組和對(duì)照組MUC5AC的轉(zhuǎn)錄和分泌水平，Western印跡法分析磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體（p-EGFR）水平。 3、以AG1487作為抑制，阻遏表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路，采用Western-blot法檢測(cè)抑制組和對(duì)照組磷酸化EGFR水平，驗(yàn)證AG1487的抑制效應(yīng)，并分析比較抑制組和對(duì)照組黏蛋白的表達(dá)情況。 4、用Sec3-siRNA-pLKO.1lentiviral載體轉(zhuǎn)染Sec3siRNA，以抑制Sec3功能，，采用Western-blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組Sec3水平，確認(rèn)其轉(zhuǎn)染成功后，分析轉(zhuǎn)染組和對(duì)照組在中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶刺激下，MUC5AC轉(zhuǎn)錄和胞外分泌水平的變化。 結(jié)果： 1、中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶刺激下，MUC5AC的轉(zhuǎn)錄（E組：0.75±0.05）和胞外分泌水平(E組：0.80±0.09)顯著提高，（p㩳0.01），相應(yīng)，表皮生長(zhǎng)因子受體的磷酸化水平（E組：0.87±0.12）也明顯增加（p㩳0.01）。 2、加入表皮生長(zhǎng)因子受體磷酸化抑制劑后，p-EGFR水平下降（F組：0.13±0.06）（p㩳0.01），中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的刺激作用受到抑制，MUC5AC轉(zhuǎn)錄水平(F組：0.38±0.06)較未受抑制組(E組：0.75±0.05)顯著下降（p㩳0.01），分泌水平（F組：0.32±0.08）也隨之降低（p㩳0.01）。 3、轉(zhuǎn)染Sec3siRNA后，隨著Sec3蛋白表達(dá)的下降（G組：0.11±0.06）（p㩳0.01），MUC5AC的胞外分泌水平（G組：0.36±0.09）也顯著降低（p㩳0.01），但其轉(zhuǎn)錄水平（G組：0.72±0.04）并未受到影響（p㧐0.05）。 結(jié)論： 在NE誘導(dǎo)的人氣道上皮細(xì)胞黏液高分泌過程中，EGFR是介導(dǎo)MUC5AC合成的主要信號(hào)通路，栓鏈因子復(fù)合物亞基Sec3則對(duì)黏蛋白出胞分泌有重要的介導(dǎo)作用。
【關(guān)鍵詞】：黏蛋白類 中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶 栓鏈因子復(fù)合物 表皮生長(zhǎng)因子受體
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-8
• 中文摘要8-11
• ABSTRACT11-14
• 前言14-16
• 1 材料與方法16-24
• 1.1 材料16-17
• 1.2 方法17-24
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理24
• 2 結(jié)果24-28
• 2.1 各組細(xì)胞增殖活力的比較24-25
• 2.2 Western-blot 法檢測(cè) 16HBE 細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況25
• 2.3 各組細(xì)胞 EGFR 磷酸化水平的比較25-26
• 2.4 NE 和 EGFR 磷酸化抑制劑對(duì) MUC5AC 表達(dá)的影響26-27
• 2.5 轉(zhuǎn)染 Sec3 siRNA 對(duì) 16HBE 細(xì)胞 MUC5AC 表達(dá)及分泌的影響27-28
• 3 討論28-30
• 全文總結(jié)30-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 文獻(xiàn)綜述: Exocyst 復(fù)合物參與胞吐作用的研究進(jìn)展33-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 攻讀碩士學(xué)位期間完成的論文45-46

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李琪;周向東;;中性粒細(xì)胞彈力蛋白酶引起黏蛋白5AC高表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年05期

  本文關(guān)鍵詞：SEC3對(duì)中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞黏蛋白分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：278167