本文關(guān)鍵詞：SEC3對中性粒細胞彈性蛋白酶誘導(dǎo)氣道上皮細胞黏蛋白分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 探討栓鏈因子復(fù)合物亞基Sec3對中性粒細胞彈性蛋白酶（NE）誘導(dǎo)的氣道上皮細胞黏蛋白分泌的影響。 方法： 1、體外培養(yǎng)人氣道上皮細胞16HBE，隨機分為8組： A組：空白對照組； B組：AG1487（表皮生長因子受體磷酸化抑制劑）組； C組：Sec3siRNA組； D組：陰性siRNA對照組； E組：NE組； F組：NE+AG1478； G組：NE+Sec3siRNA組； H組：NE+陰性siRNA組； 2、以中性粒細胞彈性蛋白酶（NE）作為刺激因素，構(gòu)建黏液高分泌模型，分別采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（rt-PCR）分析受刺激組和對照組MUC5AC的轉(zhuǎn)錄和分泌水平，Western印跡法分析磷酸化表皮生長因子受體（p-EGFR）水平。 3、以AG1487作為抑制，阻遏表皮生長因子受體信號通路，采用Western-blot法檢測抑制組和對照組磷酸化EGFR水平，驗證AG1487的抑制效應(yīng)，并分析比較抑制組和對照組黏蛋白的表達情況。 4、用Sec3-siRNA-pLKO.1lentiviral載體轉(zhuǎn)染Sec3siRNA，以抑制Sec3功能，，采用Western-blot法檢測轉(zhuǎn)染組和對照組Sec3水平，確認其轉(zhuǎn)染成功后，分析轉(zhuǎn)染組和對照組在中性粒細胞彈性蛋白酶刺激下，MUC5AC轉(zhuǎn)錄和胞外分泌水平的變化。 結(jié)果： 1、中性粒細胞彈性蛋白酶刺激下，MUC5AC的轉(zhuǎn)錄（E組：0.75±0.05）和胞外分泌水平(E組：0.80±0.09)顯著提高，（p㩳0.01），相應(yīng)，表皮生長因子受體的磷酸化水平（E組：0.87±0.12）也明顯增加（p㩳0.01）。 2、加入表皮生長因子受體磷酸化抑制劑后，p-EGFR水平下降（F組：0.13±0.06）（p㩳0.01），中性粒細胞彈性蛋白酶的刺激作用受到抑制，MUC5AC轉(zhuǎn)錄水平(F組：0.38±0.06)較未受抑制組(E組：0.75±0.05)顯著下降（p㩳0.01），分泌水平（F組：0.32±0.08）也隨之降低（p㩳0.01）。 3、轉(zhuǎn)染Sec3siRNA后，隨著Sec3蛋白表達的下降（G組：0.11±0.06）（p㩳0.01），MUC5AC的胞外分泌水平（G組：0.36±0.09）也顯著降低（p㩳0.01），但其轉(zhuǎn)錄水平（G組：0.72±0.04）并未受到影響（p㧐0.05）。 結(jié)論： 在NE誘導(dǎo)的人氣道上皮細胞黏液高分泌過程中，EGFR是介導(dǎo)MUC5AC合成的主要信號通路，栓鏈因子復(fù)合物亞基Sec3則對黏蛋白出胞分泌有重要的介導(dǎo)作用。
【關(guān)鍵詞】：黏蛋白類 中性粒細胞彈性蛋白酶 栓鏈因子復(fù)合物 表皮生長因子受體
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-8
• 中文摘要8-11
• ABSTRACT11-14
• 前言14-16
• 1 材料與方法16-24
• 1.1 材料16-17
• 1.2 方法17-24
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理24
• 2 結(jié)果24-28
• 2.1 各組細胞增殖活力的比較24-25
• 2.2 Western-blot 法檢測 16HBE 細胞轉(zhuǎn)染情況25
• 2.3 各組細胞 EGFR 磷酸化水平的比較25-26
• 2.4 NE 和 EGFR 磷酸化抑制劑對 MUC5AC 表達的影響26-27
• 2.5 轉(zhuǎn)染 Sec3 siRNA 對 16HBE 細胞 MUC5AC 表達及分泌的影響27-28
• 3 討論28-30
• 全文總結(jié)30-31
• 參考文獻31-33
• 文獻綜述: Exocyst 復(fù)合物參與胞吐作用的研究進展33-44
• 參考文獻40-44
• 致謝44-45
• 攻讀碩士學(xué)位期間完成的論文45-46

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李琪;周向東;;中性粒細胞彈力蛋白酶引起黏蛋白5AC高表達的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年05期

  本文關(guān)鍵詞：SEC3對中性粒細胞彈性蛋白酶誘導(dǎo)氣道上皮細胞黏蛋白分泌的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：278167