本文關鍵詞：肺炎衣原體感染通過激活Racl誘導血管平滑肌細胞遷移，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學》 2013年

肺炎衣原體感染通過激活Racl誘導血管平滑肌細胞遷移

張俊霞  

【摘要】：目的 利用肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae, C.pn)體外感染大鼠原代血管平滑肌細胞(Vascular smooth muscle cell, VSMC)模型,觀察Racl活化在C.pn感染誘導VSMC遷移中的作用以及在此過程中Racl活化與PI3K、IQGAP1的聯(lián)系,探討其相關分子機制。 方法 1.C.pn增殖培養(yǎng)后體外感染大鼠原代VSMC; 2. GST pull-down實驗檢測C.pn感染VSMC后不同時間點Racl的活性； 3.用Racl特異性抑制劑NSC23766抑制Rac1的活性,GST pull-down實驗檢測VSMC內GTP-Racl的表達變化,Wound-healing實驗和Transwell實驗觀察VSMC遷移能力的改變； 4.用PI3K特異性抑制劑LY294002抑制PI3K的活性,GST pull-down實驗檢測VSMC內Rac1活性的變化,明確PI3K在C.pn感染誘導VSMC內Rac1活化過程中的作用； 5.用Rac1特異性抑制劑NSC23766抑制Racl的活性,Western blot實驗檢測VSMC內IQGAP1表達的變化,明確C.pn感染后VSMC內Racl活化對其下游效應蛋白IQGAP1的影響。 結果 1.目的質粒轉染大腸桿菌,體外制備足量有效與GTP-Racl特異結合的GST-PBD融合蛋白；分別于C.pn感染VSMC0h、0.5h、1h、2h、3h、6h、8h和12h后提取總蛋白,GST pull-down實驗結果顯示,C.pn感染VSMC0.5h后GTP-Racl表達水平開始升高；隨著感染時間延長其表達水平逐漸升高,3h左右達高峰,8h開始下降,并持續(xù)至12h；而各時間點VSMC中總Racl表達水平無顯著差異。 2. GST pull-down實驗結果顯示,使用Rac1特異性抑制劑NSC23766預處理VSMC后,C.pn感染誘導的VSMC內GTP-Racl的表達水平明顯降低。用NSC23766預處理的C.pn感染組的VSMC內GTP-Racl的表達水平較單純C.pn感染組明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義；各組VSMC中總Rac1表達無顯著差異。 3. Wound-healing實驗結果顯示,NSC23766預處理的C.pn感染組VSMC向劃痕中央遷移的面積明顯小于單純C.pn感染組(P0.05)；Transwell實驗結果顯示,NSC23766預處理的C.pn感染組VSMC的穿膜細胞數(shù)明顯低于單純C.pn感染組(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義。 4.使用PI3K抑制劑LY294002預處理VSMC, GST pull-down實驗結果顯示,LY294002預處理的C.pn感染組VSMC內GTP-Racl的表達水平較單純C.pn感染組明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義；各組VSMC中總Rac1表達無顯著差異。 5.使用Rac1特異性抑制劑NSC23766預處理VSMC, Western blot實驗結果顯示,50μMNSC23766預處理的C.pn感染組VSMC內IQGAP1的表達水平雖較單純C.pn感染組有所下降(P0.05),但差異無統(tǒng)計學意義；100μMNSC23766預處理的C.pn感染組VSMC內IQGAP1的表達水平較單純C.pn感染組則明顯降低(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義。 結論 C.pn感染可能通過激活Rac1促進VSMC遷移,且在此過程中Rac1的活化依賴PI3K的酶活性,活化的Rac1可影響其下游效應蛋白IQGAP1的表達,即C.pn感染可能通過PI3K活化Rac1進而激活IQGAP1促進VSMC遷移。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R563.19
【目錄】：

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本文編號：231371