本文關(guān)鍵詞：環(huán)孢素A治療博來霉素誘導的肺間質(zhì)纖維化及其機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學》 2012年

環(huán)孢素A治療博來霉素誘導的肺間質(zhì)纖維化及其機制的研究

任英  

【摘要】：背景 間質(zhì)性肺病(interstitial lung disease，ILD或DILD，diffuse interstitiallung disease)是以彌漫性肺實質(zhì)、肺泡炎癥和間質(zhì)纖維化為基本病理病變，以活動性呼吸困難、X線胸片彌漫性浸潤陰影、限制性通氣障礙、彌散功能(肺一氧化碳彌散量，DLCO)降低和低氧血癥為臨床表現(xiàn)的一類疾病。ILD中一部分患者繼發(fā)于類風濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多肌炎/皮肌炎、強直性脊柱炎及混合結(jié)締組織病，臨床上也很常見。間質(zhì)纖維化一旦形成，將不可逆地導致嚴重的甚至威脅生命的呼吸循環(huán)功能障礙。因此，加深對肺間質(zhì)纖維化機制，尤其是對其病程早期階段的認識，是該病發(fā)病機制和治療研究亟待解決的問題。 CD147，又稱為細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導因子（extracellular matrixmetaloproteinase inducer，EMMPRIN），屬于免疫球蛋白超家族，在體內(nèi)廣泛表達。Cyclophilin A（CyPA）是存在于多種細胞內(nèi)的細胞溶質(zhì)蛋白，CD147的配體，環(huán)孢素A（cyclosporine A，CsA）作用的靶分子。CsA是一種強效的免疫抑制劑，特異作用于淋巴細胞，臨床用于預防和治療同種異體器官移植或骨髓移植的排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)，也用于經(jīng)其他免疫抑制劑治療無效的狼瘡腎炎、難治性腎病綜合征等自身免疫性疾病。 本研究所以往研究報道，在炎癥病灶中高表達CD147分子的配體CyPA可趨化炎細胞在關(guān)節(jié)病灶中聚集，通過與CD147相互作用在RA關(guān)節(jié)內(nèi)、外病變的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮重要作用，CsA對上述病理過程有抑制作用。為了探明CyPA-CD147在肺間質(zhì)性病變中是否也存在相似的作用和機制，本實驗在前期工作的基礎(chǔ)上，建立肺間質(zhì)纖維化小鼠模型，研究其病程中的細胞與分子基礎(chǔ)，并用CsA進行早期干預治療，初步探討CD147-CyPA在肺間質(zhì)纖維化發(fā)病中的作用。 目的 建立肺間質(zhì)纖維化小鼠模型，觀察模型小鼠肺部炎性細胞浸潤及膠原纖維沉積的病理過程，探索其細胞與分子基礎(chǔ)。用CsA治療模型小鼠肺間質(zhì)炎癥及纖維化，探討其可能的機制。 方法和結(jié)果 1肺間質(zhì)纖維化小鼠模型及研究體系的建立 1.1肺間質(zhì)纖維化小鼠模型的建立 雌性，9～11周齡C57BL/6小鼠按照隨機數(shù)字表分為3組：模型組（BLM組）、鹽水對照組（saline組）和空白對照組（NC組），每組各24只。以5.0mg/kg（濃度2.0mg/ml）建立肺間質(zhì)纖維化小鼠模型，saline組在相同條件下向氣管內(nèi)注入同體積生理鹽水。 1.2檢測及研究 于給藥第4d、7d、14d分批取材，每次每組8只。實驗小鼠均經(jīng)眼球取血法取外周血500μL，肝素鈉抗凝。計數(shù)白細胞總數(shù)，流式細胞術(shù)檢測CD4~+T淋巴細胞、CD14~+單核細胞和CD19~+B淋巴細胞數(shù)量比例。剪取小鼠左上肺組織塊置100mL/L福爾馬林固定24h，經(jīng)脫水、石蠟包埋后，制作石蠟切片（切片厚度3μm），行HE及Masson染色。采用Ashcroft評分標準評價BLM組小鼠肺組織纖維化情況。細胞計數(shù)板計數(shù)BALF細胞總數(shù)，細胞涂片行Giemsa染色。 1.3結(jié)果 1.3.1外周血及BALF細胞分析 BLM組小鼠外周血白細胞總數(shù)明顯升高，在造模后第7d達高峰，為（10.96±0.35）×10~9/L，顯著高于同一時間點saline組（P0.01）。流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)CD14~+單核細胞在第4~14d的比例均數(shù)分別為5.94%、5.86%、4.76%，均較saline組顯著增高。CD19~+B淋巴細胞僅在造模第7d、14d較saline組升高明顯。各時間點NC組與saline組白細胞計數(shù)、CD14~+單核細胞及CD19~+B淋巴細胞相比均未見顯著差異。BLM組第4~14d時BALF細胞總數(shù)分別為（35.2±10.10）×10~6/肺、（23.1±15.52）×10~6/肺和（14.89±1.33）×10~6/肺，均較同一時間點saline組顯著升高。細胞分類計數(shù)顯示，BLM組BALF中升高的主要為淋巴細胞（7d：104.90/HP），至14d時仍維持在較高水平。其次為單核-巨噬細胞，中性粒細胞在早期（4d，7d）升高明顯。各時間點NC組與saline組BALF細胞計數(shù)、單核-巨噬細胞、淋巴細胞及中性粒細胞相比均未見顯著差異。 1.3.2肺組織病理觀察 肺組織病理觀察顯示，BLM組自實驗第4d開始肺泡間隔逐漸增寬，間質(zhì)內(nèi)細胞浸潤逐漸增多，以淋巴細胞為主，并有單核-巨噬細胞及中性粒細胞的浸潤。間質(zhì)內(nèi)及小支氣管周圍成纖維細胞自實驗第7d開始聚集逐漸增多，膠原纖維沉積增多，第14d時見肺組織結(jié)構(gòu)破壞，瘢痕形成。纖維化評分在第4d時平均為1.5分，隨著時間延長而增加，至第14d時為6.92分，纖維化明顯。Saline組及NC組各時間點肺組織均未見明顯炎癥及纖維化改變。 2環(huán)孢素A治療博來霉素誘導小鼠肺間質(zhì)纖維化的研究 2.1肺間質(zhì)纖維化小鼠模型的建立及治療 雌性，9～11周齡C57BL/6小鼠按照隨機數(shù)字表分為4組：CsA30mg治療組、CsA50mg治療組、治療對照組（BLM+saline組）和BLM組，每組各24只。以5.0mg/kg（濃度2.0mg/ml）建立肺間質(zhì)纖維化小鼠模型。于造模次日起腹腔注射給藥，治療組用CsA（30mg/kg，50mg/kg），溶于0.15ml生理鹽水中，治療對照組用同體積的生理鹽水，每日1次。BLM組不予處理。 2.2檢測及研究 于連續(xù)給藥第4d、7d、14d分批取材，每次每組8只。實驗小鼠均經(jīng)眼球取血法取外周血500μL，肝素鈉抗凝。計數(shù)白細胞總數(shù)，流式檢測CD4~+T淋巴細胞、CD14~+單核細胞和CD19~+B淋巴細胞比例。剪取小鼠左上肺組織塊置100mL/L福爾馬林固定24h，經(jīng)脫水、石蠟包埋后，制作石蠟切片（切片厚度3μm），行HE及Masson染色。免疫組化檢測CD147表達情況。采用Ashcroft評分標準評價BLM組小鼠肺組織纖維化情況。細胞計數(shù)板計數(shù)BALF細胞總數(shù)，細胞涂片Giemsa染色。 2.3結(jié)果 2.3.1外周血及BALF細胞分析 CsA治療后，實驗小鼠外周血白細胞總數(shù)在CsA30mg組為（5.11±0.25）×10~9/L，CsA50mg組為(5.63±0.34)×10~9/L，較BLM組（7.07±0.51）×10~9/L明顯降低（P＜0.01）；CsA治療組各時間點CD14~+單核細胞百分率均數(shù)顯著降低，以4d時最為明顯（＜3.2%）；CD19~+B淋巴細胞比例在4d時變化不明顯，7d、14d時其百分率均數(shù)分別為39.95%和37.22%，均顯著低于同一時間點BLM組（53.27%，P＜0.01）。各時間點BLM組和治療對照組白細胞計數(shù)、CD14~+單核細胞及CD19~+B淋巴細胞百分率均數(shù)相比均未見明顯差異。CsA治療組小鼠BALF總數(shù)在用藥初期即明顯減少，4d時30mg組BALF細胞總數(shù)為（4.47±0.88）×10~5/肺，50mg組為（14.67±0.26）×10~5/肺，較之BLM組(35.20±1.10)×10~6/肺顯著降低（P＜0.01）；CsA治療組各型細胞數(shù)量亦明顯下降，其中淋巴細胞下降最為明顯，每高倍鏡視野可見（16.56±6.44，25.29±14.16；vs BLM，，P＜0.01），并持續(xù)低水平至第14d（17.44±8.34；10.58±3.61），病變明顯改善。各組間中性粒細胞的比較在早期（7d、14d）有顯著統(tǒng)計學差異。各時間點BLM組和治療對照組BALF細胞計數(shù)、淋巴細胞、單核-巨噬細胞及中性粒細胞相比均未見顯著差異。 2.3.2肺組織病理觀察 CsA治療組肺間質(zhì)炎癥明顯減輕，且50mg組治療效果明顯好于30mg組，間質(zhì)內(nèi)及小支氣管周圍未見成纖維細胞明顯聚集及膠原纖維沉積增多。纖維化評分均小于2.0，提示肺部纖維化情況改善。治療對照組肺部可見明顯炎癥及纖維化改變，與BLM組相比無顯著差異。 2.3.3肺組織CD147的表達 BLM組小鼠肺組織內(nèi)浸潤的單核-巨噬細胞、中性粒細胞和淋巴細胞均高表達CD147分子，CsA治療組肺內(nèi)表達CD147的細胞明顯減少，但兩劑量組間未見明顯差異。 結(jié)論 本文成功建立了肺間質(zhì)纖維化小鼠模型及其研究體系，并用CsA進行治療研究。證明博來霉素誘導的肺間質(zhì)纖維化發(fā)病早期表現(xiàn)為全身和肺部大量炎性細胞聚集，啟動了炎癥反應(yīng)，隨著疾病發(fā)展，將導致晚期肺損傷和纖維化的發(fā)生。CsA早期應(yīng)用不僅可抑制炎癥，而且可抑制疾病發(fā)展，其可能的機制是通過阻斷CD147-CyPA相互作用，減少淋巴細胞、中性粒細胞及單核-巨噬細胞向肺內(nèi)的趨化聚集及其炎癥反應(yīng)。所建立的研究體系和實驗結(jié)果為深入研究提供了基礎(chǔ)和條件。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R563.9
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1 戎夢瑤;朵瑞雪;朱平;王聰華;汪莉;樊春梅;王彥宏;;細胞親環(huán)素A對單核來源泡沫細胞功能的影響[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年05期

【共引文獻】

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1 許文敏;張新霞;;親環(huán)素A在動脈粥樣硬化發(fā)生過程中的作用[J];嶺南心血管病雜志;2014年02期

2 任英;楊慧;朱平;樊春梅;王彥宏;李嘉;劉慧;;環(huán)孢素A抑制博來霉素誘導的小鼠肺間質(zhì)病變[J];細胞與分子免疫學雜志;2012年03期

3 魏傳鈺;劉運洪;龐偉;孟明耀;解燕華;薛莎;侯宗柳;;細胞因子誘導外周血單個核細胞的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達研究[J];中國細胞生物學學報;2013年12期

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1 唐振旺;Cyclophilin A基因多態(tài)性及其介導的炎癥反應(yīng)在冠心病中的作用[D];南華大學;2012年

2 李月峰;CD137-CD137L軸通過CyPA調(diào)節(jié)ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化的研究[D];江蘇大學;2014年

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1 王穗湘;隱孢子蟲CypA蛋白對單核巨噬細胞系THP-1細胞的免疫調(diào)控作用研究[D];暨南大學;2013年

2 許選選;親環(huán)素A對ox-LDL誘導的RAW264.7細胞中NF-κB、M-CSF和ZFP36表達的影響[D];南華大學;2013年

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1 王小平,李曉光,甘麗虹,王寶玲;中醫(yī)治療肺間質(zhì)纖維化22例[J];北京中醫(yī)藥大學學報;2001年01期

2 宋淑菊;段婷;;以肺間質(zhì)纖維化為首發(fā)表現(xiàn)的皮肌炎合并骨梗死1例[J];中國實用內(nèi)科雜志;2006年05期

3 崔永華;;肺間質(zhì)纖維化中醫(yī)證治探討[J];中國中醫(yī)急癥;2006年08期

4 尤雪娜;王艷軍;;鹽酸胺碘酮致重癥肺間質(zhì)纖維化一例[J];實用藥物與臨床;2007年01期

5 白麗;;肺間質(zhì)纖維化患者繼發(fā)真菌感染的危險因素分析[J];臨床醫(yī)藥實踐雜志;2007年02期

6 張慶團;覃善芳;;慢性阻塞性肺疾病合并肺間質(zhì)纖維化的臨床研究[J];檢驗醫(yī)學與臨床;2007年03期

7 于國強;呂曉東;;中醫(yī)藥治療肺間質(zhì)纖維化集粹[J];實用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2007年08期

8 羅東萍;張舸;鄒頊雯;;阿奇霉素治療肺間質(zhì)纖維化的臨床療效觀察[J];山西醫(yī)藥雜志;2007年08期

9 焦揚;周平安;;肺間質(zhì)纖維化的病因病機和辨證論治述要[J];北京中醫(yī);2007年10期

10 王勇;馬玉琛;;痰毒并治類風濕性關(guān)節(jié)炎致肺間質(zhì)纖維化[J];中國中醫(yī)急癥;2009年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳燕;王辛秋;晁恩祥;;晁恩祥個體化治療肺間質(zhì)纖維化的思路與經(jīng)驗[A];全國中醫(yī)內(nèi)科肺系病第十四次學術(shù)研討會論文集[C];2010年

2 魯玉桂;蔡小林;;一例肺癌繼發(fā)肺間質(zhì)纖維化患者的搶救及護理[A];第14屆全國老年護理學術(shù)交流會議論文匯編[C];2011年

3 魯玉桂;蔡小林;;一例肺癌繼發(fā)肺間質(zhì)纖維化患者的搶救及護理[A];中華護理學會第8屆全國造口、傷口、失禁護理學術(shù)交流會議、全國外科護理學術(shù)交流會議、全國神經(jīng)內(nèi)、外科護理學術(shù)交流會議論文匯編[C];2011年

4 宋正苓;;慢性阻塞性肺疾病合并肺間質(zhì)纖維化胸部影像學分析[A];中華醫(yī)學會第五屆全國胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學術(shù)會議論文匯編[C];2011年

5 畢小利;張煒;張卓成;楊秋泓;馮峰;馬文歡;;生地干預肺間質(zhì)纖維化轉(zhuǎn)化生長因子β受體表達的實驗研究[A];中醫(yī)藥防治SARS學術(shù)交流專輯[C];2003年

6 辛洪濤;柳澄;周曉輝;宋秀杰;姜淑娟;林殿杰;張欣;劉慶華;;益氣活血治療肺間質(zhì)纖維化之我見[A];全國第六屆中西醫(yī)結(jié)合呼吸病學術(shù)研討會論文匯編[C];2002年

7 王小平;李曉光;甘麗紅;王寶玲;;中藥治療肺間質(zhì)纖維化22例臨床分析[A];第五次全國中西醫(yī)結(jié)合呼吸病學術(shù)交流大會論文匯編[C];2000年

8 王良明;張士發(fā);趙麗萍;劉超;李潤江;;尋常型銀屑病合并肺間質(zhì)纖維化1例[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2003年

9 崔紅生;謝淑華;;肺間質(zhì)纖維化臨床分期與證候分布規(guī)律探討[A];全國中醫(yī)內(nèi)科肺系病第十四次學術(shù)研討會論文集[C];2010年

10 辛洪濤;柳澄;周曉輝;宋秀杰;姜淑娟;林殿杰;張欣;劉慶華;;益氣活血法治療肺間質(zhì)纖維化之我見[A];第五次全國中西醫(yī)結(jié)合血瘀證及活血化瘀研究學術(shù)大會論文匯編[C];2001年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 西安交通大學醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院副教授 楊渭臨;[N];健康報;2011年

2 北京中醫(yī)藥大學附屬東方醫(yī)院 周平安 張曉梅 孫海燕;[N];健康報;2001年

3 柴文戊 李永春;[N];中國醫(yī)藥報;2004年

4 王振嶺；李宗海;[N];中國醫(yī)藥報;2004年

5 崔紅生 張立山 武維屏;[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

6 河北省清苑縣中醫(yī)醫(yī)院 魏文浩;[N];中國中醫(yī)藥報;2011年

7 河北省清苑縣中醫(yī)醫(yī)院 魏文浩;[N];中國中醫(yī)藥報;2011年

8 河北省清苑縣中醫(yī)醫(yī)院 魏文浩;[N];中國中醫(yī)藥報;2011年

9 張曉梅 孫海燕;[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

10 崔紅生 邱冬梅 武維屏;[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賀環(huán)宇;丹參酮ⅡA對大鼠肺間質(zhì)纖維化的保護作用及機制研究[D];大連醫(yī)科大學;2014年

2 關(guān)天宇;肺痹湯對大鼠肺間質(zhì)纖維化干預作用的實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2007年

3 施劍;健脾通絡(luò)復方對肺間質(zhì)纖維化大鼠作用機理的研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2007年

4 冀紅;TGF-β受體亞型糖基化修飾對肺間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展的影響[D];大連醫(yī)科大學;2012年

5 蔣捍東;中藥復方肺康靈對肺間質(zhì)纖維化的改善作用及其機制研究[D];中國海洋大學;2008年

6 李今朝;肺纖維化細胞凋亡、Fas/FasL表達改變及N-乙酰半胱氨酸的作用[D];中國醫(yī)科大學;2005年

7 鄒萬成;從IPF探討細胞外基質(zhì)與絡(luò)脈絡(luò)病相關(guān)性[D];湖北中醫(yī)學院;2009年

8 丁明橋;化纖湯對肺纖維化大鼠肺組織細胞外基質(zhì)代謝的干預作用及機制[D];湖北中醫(yī)學院;2007年

9 趙亞東;截短β連環(huán)素對人胚肺成纖維細胞作用及機制的研究[D];中國醫(yī)科大學;2007年

10 牟曉燕;芪丹顆粒劑對博來霉素誘導大鼠肺間質(zhì)纖維化膠原代謝的實驗研究[D];山東大學;2006年

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2 劉麗娟;慢性阻塞性肺疾病合并肺間質(zhì)纖維化的臨床研究[D];新疆醫(yī)科大學;2005年

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4 謝淑華;肺痹、肺痿與肺間質(zhì)纖維化的相關(guān)性研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2009年

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7 胡小燕;潤肺合劑治療肺間質(zhì)纖維化的臨床與實驗研究[D];山東中醫(yī)藥大學;2006年

8 段燕;氟伐他汀對大鼠肺間質(zhì)纖維化的影響及其機制探討[D];山西醫(yī)科大學;2005年

9 申雯;激活素受體樣激酶5在肺間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展過程中的表達[D];大連醫(yī)科大學;2011年

10 陳平;補陽還五湯對肺纖維化TGF-β及基因表達調(diào)控的實驗研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2005年

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