本文關鍵詞：Hrd1在香煙煙霧誘導Ⅱ型肺泡上皮細胞內質網應激中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南華大學》 2012年

Hrd1在香煙煙霧誘導Ⅱ型肺泡上皮細胞內質網應激中的作用

姜迪譞  

【摘要】：目的：觀察原代培養(yǎng)的大鼠II型肺泡上皮細胞（AECII）暴露于香煙煙霧提取物（CSE）不同時間凋亡率的變化，以及AECII中Hrd1、內質網應激（ERS）相關因子、ERS誘導性凋亡相關因子的表達變化；觀察Hrd1基因沉默/過表達對上述變化的影響；探索Hrd1在COPD關于肺結構細胞凋亡的發(fā)病機制中所起的作用。 方法：原代及傳代培養(yǎng)大鼠AECII；制備CSE；用攜帶Hrd1干擾序列/編碼序列的慢病毒侵染AECII沉默/過表達Hrd1基因；在10%CSE刺激AECII的0h、3h、6h、12h、24h、48h時間點：Hoechst染色檢測干預前后細胞凋亡率、Realtime-PCR、Western blot技術檢測干預前后Hrd1、PERK、P-PERK、eIF2α、P-eIF2α、IRE1、P-IRE1、ATF6、caspase12、JNK、P-JNK、CHOP的表達； 結果： 1.傳至第3代培養(yǎng)的細胞，其形態(tài)、生長特征及生理學特性與原代培養(yǎng)細胞無明顯差異。 2. Hoechst染色顯示：暴露于10%CSE的大鼠AECII其凋亡率隨著刺激時間的延長不斷升高；敲除Hrd1基因組細胞各時間點凋亡率較野生型明顯增加；過表達Hrd1基因組細胞凋亡率較野生型明顯降低。 3.Westen blot結果顯示：10%CSE作用不同時間PERK、eIF2α以及IRE1總蛋白的表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.5），野生型細胞P-PERK的表達從3h組開始升高，12h達到高峰，后逐漸降低但仍高于對照組水平，P-eIF2α隨著CSE暴露時間的延長呈遞增趨勢；沉默Hrd1基因后，P-PERK的表達從3h組有所升高，6h開始即表達稍降并隨著CSE作用時間的延長顯著降低，而P-eIF2α蛋白的表達則隨著作用時間的延長呈持續(xù)下降趨勢；過表達Hrd1基因后，P-PERK蛋白的表達隨著作用時間的延長不斷減少，而P-eIF2α的表達從3h組稍有升高，12h組最高，隨后根據(jù)CSE作用時間的延長顯著降低。野生組P-IRE1的表達隨著CSE暴露時間的延長呈遞增趨勢；沉默組P-IRE1的表達從3h開始逐漸升高，12h達高峰，24h、48h表達均下降；過表達組P-IRE1的表達隨著作用時間的延長不斷增加。野生組ATF6α的表達隨著CSE暴露時間的延長呈遞增趨勢；沉默組ATF6α蛋白的表達則隨著作用時間的延長呈持續(xù)下降趨勢；過表達組ATF6α的表達從3h開始逐漸降低，6h最低，12h開始表達增加并在24h、48組持續(xù)增加。 4. Westen blot結果顯示：10%CSE作用不同時間總JNK蛋白的表達與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.5），P-JNK的表達隨著CSE暴露時間的延長呈遞增趨勢，caspase12的表達從3h組開始升高，12h達到高峰，隨后逐漸降低但仍高于對照組水平。CHOP蛋白的表達在野生組隨著CSE暴露時間的延長不斷增加，在沉默組從3h組開始升高，12h達最高峰，之后隨著CSE作用時間的延長逐漸下降但表達始終高于對照組，在過表達組隨著CSE作用時間的延長持續(xù)升高。 結論： 1.在適宜的培養(yǎng)條件下，離體培養(yǎng)的第3代AECⅡ能夠維持相對穩(wěn)定的分化表型，可以用于探索在體AECII的凋亡機制。 2. CSE能夠誘導AECII發(fā)生ERS并通過ERS介導細胞凋亡，PEAK/IRE1/ATF6三條跨膜信號通路均參與了CSE誘導的ERS，，Caspase12/JNK/CHOP三條ERS凋亡信號通路均參與介導CSE誘導的AECII凋亡。 3. Hrd1對CSE誘導的AECII凋亡具有保護作用。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R563.9
【目錄】：

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