研究背景和研究目的：哮喘是一種氣道的慢性炎癥性疾病,以反復(fù)發(fā)作的喘息、胸悶、咳嗽,炎癥細(xì)胞的活化和呼吸道重塑為特點(diǎn)。吸入型糖皮質(zhì)激素(ICS)和長效p2受體激動劑(LABA)是哮喘治療中的主要藥物。近年來發(fā)現(xiàn),ICS和LABA聯(lián)合應(yīng)用是治療中重度哮喘最為有效且科學(xué)合理的方法。目前,環(huán)索奈德與福莫特羅的聯(lián)合應(yīng)用在哮喘臨床治療中已有報道。但兩藥聯(lián)合應(yīng)用的藥理學(xué)機(jī)制尚不明確,本實(shí)驗(yàn)通過離體和整體實(shí)驗(yàn)方法研究了環(huán)索奈德與福莫特羅在哮喘治療中的協(xié)同作用及機(jī)制。 方法： 1.整體試驗(yàn)：構(gòu)建小鼠哮喘模型。Balb/c小鼠在第0天與第14天用10μg/只小鼠的卵白蛋白(OVA)與2mg氫氧化鋁混溶后皮下注射于小鼠的腳掌、頸部、背部與腹股溝致敏。在第22-28天,將小鼠放置于有機(jī)塑料盒內(nèi),用霧化吸入器氣道霧化吸入30分鐘的OVA抗原(10mg/mL).第29天治療組氣道滴入給藥3h后,用整體體積描記系統(tǒng)測定氣道反應(yīng)性,分別用3.125、6.25、12.5、25、50mg/mL的乙酰甲膽堿霧化吸入激發(fā),測定相應(yīng)濃度下氣道呼氣間歇(Penh)值。之后取肺泡灌洗液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),取左上肺提取mRNA。 2.離體試驗(yàn)：MTT法檢測環(huán)索奈德代謝物與福莫特羅對RBL-2H3細(xì)胞活性的影響。用抗原抗體復(fù)合物誘導(dǎo)RBL-2H3細(xì)胞構(gòu)建肥大細(xì)胞炎癥模型。用實(shí)時RT-PCR和ELISA檢測IL-4, IL-13mRNA和蛋白的表達(dá)。用Western Blot檢測JNK信號通路。 結(jié)果： 1.整體實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1)在OVA誘導(dǎo)的小鼠哮喘模型中,環(huán)索奈德和福莫特羅可分別呈劑量依賴性的抑制乙酰甲膽堿(3.125-50mg/mL)誘導(dǎo)的Penh值的增加。2)環(huán)索奈德(0.3mg/kg)分別與福莫特羅(7,14,28μg/kg)聯(lián)用對乙酰甲膽堿(6.25-50mg/mL)引起的Penh值升高,與單劑量相比具有協(xié)同抑制作用；環(huán)索奈德(1mg/kg)分別與福莫特羅(7,14,28ug/kg)聯(lián)用對乙酰膽堿(3.125-50mg/mL)引起的Penh值升高,與單劑量相比無明顯的協(xié)同抑制作用。3)環(huán)索奈德和福莫特羅可分別呈劑量依賴性的抑制哮喘小鼠肺部炎癥細(xì)胞的增多。4)環(huán)索奈德(0.3,1mg/kg)分別與福莫特羅(7,14,28μg/kg)聯(lián)用,與單劑量相比對哮喘小鼠肺部炎癥的增多有明顯的協(xié)同抑制作用。5)福莫特羅對哮喘小鼠肺組織中IL-4mRNA表達(dá)的升高呈計(jì)量依賴性抑制；環(huán)索奈德在濃度0.3mg/kg時對IL-4mRNA表達(dá)的升高有顯著抑制作用；環(huán)索奈德(1mg/kg)分別與福莫特羅(14,28ug/kg)聯(lián)用對IL-4mRNA表達(dá)的升高有協(xié)同抑制作用。 2.離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1)高濃度環(huán)索奈德代謝物(10-8-10-4M)可引起細(xì)胞毒性反應(yīng)降低RBL-2H3細(xì)胞活性,而福莫特羅(10-12-10-4M)對細(xì)胞活性無明顯影響。2)DNP-BSA (100ng/mL)刺激表面結(jié)合IgE (200ng/mL)的RBL-2H3細(xì)胞可顯著誘導(dǎo)炎癥因子IL-4和IL-13表達(dá)的增多。3)環(huán)索奈德代謝物(0.1-10nM)與福莫特羅(0.1-10μM)均可呈劑量依賴性的抑制DNP-BSA誘導(dǎo)的IL-4和IL-13表達(dá)的增多。4)環(huán)索奈德代謝物(0.2nM)與福莫特羅(1州)聯(lián)用與單劑量相比,對DNP-BSA誘導(dǎo)的IL-4的產(chǎn)生有顯著協(xié)同抑制作用；對IL-13和組胺的產(chǎn)生無顯著協(xié)同抑制作用。5) MAPK通路中JNK通路抑制劑SP600125(10μm)可顯著抑制DNP-BSA誘導(dǎo)的IL-4表達(dá)和分泌,而P38和ERK通路抑制劑對IL-4產(chǎn)生無明顯抑制作用。6) IgE-BSA復(fù)合物可誘導(dǎo)JNK磷酸化,在刺激20min時磷酸化最多。7)環(huán)索奈德代謝物(0.1-10nM)與福莫特羅(0.1-10μM)均可呈劑量依賴性的抑制DNP-BSA誘導(dǎo)的JNK磷酸化。8)環(huán)索奈德代謝物(0.2nM)與福莫特羅(1μM)聯(lián)用與單劑量相比,對DNP-BSA誘導(dǎo)的JNK磷酸化有顯著協(xié)同抑制作用。 結(jié)論： 1)在小鼠的哮喘模型中,環(huán)索奈德與福莫特羅的聯(lián)用對于乙酰甲膽堿誘導(dǎo)的氣道高反應(yīng)性和炎癥的產(chǎn)生,具有協(xié)同抑制作用。 2)在抗原抗體復(fù)合物介導(dǎo)的RBL-2H3炎癥細(xì)胞模型中,環(huán)索奈德代謝物與福莫特羅聯(lián)用對炎癥因子IL-4的產(chǎn)生有協(xié)同抑制作用；抑制MAPK的JNK通路可能是其機(jī)制之一。

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25
【目錄】：

【共引文獻(xiàn)】

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