本文關(guān)鍵詞：PAI-1SiRNA對(duì)博來霉素致大鼠肺纖維化的影響及其作用機(jī)制探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2015年

PAI-1SiRNA對(duì)博來霉素致大鼠肺纖維化的影響及其作用機(jī)制探討

田園園  

【摘要】：肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的本質(zhì)是慢性的、致命性的纖維紊亂,其后期可合并造成肺泡壁的增厚以及肺泡間隔的消失,最終導(dǎo)致肺功能喪失為特征的疾病,其主要表現(xiàn)在成纖維細(xì)胞的增生異常以及細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)中膠原的過度沉積。IPF的主要病理特征包括細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積、間質(zhì)細(xì)胞的增殖以及肺組織結(jié)構(gòu)的重構(gòu)。在肺纖維化形成過程當(dāng)中,細(xì)胞因子作用活躍,它們之間可以相互作用,也可以通過與多種炎癥介質(zhì)及其與肺臟組織細(xì)胞互相影響,產(chǎn)生復(fù)雜的反應(yīng),導(dǎo)致肺組織的炎癥加劇,同時(shí)纖維母細(xì)胞的活動(dòng)受到刺激,進(jìn)而增殖增加,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。研究發(fā)現(xiàn),有兩種降解細(xì)胞外基質(zhì)的重要酶類即:纖溶酶(plasmin)和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPS)。纖溶酶原激活物/纖溶酶原激活抑制物(plasminogen activator/plasminogen activator inhibitor,PAs/PAIs)和基質(zhì)金屬蛋白酶/基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物(the inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)的活性與表達(dá)異常在ECM的降解中發(fā)揮重要的作用。纖溶酶原是纖溶系統(tǒng)中的重要酶,它可以由纖溶酶原激活劑激活,轉(zhuǎn)化為纖溶酶,纖溶酶一方面發(fā)揮著纖溶作用,另一方面參與體內(nèi)許多病理、生理過程,如炎癥、腫瘤發(fā)生、組織重建等,而這些過程是和蛋白質(zhì)的水解有關(guān)系的[1]。纖溶酶原激活物抑制劑-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)是一種尿激酶型纖維蛋白酶原(urokinase type plasminogen activator,u-PA)的特異而主要抑制劑,亦是血管損傷、血栓形成部位纖溶系統(tǒng)的主要調(diào)節(jié)劑[2]。動(dòng)物模型已經(jīng)證實(shí),PAI-1基因在博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠體內(nèi)過度表達(dá)可以加重肺纖維化。在ECM合成和降解代謝中,基質(zhì)金屬蛋白酶和金屬蛋白酶組織抑制因子兩大酶系統(tǒng)能否維持平衡有著重要的作用,MMPs可以降解ECM,TIMPs是MMPs的重要抑制物,TIMPs可以促進(jìn)膠原的沉積,使細(xì)胞外基質(zhì)降解減少。近年來在IPF患者中發(fā)現(xiàn),TIMPS的表達(dá)量較MMPS占有明顯優(yōu)勢,從而促進(jìn)肺纖維化的發(fā)生及發(fā)展。RNA干擾(RNAi)技術(shù)的出現(xiàn)被認(rèn)為是生物學(xué)中的創(chuàng)舉之作,小分子RNA(Si RNA)技術(shù)是一種新型基因技術(shù),它以調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄后為目的,通過合成小分子RNA,對(duì)靶基因?qū)崿F(xiàn)特異性抑制,RNA干擾因其操作簡便,效率較高的抑制目的基因的表達(dá),易于調(diào)節(jié)控制等優(yōu)點(diǎn),已成為基因功能研究以及治療的一種新靶點(diǎn)。目的:本研究中,我們通過對(duì)博萊霉素所致肺纖維化大鼠模型氣管內(nèi)注入PAI-1si RNA,首先測定肺泡灌洗液中PAI-1活性,進(jìn)一步利用RT-PCR方法測定α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、Ⅲ型膠原(collagen type III)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1),轉(zhuǎn)換生長因子-β(TGF-β)的表達(dá)情況,初步探討PAI-1是否參與了調(diào)節(jié)肺纖維化過程,以便進(jìn)一步研究PAI-1 si RNA對(duì)肺纖維化的治療作用及機(jī)制。方法:選取Wistar清潔級(jí)雄性大鼠72只,體重(140±20)g,應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成4組,鹽水組(Sham組)、博萊霉素組(B組)、BLM+PAI-1Si RNA組(B+P組)和BLM+Si RNA陰對(duì)組(B+N組),每組各18只。使用無水乙醚局部麻醉,采取仰臥位固定,常規(guī)消毒皮膚,行頸正中切口,分離組織,暴露氣管,B組、B+P組和B+N組按5 mg/kg抽取BLM液0.2~0.3 m L(生理鹽水溶解),穿刺并注入氣管內(nèi),Sham組注入0.2~0.3 m L等體積生理鹽水。造模成功后,每周2次氣管內(nèi)給藥,4周共給藥8次,B+P組每周兩次氣管內(nèi)注入DEPC水溶解的PAI-1Si RNA(7.5nmol,0.2ml高壓過的去離子水溶),B+N組每周兩次氣管內(nèi)注入等量非特異的Si RNA(7.5nmol,0.2ml高壓過的去離子水溶),Sham組和B組每周兩次氣管內(nèi)注入0.2ml的生理鹽水。上述4組動(dòng)物分別于第7、14、28天每組各處死6只。左肺行肺泡灌洗測定PAI-1活性,右中葉組織儲(chǔ)存于-80℃液氮中,行RT-PCR檢測。利用RT-PCR技術(shù)檢測α-SMA、collagen typeⅢ、TIMP-1,TGF-β的m RNA表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及數(shù)據(jù)資料采用Spss13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:(1)肺泡灌洗液(BALF)中PAI-1測定分析結(jié)果:博萊霉素組7天、14天和28天PAI-1的活性持續(xù)升高,每周兩次向氣管內(nèi)注入PAI-1 Si RNA可使其活性降低。分別與同一時(shí)間點(diǎn)BLM組比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)。(2)PCR結(jié)果:7、14天和28天BLM組α-SMA,collagen typeⅢ,TIMP-1的m RNA表達(dá)較Sham組的高;三個(gè)時(shí)間點(diǎn)PAI-1 Si RNA組α-SMA,TIMP-1,collagen type III的表達(dá)較BLM組低,有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);7天、28天時(shí)BLM組TGF-βm RNA表達(dá)較Sham組明顯升高,PAI-1 Si RNA組的TGF-β的m RNA表達(dá)較BLM組低,有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),14天無明顯差別(P0.05);B組和B+N組各時(shí)間點(diǎn)無明顯差別(P0.05)。結(jié)論:1博萊霉素大鼠氣管內(nèi)注入PAI-1Si RNA,能促進(jìn)ECM的降解,使膠原的合成減少,進(jìn)而阻礙肺纖維化的發(fā)展。2 PAI-1Si RNA可能通過降低TIMP-1和TGF-β的表達(dá)發(fā)揮治療肺纖維化的作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563
【目錄】：

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4 彭建平;[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

5 河北省職工醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)科 劉涓;[N];健康報(bào);2009年

6 北京同仁醫(yī)院呼吸科主任醫(yī)師 孫永昌;[N];保健時(shí)報(bào);2009年

7 北京同仁醫(yī)院呼吸科主任醫(yī)師 孫永昌;[N];健康報(bào);2012年

8 張紓難;[N];健康報(bào);2003年

9 靜雨 譯;[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

10 北京中日友好醫(yī)院 張紓難;[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2000年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔燁;氧化應(yīng)激在持續(xù)性肺纖維化中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

2 王佳平;肺纖維化的免疫發(fā)病學(xué)機(jī)制[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

3 楊俊玲;腫瘤壞死因子-α抑制劑及4種細(xì)胞因子表達(dá)在肺纖維化診治中的應(yīng)用與評(píng)價(jià)[D];吉林大學(xué);2007年

4 崔冰;調(diào)節(jié)組織免疫微環(huán)境抑制或逆轉(zhuǎn)肺纖維化[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

5 徐龍;轉(zhuǎn)化生長因子-β3調(diào)控循環(huán)纖維細(xì)胞在放射性肺纖維化中的作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

6 呂曉希;盧帕他定通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)逆轉(zhuǎn)肺纖維化[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

7 向菲;基質(zhì)金屬蛋白酶在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用及其調(diào)節(jié)的研究[D];華中科技大學(xué);2006年

8 孫英新;螺旋藻藻藍(lán)蛋白抗百草枯誘導(dǎo)大鼠肺纖維化的研究[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2012年

9 費(fèi)雁;芪丹化纖方對(duì)大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及機(jī)制研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2009年

10 丁明橋;化纖湯對(duì)肺纖維化大鼠肺組織細(xì)胞外基質(zhì)代謝的干預(yù)作用及機(jī)制[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王平凡;尾加壓素Ⅱ在人肺纖維化組織中的表達(dá)及意義[D];蘭州大學(xué);2008年

2 王勝霞;玉屏風(fēng)多糖對(duì)大鼠肺纖維化的預(yù)防作用及部分機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

3 包敏;胰島素樣生長因子1作用下的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠肺纖維化的治療作用及其機(jī)制[D];南京大學(xué);2011年

4 于國強(qiáng);呂曉東教授治療肺纖維化之經(jīng)驗(yàn)[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2007年

5 施維;整合素相關(guān)激酶與上皮—間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化在肺纖維化中的作用[D];華中科技大學(xué);2007年

6 劉娟;枇杷葉三萜酸對(duì)大鼠肺纖維化的防治作用及其部分機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

7 董靜;丹參對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺纖維化形成的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2003年

8 高曉方;干擾素γ對(duì)大鼠肺纖維化的治療作用及機(jī)制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 毛新妍;吲哚-3-原醇對(duì)博萊霉素致小鼠/大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及其機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2013年

10 王星;酒精與大鼠肺纖維化關(guān)系的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：PAI-1SiRNA對(duì)博來霉素致大鼠肺纖維化的影響及其作用機(jī)制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：200098