本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細胞對肺氣腫模型大鼠的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《安徽醫(yī)科大學(xué)》 2014年

骨髓間充質(zhì)干細胞對肺氣腫模型大鼠的影響

王麗雁  

【摘要】：目的： 1、本實驗通過1次性氣管內(nèi)注入豬胰蛋白酶（PPE）建立大鼠肺氣腫模型； 2、從SD大鼠骨髓中分離間充質(zhì)干細胞，體外培養(yǎng)、傳代、擴增、鑒定； 3、建立大鼠肺氣腫模型后，通過尾靜脈注入骨髓間充質(zhì)干細胞，通過觀察骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）對肺氣腫模型大鼠中炎癥因子和肺組織病理學(xué)變化的影響，探討骨髓間充質(zhì)干細胞對肺氣腫的影響以及肺氣腫的發(fā)病機制。 方法： 1、選擇2只體重約80-100g的雄性SD大鼠，去除股骨周圍肌肉組織，剪去包括骺板在內(nèi)的兩側(cè)骺端，用DMEM液反復(fù)沖洗骨髓腔，收集骨髓細胞懸液，并將其接種于塑料培養(yǎng)瓶，用DMEM-LG培養(yǎng)液（10%FBS，100u/L青霉素，100u/L鏈霉素）培養(yǎng)，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，48小時半量換液，之后每72小時全量換液，待融合80%時，按1:2傳代。倒置相差顯微鏡觀察細胞生長情況及形態(tài)特征。 2、將30只體重約180-220g的健康雄性SD大鼠，隨機分成3組：正常對照組、肺氣腫模型組和BMSC治療組。氣管內(nèi)注入PPE誘導(dǎo)建立肺氣腫模型，經(jīng)大鼠尾靜脈注射BMSC進行治療。普通飼養(yǎng)2周后處死大鼠，觀察肺組織病理學(xué)變化以及肺泡灌洗液細胞計數(shù)，使用ELISA方法檢測各組大鼠BALF中IL-17和IL-6水平。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，檢驗水平為α=0.05。 結(jié)果： 1、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細胞總數(shù)及分類，肺氣腫模型組BALF中白細胞總數(shù)、淋巴細胞數(shù)及中性粒細胞百分數(shù)均高于正常對照組，經(jīng)BMSC治療后的大鼠BALF中白細胞數(shù)、淋巴細胞數(shù)及中性粒細胞百分比均低于肺氣腫模型組(P0.05)。 2、ELISA結(jié)果顯示BMSC治療組中IL-17、IL-6水平較正常對照組顯著升高（P0.05），但低于模型組（P0.05）； 3、肉眼觀BMSC治療組、肺氣腫模型組均可見肺體積增大，肺氣腫樣改變，BMSC治療組較模型組肺氣腫樣改變減輕；肺組織病理切片比較肺組織平均內(nèi)襯間隔(MLI)、單位面積平均肺泡數(shù)(MAN)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論： 1、利用全骨髓貼壁法可成功分離純化間充質(zhì)干細胞（BMSC），分離培養(yǎng)所得的間充質(zhì)干細胞性狀穩(wěn)定，狀態(tài)良好，細胞形態(tài)學(xué)和表型鑒定符合骨髓間充質(zhì)干細胞的特點，多次傳代后能保持其原有的形態(tài)學(xué)特點； 2、按1u/g豬胰蛋白酶氣管內(nèi)滴注可以成功建立大鼠肺氣腫模型，其病理學(xué)改變與人類全小葉型肺氣腫相似； 3、經(jīng)尾靜脈注射的BMSC能在肺氣腫模型肺組織內(nèi)存留，除能改善肺氣腫的病理改變外，還可以調(diào)節(jié)炎癥因子水平。炎癥反應(yīng)和自身免疫的紊亂可能是導(dǎo)致的肺實質(zhì)破壞可能是肺氣腫主要的發(fā)病機制。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563.3
【目錄】：

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