發(fā)布時(shí)間：2017-10-05 16:24

  本文關(guān)鍵詞：三氯生對(duì)胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞11β-HSD2影響的研究

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【摘要】：背景:三氯生作為廣譜抗菌劑被廣泛用于個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品。研究發(fā)現(xiàn)三氯生具有干擾人體內(nèi)分泌代謝的作用。11β-羥類固醇脫氫酶2型(11β-HSD2)在人類胎盤(pán)組織中廣泛高度表達(dá),起著糖皮質(zhì)激素屏障的作用,能夠?qū)⒂猩锘钚缘奶瞧べ|(zhì)激素皮質(zhì)醇代謝為無(wú)活性的皮質(zhì)酮,從而保護(hù)胎兒免受過(guò)量外源性糖皮質(zhì)激素的影響。目的:研究三氯生對(duì)胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞11β-HSD2表達(dá)的影響和對(duì)胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡的影響,以及這兩者之間的關(guān)系。方法:采用改良的Kliman法分離提純胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞,胎盤(pán)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞在體外培養(yǎng)3天后達(dá)到最大合體化成為胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞,此時(shí)加入不同濃度三氯生(0,0.001,0.01,0.1,1,10μM)孵育24h后,檢測(cè)11β-HSD2的表達(dá)水平和酶活性。通過(guò)MTT、DNA ladder、Hoechst33342染色和Western blotting的方法檢測(cè)胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)三氯生處理后細(xì)胞活力和凋亡相關(guān)指標(biāo)的變化。為了研究三氯生促進(jìn)胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡與抑制11β-HSD2表達(dá)之間的關(guān)系,用30μM凋亡抑制劑Z-VAD-FMK預(yù)處理細(xì)胞一小時(shí)后,與0.1μM三氯生共同孵育胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞24h,檢測(cè)胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)及11β-HSD2表達(dá)的變化。結(jié)果:三氯生能夠濃度依賴性地抑制胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞11β-HSD2的m RNA、蛋白和酶的表達(dá)。同時(shí)三氯生濃度依賴性地抑制胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞的活力。Hoechst33342熒光染色實(shí)驗(yàn)顯示0.1μM三氯生處理組細(xì)胞核質(zhì)染色明顯加深,DNA ladder實(shí)驗(yàn)顯示0.1μM三氯生處理后細(xì)胞瓊脂糖電泳出現(xiàn)明顯梯狀DNA條帶。三氯生還能夠濃度依賴性地增加胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞的caspase-3酶活性,并且濃度依賴性地促進(jìn)促凋亡蛋白cleaved-caspase-3和Bax的表達(dá),同時(shí)抑制抗凋亡蛋白pro-caspase-3和Bcl-2的表達(dá)。用凋亡抑制劑Z-VAD-FMK阻斷三氯生對(duì)胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞的促凋亡作用后,三氯生對(duì)胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞11β-HSD2的表達(dá)和酶活性的抑制作用也被顯著減弱。結(jié)論:三氯生能夠通過(guò)促進(jìn)胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡來(lái)抑制11β-HSD2的表達(dá)和酶活性,進(jìn)而可能破壞胎盤(pán)糖皮質(zhì)激素屏障,損害胎兒的正常發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：胎盤(pán) 三氯生 合體滋養(yǎng)細(xì)胞 11β羥基類固醇脫氫酶Ⅱ型 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714
【目錄】：

• 縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-15
• 主要實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 主要實(shí)驗(yàn)試劑與配方16-27
• 實(shí)驗(yàn)方法27-44
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-55
• 討論55-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 綜述——11β-羥基類固醇脫氫酶Ⅱ型在胎盤(pán)及胎兒起源成人疾病中的作用64-70
• 參考文獻(xiàn)67-70
• 致謝70-72
• 攻讀碩士期間已發(fā)表論文72

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6 李秋紅;妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕婦胎盤(pán)合體滋養(yǎng)細(xì)胞OATP8基因表達(dá)及意義研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：977807