本文關(guān)鍵詞：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其受體在多囊卵巢綜合征大鼠中的表達(dá)研究

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【摘要】：【目的】多囊卵巢綜合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)是青春期及育齡女性中最常見(jiàn)的高度異質(zhì)性的內(nèi)分泌與代謝紊亂疾病,表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)和不孕、雄激素過(guò)多癥狀、肥胖和胰島素抵抗,可引起2型糖尿病、心血管疾病、子宮內(nèi)膜癌等遠(yuǎn)期并發(fā)癥。主要發(fā)病機(jī)制為由異常的內(nèi)分泌及旁分泌因子、代謝障礙及卵泡內(nèi)微環(huán)境的改變共同作用導(dǎo)致的卵泡發(fā)育障礙。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作為正常卵泡發(fā)育的生理調(diào)節(jié)劑,在卵泡發(fā)育、卵母細(xì)胞成熟及早期胚胎發(fā)育等過(guò)程中起著重要作用。本研究通過(guò)構(gòu)建PCOS大鼠模型,探討B(tài)DNF及受體酪氨酸激酶受體B(tyrosine receptor kinase B,Trk B)在PCOS大鼠卵巢中的表達(dá)情況,從分子水平揭示BDNF-Trk B對(duì)PCOS患者卵泡發(fā)育障礙可能的病理生理機(jī)制�！痉椒ā繎�(yīng)用來(lái)曲唑誘導(dǎo)大鼠PCOS模型,模型組大鼠20只灌胃服用來(lái)曲唑1mg·kg-1·d-1(溶于1%羧甲基纖維素中),對(duì)照組灌胃服用1%羧甲基纖維素,兩組均連續(xù)灌服21d。灌胃期間每日定時(shí)做大鼠陰道涂片加吉姆薩染色以監(jiān)測(cè)兩組大鼠的動(dòng)情周期有無(wú)改變。造模后應(yīng)用放射免疫法測(cè)定血清FSH、LH、E2、P、T水平,HE染色法觀察卵巢組織學(xué)變化,Real-time PCR法檢測(cè)模型組與對(duì)照組大鼠卵巢組織中BDNF及Trk B基因的表達(dá),Western blot法檢測(cè)兩組大鼠卵巢組織中BDNF及Trk B蛋白的表達(dá)水平差異,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Trk B在兩組大鼠卵巢組織中的定位表達(dá)及其在不同級(jí)別卵泡中的表達(dá)差異。采用SAS 9.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析,結(jié)果采用x±s進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述,組間比較均采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�！窘Y(jié)果】模型組大鼠在應(yīng)用來(lái)曲唑后80%大鼠動(dòng)情周期失去規(guī)律性變化。與對(duì)照組比較,模型組血清T、LH、FSH濃度顯著增高,E2、P濃度顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。模型組卵巢體積增大,囊狀擴(kuò)張卵泡明顯增多,黃體數(shù)量明顯減少。模型組卵巢組織中BDNF m RNA表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P0.05),而Trk B m RNA顯著低于對(duì)照組(P0.05)。BDNF蛋白在PCOS模型組卵巢組織中的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組,Fl-Trk B在模型組的表達(dá)明顯高于對(duì)照組,而tr-Trk B在模型組的表達(dá)明顯低于對(duì)照組,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。Trk B在兩組卵巢的顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞上的表達(dá)量不同,其中Trk B在模型組大竇前卵泡的顆粒細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組,在卵母細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度明顯低于對(duì)照組,Trk B在模型組囊狀卵泡的顆粒細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度遠(yuǎn)高于對(duì)照組竇狀卵泡顆粒細(xì)胞的表達(dá),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Trk B在各級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞上的表達(dá)未見(jiàn)明顯差異,而在卵母細(xì)胞上的表達(dá)呈遞減趨勢(shì),即在原始卵泡卵母細(xì)胞上表達(dá)最強(qiáng),然后隨著卵泡發(fā)育Trk B在卵母細(xì)胞上的表達(dá)逐漸減弱。【結(jié)論】來(lái)曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠模型是研究PCOS病理生理機(jī)制的一種理想的動(dòng)物模型。卵巢組織內(nèi)BDNF/Trk B的m RNA和蛋白表達(dá)水平的變化,受體Trk B在卵母細(xì)胞上的表達(dá)隨著卵泡發(fā)育的成熟逐漸減弱,及Trk B在PCOS模型組與對(duì)照組各級(jí)卵泡中顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞上的表達(dá)差異提示BDNF/Trk B可能通過(guò)自分泌或旁分泌的方式促使PCOS卵泡發(fā)育障礙。
【關(guān)鍵詞】：多囊卵巢綜合征(PCOS) 動(dòng)物疾病模型 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF) 酪氨酸激酶受體B(TrkB) 卵泡發(fā)育障礙
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R711.75
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第1章 序言11-18
• 1 多囊卵巢綜合征概述11-14
• 1.1 多囊卵巢綜合征流行病學(xué)研究11-12
• 1.2 PCOS不孕治療12-13
• 1.3 PCOS與卵泡發(fā)育障礙13-14
• 2 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其受體的研究現(xiàn)狀14-16
• 2.1 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的結(jié)構(gòu)與生理功能14
• 2.2 BDNF在卵泡發(fā)育中的作用14-15
• 2.3 BDNF與PCOS卵泡發(fā)育異常15-16
• 3 多囊卵巢綜合征大鼠模型16-17
• 4 本課題研究目的及研究思路17-18
• 第2章 多囊卵巢綜合征大鼠模型的建立18-29
• 1 引言18
• 2 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象18
• 2.2 藥物與試劑18-19
• 2.3 實(shí)驗(yàn)儀器19
• 3 實(shí)驗(yàn)方法19-23
• 3.1 實(shí)驗(yàn)大鼠的飼養(yǎng)與分組19-20
• 3.2 多囊卵巢綜合征模型的建立20
• 3.3 動(dòng)情周期檢測(cè)20-21
• 3.4 血清性激素檢測(cè)21
• 3.5 卵巢組織形態(tài)學(xué)檢查21-23
• 3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23
• 4 結(jié)果23-27
• 4.1 大鼠體重和卵巢體積的變化23-24
• 4.2 動(dòng)情周期變化24
• 4.3 血清性激素比較24-26
• 4.4 卵巢組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)26-27
• 5 討論27-29
• 第3章 PCOS大鼠卵巢組織中BDNF及其受體Trk B的表達(dá)29-55
• 1 引言29
• 2 實(shí)驗(yàn)材料29-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象29
• 2.2 主要儀器設(shè)備29-30
• 2.3 主要試劑30-32
• 3 實(shí)驗(yàn)方法32-44
• 3.1 Real-time PCR法32-36
• 3.2 Western Blot（蛋白免疫印記）36-42
• 3.3 免疫組織化學(xué)法42-44
• 3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析44
• 4 結(jié)果44-52
• 4.1 Real time PCR檢測(cè)BDNF/Trk B m RNA在卵巢組織中的表達(dá)44-46
• 4.2 Western blot法檢測(cè)BDNF/Trk B在卵巢組織中的表達(dá)46-48
• 4.3 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Trk B在不同發(fā)育階段卵泡中的表達(dá)48-52
• 5 討論52-55
• 全文小結(jié)55
• 創(chuàng)新點(diǎn)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-65
• 綜述65-75
• 參考文獻(xiàn)71-75
• 攻讀碩士學(xué)位論文期間發(fā)表的論文及參加課題情況75-76
• 致謝76

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 陳甲;周華東;許志強(qiáng);;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子前體的研究進(jìn)展[J];中華老年心腦血管病雜志;2015年01期

2 申洪,陸藥丹;免疫組織化學(xué)染色的定量方法研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;1993年04期

3 付娟,陳士嶺,邢福祺,張廣亮,孔令紅,朱亮,李紅;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其受體在人卵巢的表達(dá)與卵泡發(fā)育的關(guān)系[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2005年01期

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本文編號(hào)：901591