本文關(guān)鍵詞：腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體在多囊卵巢綜合征大鼠中的表達研究

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【摘要】：【目的】多囊卵巢綜合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)是青春期及育齡女性中最常見的高度異質(zhì)性的內(nèi)分泌與代謝紊亂疾病,表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)和不孕、雄激素過多癥狀、肥胖和胰島素抵抗,可引起2型糖尿病、心血管疾病、子宮內(nèi)膜癌等遠期并發(fā)癥。主要發(fā)病機制為由異常的內(nèi)分泌及旁分泌因子、代謝障礙及卵泡內(nèi)微環(huán)境的改變共同作用導致的卵泡發(fā)育障礙。近年來發(fā)現(xiàn)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作為正常卵泡發(fā)育的生理調(diào)節(jié)劑,在卵泡發(fā)育、卵母細胞成熟及早期胚胎發(fā)育等過程中起著重要作用。本研究通過構(gòu)建PCOS大鼠模型,探討B(tài)DNF及受體酪氨酸激酶受體B(tyrosine receptor kinase B,Trk B)在PCOS大鼠卵巢中的表達情況,從分子水平揭示BDNF-Trk B對PCOS患者卵泡發(fā)育障礙可能的病理生理機制�！痉椒ā繎�(yīng)用來曲唑誘導大鼠PCOS模型,模型組大鼠20只灌胃服用來曲唑1mg·kg-1·d-1(溶于1%羧甲基纖維素中),對照組灌胃服用1%羧甲基纖維素,兩組均連續(xù)灌服21d。灌胃期間每日定時做大鼠陰道涂片加吉姆薩染色以監(jiān)測兩組大鼠的動情周期有無改變。造模后應(yīng)用放射免疫法測定血清FSH、LH、E2、P、T水平,HE染色法觀察卵巢組織學變化,Real-time PCR法檢測模型組與對照組大鼠卵巢組織中BDNF及Trk B基因的表達,Western blot法檢測兩組大鼠卵巢組織中BDNF及Trk B蛋白的表達水平差異,免疫組織化學法檢測Trk B在兩組大鼠卵巢組織中的定位表達及其在不同級別卵泡中的表達差異。采用SAS 9.0統(tǒng)計軟件包進行分析,結(jié)果采用x±s進行統(tǒng)計描述,組間比較均采用獨立樣本t檢驗。檢驗水準α=0.05,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義�！窘Y(jié)果】模型組大鼠在應(yīng)用來曲唑后80%大鼠動情周期失去規(guī)律性變化。與對照組比較,模型組血清T、LH、FSH濃度顯著增高,E2、P濃度顯著降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。模型組卵巢體積增大,囊狀擴張卵泡明顯增多,黃體數(shù)量明顯減少。模型組卵巢組織中BDNF m RNA表達量顯著高于對照組(P0.05),而Trk B m RNA顯著低于對照組(P0.05)。BDNF蛋白在PCOS模型組卵巢組織中的表達量顯著高于對照組,Fl-Trk B在模型組的表達明顯高于對照組,而tr-Trk B在模型組的表達明顯低于對照組,均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。Trk B在兩組卵巢的顆粒細胞和卵母細胞上的表達量不同,其中Trk B在模型組大竇前卵泡的顆粒細胞中的表達強度明顯高于對照組,在卵母細胞中的表達強度明顯低于對照組,Trk B在模型組囊狀卵泡的顆粒細胞中的表達強度遠高于對照組竇狀卵泡顆粒細胞的表達,均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Trk B在各級卵泡的顆粒細胞上的表達未見明顯差異,而在卵母細胞上的表達呈遞減趨勢,即在原始卵泡卵母細胞上表達最強,然后隨著卵泡發(fā)育Trk B在卵母細胞上的表達逐漸減弱。【結(jié)論】來曲唑誘導的PCOS大鼠模型是研究PCOS病理生理機制的一種理想的動物模型。卵巢組織內(nèi)BDNF/Trk B的m RNA和蛋白表達水平的變化,受體Trk B在卵母細胞上的表達隨著卵泡發(fā)育的成熟逐漸減弱,及Trk B在PCOS模型組與對照組各級卵泡中顆粒細胞和卵母細胞上的表達差異提示BDNF/Trk B可能通過自分泌或旁分泌的方式促使PCOS卵泡發(fā)育障礙。
【關(guān)鍵詞】：多囊卵巢綜合征(PCOS) 動物疾病模型 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF) 酪氨酸激酶受體B(TrkB) 卵泡發(fā)育障礙
【學位授予單位】：廣東藥學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R711.75
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第1章 序言11-18
• 1 多囊卵巢綜合征概述11-14
• 1.1 多囊卵巢綜合征流行病學研究11-12
• 1.2 PCOS不孕治療12-13
• 1.3 PCOS與卵泡發(fā)育障礙13-14
• 2 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體的研究現(xiàn)狀14-16
• 2.1 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的結(jié)構(gòu)與生理功能14
• 2.2 BDNF在卵泡發(fā)育中的作用14-15
• 2.3 BDNF與PCOS卵泡發(fā)育異常15-16
• 3 多囊卵巢綜合征大鼠模型16-17
• 4 本課題研究目的及研究思路17-18
• 第2章 多囊卵巢綜合征大鼠模型的建立18-29
• 1 引言18
• 2 實驗材料18-19
• 2.1 實驗對象18
• 2.2 藥物與試劑18-19
• 2.3 實驗儀器19
• 3 實驗方法19-23
• 3.1 實驗大鼠的飼養(yǎng)與分組19-20
• 3.2 多囊卵巢綜合征模型的建立20
• 3.3 動情周期檢測20-21
• 3.4 血清性激素檢測21
• 3.5 卵巢組織形態(tài)學檢查21-23
• 3.6 統(tǒng)計學分析23
• 4 結(jié)果23-27
• 4.1 大鼠體重和卵巢體積的變化23-24
• 4.2 動情周期變化24
• 4.3 血清性激素比較24-26
• 4.4 卵巢組織形態(tài)學表現(xiàn)26-27
• 5 討論27-29
• 第3章 PCOS大鼠卵巢組織中BDNF及其受體Trk B的表達29-55
• 1 引言29
• 2 實驗材料29-32
• 2.1 實驗對象29
• 2.2 主要儀器設(shè)備29-30
• 2.3 主要試劑30-32
• 3 實驗方法32-44
• 3.1 Real-time PCR法32-36
• 3.2 Western Blot（蛋白免疫印記）36-42
• 3.3 免疫組織化學法42-44
• 3.4 統(tǒng)計學分析44
• 4 結(jié)果44-52
• 4.1 Real time PCR檢測BDNF/Trk B m RNA在卵巢組織中的表達44-46
• 4.2 Western blot法檢測BDNF/Trk B在卵巢組織中的表達46-48
• 4.3 免疫組織化學法檢測Trk B在不同發(fā)育階段卵泡中的表達48-52
• 5 討論52-55
• 全文小結(jié)55
• 創(chuàng)新點55-56
• 參考文獻56-65
• 綜述65-75
• 參考文獻71-75
• 攻讀碩士學位論文期間發(fā)表的論文及參加課題情況75-76
• 致謝76

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 陳甲;周華東;許志強;;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子前體的研究進展[J];中華老年心腦血管病雜志;2015年01期

2 申洪,陸藥丹;免疫組織化學染色的定量方法研究[J];生物醫(yī)學工程學雜志;1993年04期

3 付娟,陳士嶺,邢福祺,張廣亮,孔令紅,朱亮,李紅;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體在人卵巢的表達與卵泡發(fā)育的關(guān)系[J];中國免疫學雜志;2005年01期

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本文編號：901591