本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-21參與上皮性卵巢癌的化療耐藥及其作用機(jī)制

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【摘要】：第一部分上皮性卵巢癌患者血清micro RNA-21的水平及其臨床意義研究目的:檢測(cè)上皮性卵巢癌化療耐藥及化療敏感患者血清中micro RNA-21的表達(dá),并探討其評(píng)估上皮性卵巢癌化療耐藥及預(yù)后的可行性。方法:采用探針型real-time PCR技術(shù)檢測(cè)和比較20例上皮性卵巢癌患者和10例正常人血清標(biāo)本中micro RNA-21的表達(dá),并分析血清micro RNA-21水平與上皮性卵巢癌患者化療耐藥及其臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果:正常人、上皮性卵巢癌化療敏感和化療耐藥患者血清中micro RNA-21的相對(duì)表達(dá)量分別為0.573±0.318、2.606±1.057、26.766±26.710,上皮性卵巢癌化療敏感和化療耐藥患者血清中mi R-21的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于正常人血清中mi R-21的相對(duì)表達(dá)量(P0.05),而上皮性卵巢癌化療耐藥患者血清中mi R-21表達(dá)顯著高于上皮性卵巢癌化療敏感患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。化療耐藥患者血清mi R-21表達(dá)水平與其手術(shù)-病理分期無明顯差異(P0.05),化療耐藥患者血清mi R-21的表達(dá)水平與是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論:上皮性卵巢癌化療耐藥患者血清micro RNA-21水平顯著升高,提示其可能是上皮性卵巢癌化療耐藥的潛在腫瘤標(biāo)志之一。第二部分Micro RNA-21通過負(fù)性調(diào)節(jié)PTEN參與上皮性卵巢癌的順鉑耐藥目的:通過檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3/DDP與SKOV3中mi R-21的差異性表達(dá),探討mi R-21在與上皮性卵巢癌的順鉑耐藥關(guān)系。并進(jìn)一步檢測(cè)PTEN在m RNA水平和蛋白水平的表達(dá),探討mi RNA-21促進(jìn)上皮性卵巢癌順鉑耐藥的可能作用機(jī)制。方法:(1)MTT法檢測(cè)SKOV3/DDP相對(duì)于其敏感細(xì)胞株對(duì)順鉑的耐藥性和耐藥指數(shù);(2)采用real-time PCR技術(shù)檢測(cè)mi RNA-21和PTEN m RNA在SKOV3及SKOV3/DDP中的差異性表達(dá);(3)western blot檢測(cè)PTEN蛋白在SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá);(4)SKOV3細(xì)胞株和SKOV3/DDP細(xì)胞株分別用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染mi R-21 mimics及inhibitors。并分別設(shè)置陰性對(duì)照組。轉(zhuǎn)染后,MTT法檢測(cè)SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞的耐藥性。real time PCR測(cè)定SKOV3及SKOV3/DDP中mi R-21和PTEN m RNA的表達(dá)量。western blot的方法檢測(cè)PTEN蛋白在卵巢癌敏感及耐藥細(xì)胞株中的表達(dá)。結(jié)果:(1)順鉑對(duì)SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞的IC50值分別為5.351μmol/L和22.488μmol/L,兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),耐藥指數(shù)為4.2倍。(2)從SKOV3及SKOV3/DDP中提取總RNA,real-time PCR的檢測(cè)證實(shí)mi R-21在SKOV3/DDP中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其在SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)。而PTEN m RNA在SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)無明顯差異(P0.05)(3)western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白在SKOV3細(xì)胞中表達(dá)量高于其在SKOV3/DDP細(xì)胞的表達(dá)(4)real-time PCR檢測(cè)證實(shí)SKOV3+mimics細(xì)胞中mi RNA-21的相對(duì)表達(dá)量較陰性對(duì)照組升高了344倍,而SKOV3/DDP+inhibitor細(xì)胞中mi RNA-21相對(duì)表達(dá)量約為陰性對(duì)照組的0.109倍,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)real-time PCR檢測(cè)證實(shí)SKOV3+mimics細(xì)胞中PTEN m RNA的相對(duì)表達(dá)量較陰性對(duì)照組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而SKOV3/DDP+inhibitor細(xì)胞中PTEN m RNA的相對(duì)表達(dá)量與陰性對(duì)照組PTEN m RNA的相對(duì)表達(dá)量無明顯差異(P0.05)。PTEN m RNA在SKOV3+nc組和SKOV3/DDP+nc組的相對(duì)表達(dá)量亦無明顯差異(P0.05)。(7)轉(zhuǎn)染后,順鉑對(duì)SKOV3+nc和SKOV3+mimics細(xì)胞的IC50值分別為5.205μmol/L和25.763μmol/L,SKOV3+mimics細(xì)胞較陰性對(duì)照組耐藥倍數(shù)升高約4.9倍。順鉑對(duì)SKOV3/DDP+nc和SKOV3/DDP+inhibitor細(xì)胞的IC50值分別為21.914μmol/L和15.524μmol/L,SKOV3/DDP+inhibitor細(xì)胞耐藥倍數(shù)約為陰性對(duì)照組的0.7倍。(8)轉(zhuǎn)染后,Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)mi R-21在SKOV3細(xì)胞中的過表達(dá)下調(diào)PTEN蛋白的表達(dá),而抑制mi R-21在SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)上調(diào)PTEN蛋白的表達(dá)。結(jié)論:(1)SKOV3/DDP與SKOV3細(xì)胞株mi RNA-21的表達(dá)存在明顯差異,提示mi RNA-21可能與卵巢癌細(xì)胞的順鉑耐藥相關(guān);(2)mi RNA-21可能通過負(fù)性調(diào)控PTEN的表達(dá)來調(diào)節(jié)上皮性卵巢癌細(xì)胞的順鉑耐藥。
【關(guān)鍵詞】：上皮性卵巢癌 mi R-21 化療耐藥 Taqman探針 實(shí)時(shí)熒光定量PCR mi R-21 上皮性卵巢癌 順鉑 化療耐藥 PTEN
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要2-5
• ABSTRACT5-11
• 第一部分11-23
• 引言11-12
• 第一章 材料與方法12-17
• 第二章 結(jié)果17-20
• 2.1 卵巢癌化療耐藥組、化療敏感組及正常人組血清MIR-21水平的比較17-18
• 2.2 上皮性卵巢癌化療耐藥組血清MIR-21水平與患者臨床病理特征的相關(guān)性18-20
• 第三章 討論20-21
• 參考文獻(xiàn)21-23
• 第二部分23-43
• 引言23-25
• 第一章 材料與方法25-34
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株25
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備及產(chǎn)地25
• 1.1.3 主要試劑及產(chǎn)地25-26
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟26-33
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)26-27
• 1.2.2 MTT法測(cè)定SKOV3/DDP相對(duì)于SKOV3的耐藥指數(shù)27-28
• 1.2.3 細(xì)胞總RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè)28
• 1.2.4 反轉(zhuǎn)錄28-29
• 1.2.5 real-time PCR檢測(cè)miR-21在SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)29-30
• 1.2.6 real-time PCR結(jié)果計(jì)算(2-△Ct法)30
• 1.2.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染30-31
• 1.2.8 細(xì)胞總蛋白的提取31
• 1.2.9 Western Blot31-33
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析33-34
• 第二章 結(jié)果34-41
• 2.1 SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的IC50值及耐藥指數(shù)34
• 2.2 REAL TIME PCR檢測(cè)MIR-21在SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)水平34-35
• 2.3 REAL TIME PCR檢測(cè)PTEN MRNA在SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)水平35-36
• 2.4 WESTERN BLOT檢測(cè)PTEN蛋白在SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)36-37
• 2.5 熒光顯微鏡下觀察卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率37
• 2.6 REAL-TIME PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞中MIR-21表達(dá)的變化37-38
• 2.7 REAL-TIME PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞中PTEN MRNA表達(dá)的變化38-39
• 2.8 MTT檢測(cè)轉(zhuǎn)染后卵巢癌細(xì)胞株對(duì)順鉑耐藥性的變化39-40
• 2.9 WESTERN BLOT檢測(cè)轉(zhuǎn)染后SKOV3和SKOV3/DDP細(xì)胞中的PTEN蛋白的表達(dá)40-41
• 第三章 討論41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 綜述46-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果55-56
• 致謝56-57

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