本文關(guān)鍵詞：GDF15對卵巢癌細胞遷移、增殖的影響及其可能機制

  更多相關(guān)文章： GDF15 uPA 卵巢癌 增殖 遷移

【摘要】：卵巢惡性腫瘤是女性生殖器常見的三大惡性腫瘤之一,由于卵巢癌早期癥狀不明顯并且缺乏特異的早期篩查及診斷方法,初期病變不易發(fā)現(xiàn),晚期病例也缺乏有效的治療手段,因此卵巢惡性腫瘤死亡率居于婦科惡性腫瘤首位。其中,上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC,簡稱卵巢癌)是最常見的卵巢惡性腫瘤,占卵巢惡性腫瘤的85%-90%。人生長分化因子15(growth differentiation factor15,GDF15)是TGF-β超家族成員之一,人們發(fā)現(xiàn)在包括卵巢癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中均有GDF15表達水平的異常升高,在結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜癌等腫瘤中血清高濃度的GDF15與不良的預(yù)后相關(guān)。在卵巢癌組織及腹水中GDF15表達水平與生存期呈負相關(guān),GDF15過表達還可促進卵巢腫瘤細胞的生長與增殖,增強腫瘤侵襲性。尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator,u PA)及其特異性受體u PAR(urokinase type plasminogen activator receptor)是纖溶酶原激活系統(tǒng)的重要成員,在腫瘤組織中二者相結(jié)合可促進纖溶酶原轉(zhuǎn)換為纖溶酶并激活金屬蛋白酶,進而促進細胞外基質(zhì)內(nèi)相關(guān)成分的降解,促進腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移,還可通過FAK/SRC/ERK等途徑調(diào)控腫瘤細胞的生長增殖及促癌基因的表達,進而促進腫瘤進展。有研究顯示胃癌細胞中GDF15可通過胞外信號傳導(dǎo)激酶1/2(ERK1/2)相關(guān)途徑上調(diào)u PA/u PAR系統(tǒng)活性,從而顯著增加腫瘤細胞的侵襲性。國內(nèi)關(guān)于GDF15在卵巢腫瘤中作用機制及其與u PA/u PAR系統(tǒng)的關(guān)系鮮有報道。目的:本研究通過轉(zhuǎn)染含有GDF15基因的質(zhì)粒,上調(diào)卵巢癌細胞SKOV3中GDF15在轉(zhuǎn)錄水平的表達,觀察上調(diào)GDF15m RNA的表達對卵巢癌細胞增殖、遷移能力的影響及u PA的表達情況,初步探討GDF15對卵巢癌細胞遷移、增殖能力影響的可能調(diào)控機制。方法:1按照無內(nèi)毒素大提質(zhì)粒試劑盒說明書中所示步驟提取兩種質(zhì)粒pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15和pc DNA3.1(+)-EGFP,并行瓊脂糖凝膠電泳鑒定。2將細胞分為空白對照組(SKOV3)、實驗組(SKOV3-GDF15)和陰性對照組(SKOV3-N),用Lipofectamine?2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別給予未轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15及轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP處理,轉(zhuǎn)染24h后熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染情況。3用SYBRGreen法進行熒光實時定量PCR檢測轉(zhuǎn)染24-48h后各組細胞中GDF15及u PAm RNA的相對表達量。4取瞬時轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15、pc DNA3.1(+)-EGFP的細胞及SKOV3細胞,在轉(zhuǎn)染24h后,胰酶消化并收集細胞,調(diào)整濃度后重新鋪板,待生長約2h細胞貼壁后進行MTS分析。設(shè)最初加入MTS的時間為0h,分別在細胞培養(yǎng)的0、24、48、72h每孔加入10μl MTS,繼續(xù)培養(yǎng)1-4h后酶標(biāo)儀檢測490nm處吸光度值。5對轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15及pc DNA3.1(+)-EGFP后24h的細胞與對照組行細胞劃痕實驗,檢測GDF15對SKOV3細胞的遷移能力的影響。結(jié)果:1提取的質(zhì)粒pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15、pc DNA3.1(+)-EGFP的完整性鑒定提取的兩種質(zhì)粒濃度在600ng/u L左右,提取質(zhì)粒后電泳條帶顯示一條帶,且電泳動速度較快,說明提取的質(zhì)粒以超螺旋結(jié)構(gòu)為主,可用于后續(xù)實驗,Fig.1。2轉(zhuǎn)染效果的觀察轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15、pc DNA3.1(+)-EGFP后24h在熒光顯微鏡下觀察可見細胞有綠色熒光,未轉(zhuǎn)染組未見熒光,說明轉(zhuǎn)染成功,Fig.2。3 SKOV3細胞轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15、pc DNA3.1(+)-EGFP之后GDF15與u PA的表達情況實時定量PCR對各組中GDF15和u PAm RNA的相對表達情況進行了檢測,結(jié)果顯示SKOV3-GDF15組與SKOV3-N、SKOV3相比,GDF15m RNA的表達量明顯升高,各組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P㩳0.05),u PAm RNA的表達量較SKOV3-N、SKOV3組也顯著升高,各組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P㩳0.05),Fig.3。4轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15之后對細胞增殖能力的影響分別在細胞培養(yǎng)的0、24、48、72h行MTS實驗檢測細胞的增殖情況,結(jié)果顯示,與未轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP組相比,轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15組細胞在24、48、72h各時間點的增殖速度明顯升高(P㩳0.05),并且在24h(即轉(zhuǎn)染后48h)的增殖速度最快,見Fig.4,Table 1。5轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15之后對卵巢癌細胞SKOV3遷移能力的影響對三組細胞行劃痕實驗,結(jié)果顯示對細胞進行劃痕繼續(xù)培養(yǎng)24小時后,與未轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP組相比,轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-EGFP-GDF15組細胞的遷移能力顯著增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P㩳0.05),Fig.5。結(jié)論:1上調(diào)GDF15m RNA的表達可顯著增加卵巢癌細胞遷移、增殖能力。2隨著卵巢癌細胞中GDF15m RNA表達的升高,u PAm RNA的表達也顯著升高,表明在卵巢癌細胞中可能存在GDF15/u PA調(diào)控機制3 GDF15促進卵巢癌細胞遷移、增殖的作用可能與u PA/u PAR系統(tǒng)相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：GDF15 uPA 卵巢癌 增殖 遷移
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-24
• 附圖24-30
• 附表30-31
• 討論31-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-39
• 綜述GDF15 在卵巢腫瘤中的研究展39-53
• 參考文獻46-53
• 致謝53-54
• 個人簡歷54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李博;張穎;辛?xí)匝?;GDF15基因在卵巢上皮性癌組織中的表達及其臨床意義[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2014年29期

，

本文編號：880863