本文關(guān)鍵詞：HPV16 E6、E7介導(dǎo)GSK3β通路對(duì)宮頸鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其作用機(jī)制研究

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【摘要】：子宮頸癌(cervical cancer,CC),是女性生殖系統(tǒng)發(fā)病率最高、最常見(jiàn)的惡性腫瘤。我國(guó)作為宮頸癌的高發(fā)區(qū)域之一,雖經(jīng)長(zhǎng)期的防治,其發(fā)病率及死亡率都仍保持較高水平,尤其近20-30年來(lái),發(fā)病率及死亡率上升趨勢(shì)明顯。宮頸癌的防治,尤其是預(yù)防及早期病變的篩查成為我們的重點(diǎn)工作[1]。人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)有200余種亞型,據(jù)引發(fā)生殖道如宮頸及外陰陰道病變的生物學(xué)行為將其分為高危型、低危型兩大類[2]。現(xiàn)已證實(shí)高危型人乳頭瘤病毒持續(xù)感染是宮頸癌主要的致病因素[3-4]。其中HPV E6、E7蛋白是HPV致癌的主要蛋白[5]。E6、E7分別通過(guò)結(jié)合并降解抑癌基因P53、pRb發(fā)揮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化功能[6]。但是,僅僅感染HPV并不足以導(dǎo)致宮頸細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化,HPV在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的具體作用機(jī)制仍不清楚。因此探索HPV感染在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制,尋找HPV致瘤信號(hào)中新的診治靶點(diǎn),發(fā)現(xiàn)HPV感染致病的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,將有助于對(duì)篩選的HPV感染人群進(jìn)行分流管理,并可為宮頸癌早期診斷和靶向治療提供新的思路,對(duì)宮頸癌的防治具有重要意義。糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)是普遍存在于真核細(xì)胞中的一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,不僅作為一種重要的限速酶參與糖原代謝過(guò)程,而且在胚胎發(fā)育、腫瘤細(xì)胞的凋亡、分化、作為調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子參與多條重要信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控等諸多方面發(fā)揮著重要作用[7-9]。有關(guān)gsk3β與腫瘤關(guān)系的研究頗多,但gsk3β在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用是促癌還是抑癌仍有較大爭(zhēng)議,有學(xué)者提出gsk3β對(duì)腫瘤的具體作用與腫瘤組織的特異性有關(guān)。目前宮頸鱗癌組織中g(shù)sk3β的表達(dá)及其活性狀態(tài)鮮有報(bào)道。宮頸鱗癌組織中hpv與gsk3β的關(guān)系如何?在hpv導(dǎo)致宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中,gsk3β扮演了怎樣的角色,到目前為止尚不明確。本實(shí)驗(yàn)采用(1)免疫組化方法檢測(cè)了宮頸鱗癌組織中hpv、gsk3β及其磷酸化蛋白(p-gsk3βser9、p-gsk3βtyr216)的表達(dá)情況,探討宮頸鱗癌組織中hpv感染與gsk3β蛋白表達(dá)是否存在相關(guān)性。(2)以hpve6、e7為目的片段基因,分別構(gòu)建了hpv16e6、e7、e6/e7重組質(zhì)粒并測(cè)序鑒定。(3)用hpv陰性的宮頸鱗癌細(xì)胞株c33a為研究對(duì)象,觀察hpv16e6、e7、e6/e7重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后宮頸癌細(xì)胞c33a的細(xì)胞周期、增殖、侵襲、遷移能力等生物學(xué)行為的變化。(4)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(rt-pcr)、westernblot檢測(cè)hpv16e6、e7、e6/e7重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后對(duì)gsk3β及其磷酸化蛋白(p-gsk3βser9、p-gsk3βtyr216)、gsk3β下游靶基因cyclind1和β-catenin蛋白表達(dá)的影響。本課題希望通過(guò)所設(shè)計(jì)的研究了解宮頸鱗癌組織中hpv與gsk3β的關(guān)系,并在體外實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步探討hpve6、e7對(duì)gsk3β及其磷酸化蛋白、gsk3β下游靶基因cyclind1和β-catenin的調(diào)控,為進(jìn)一步闡明hpv在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。研究結(jié)果顯示:1.宮頸癌組織中g(shù)sk3β、p-gsk3βser9和p-gsk3βtyr216表達(dá)陽(yáng)性率分別為18.8%、68.8%和12.5%。早期宮頸癌患者中g(shù)sk3β和p-gsk3βtyr216表達(dá)顯著高于中晚期宮頸癌患者(25.5%vs.4.0%,χ2=5.193,p=0.029;76.4%vs.52.0%,χ2=4.749,p=0.039),早期宮頸癌患者中p-gsk3βser9表達(dá)顯著低于中晚期宮頸癌患者(5.5%vs.28.0%,χ2=7.988,p=0.009)。在宮頸癌組織中隨著細(xì)胞學(xué)分級(jí)的降低,p-gsk3βser9陽(yáng)性率也隨之升高(7.4%、7.9%和33.3%,χ2=7.329,p=0.031)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的宮頸癌患者中g(shù)sk3β和p-gsk3βtyr216表達(dá)均顯著低于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的宮頸癌患者(5.9%vs.28.3%,χ2=6.427,p=0.018;52.9%vs.80.4%,χ2=6.878,p=0.014),p-GSK3βser9在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的宮頸癌患者中表達(dá)顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的宮頸癌患者(23.5%vs.4.3%,χ2=6.577,p=0.015)。HPV陽(yáng)性表達(dá)與GSK3β陽(yáng)性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)R=-0.392,p=0.001),與p-GSK3βtyr216陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)R=0.275,p=0.026),與p-GSK3βser9陽(yáng)性表達(dá)無(wú)相關(guān)性。2.HPV E7可顯著增加宮頸鱗癌C33A細(xì)胞S期比例,提示HPV E7可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞DNA的復(fù)制,從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。HPV E6、E7過(guò)表達(dá)可顯著增強(qiáng)C33A細(xì)胞侵襲遷移能力及增殖能力,并且HPV E6、E7兩者之間有協(xié)同作用。3.HPV E6、E7在較短時(shí)間(24h內(nèi))可通過(guò)GSK3β蛋白磷酸化激活,HPV E6、E7聯(lián)合對(duì)于激活GSK3β蛋白磷酸化具有協(xié)同作用。HPV E6、E7通過(guò)激活GSK3β蛋白磷酸化發(fā)揮對(duì)GSK3β下游靶基因CyclinD1、β-catenin基因的調(diào)控作用。綜上所述,我們初步證實(shí):HPV E6、E7通過(guò)激活GSK3β蛋白磷酸化發(fā)揮對(duì)GSK3β下游靶基因CyclinD1、β-catenin基因的調(diào)控作用,從而促進(jìn)了宮頸癌細(xì)胞的侵襲、遷移、增殖能力,導(dǎo)致惡性生物學(xué)行為。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 鱗癌 GSK3β HPV 侵襲 遷移 增殖
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-17
• 文獻(xiàn)回顧17-26
• 第一部分 HPV 致病機(jī)理的研究進(jìn)展17-20
• 第二部分 GSK3β 的研究進(jìn)展20-26
• 實(shí)驗(yàn)一GSK3β 及其磷酸化蛋白（p-GSK3βser9、p- GSK3βtyr216）在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及其與HPV表達(dá)的相關(guān)性26-37
• 1 材料26-29
• 2 方法29-31
• 3 結(jié)果31-35
• 4 討論35-37
• 實(shí)驗(yàn)二 HPV16 E6、E7及E6/E7重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定37-64
• 1 材料37-44
• 2 方法44-58
• 3 結(jié)果58-62
• 4 討論62-64
• 實(shí)驗(yàn)三 HPV16 E6、E7、E6/E7重組質(zhì)粒對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響以及對(duì)GSK3β 和下游靶基因的調(diào)控64-78
• 1 材料64-65
• 2 方法65-69
• 3 結(jié)果69-74
• 4 討論74-78
• 小結(jié)78-79
• 參考文獻(xiàn)79-85
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果85-87
• 致謝87

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 黃彤輝;孫曉紅;;Wnt/β-catenin信號(hào)通路在宮頸癌形成中的作用機(jī)制[J];蛇志;2014年01期

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本文編號(hào)：871892