本文關(guān)鍵詞：GM-CSF對子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖的影響及子宮結(jié)合帶干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)

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【摘要】：目的1.使用無血清培養(yǎng)基體外分離擴(kuò)增子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞,研究其生物學(xué)特性。2.判斷粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子對子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖的影響。3.建立子宮結(jié)合帶干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定方法。方法1.比較在無血清培養(yǎng)基中和含10%的胎牛血清培養(yǎng)基中子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞表型、增殖能力、細(xì)胞活率和分化能力等生物學(xué)特性。2.將術(shù)中取得的子宮內(nèi)膜用胰酶和膠原酶Ⅰ進(jìn)行消化、培養(yǎng)、擴(kuò)增。將細(xì)胞培養(yǎng)至第三代后,分別將細(xì)胞經(jīng)不同濃度的GM-CSF(Ong/ml, lng/ml,10ng/ml,100ng/ml)培養(yǎng),采用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀進(jìn)行表型分析、活率判斷、周期分析,通過CCK-8判斷其生物學(xué)生長特性,并在體外誘導(dǎo)其成脂、成骨、成軟骨分化。將子宮結(jié)合帶進(jìn)行分離、培養(yǎng)、鑒定。3.將手術(shù)中無菌取得的子宮內(nèi)肌層即子宮結(jié)合帶用胰酶和膠原酶Ⅰ進(jìn)行消化、培養(yǎng)、擴(kuò)增。采用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀進(jìn)行表型分析及存活率判斷,CCK-8法判斷其生長特性,并在體外誘導(dǎo)其成脂、成骨、成軟骨分化。結(jié)果第一部分1.無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞和有血清培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)相似,但是前者呈明顯的漩渦狀生長,更加細(xì)長,立體感更強(qiáng)。2.無血清和有血清培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜問充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物均呈陽性。3.無血清培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞活率更高；細(xì)胞增殖能力更強(qiáng)。第二部分1.從EnMSCs的生長密度來看,隨著GM-CSF濃度升高,接種同等密度的EnMSCs在接種24h和48h細(xì)胞密度差異不大,但是96h時不同濃度的GM-CSF下培養(yǎng)的EnMSCs細(xì)融合度產(chǎn)生了明顯差異。2.從EnMSCs活率來看隨著GM-CSF濃度升高,EnMSCs活率呈上升趨勢,在濃度為lOng/ml時,EnMSCs;舌率最高,但是差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.自EnMSCs培養(yǎng)第3d開始,不同濃度的GM-CSF對EnMSCs的增殖產(chǎn)生了不同的變化,且有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。第三部分1.所獲細(xì)胞傳代后能迅速貼壁,呈長梭形；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,表面標(biāo)志物CD90、CD73、CD105、CD29、CD44、CD13、CD166、HLA-ABC呈陽性表達(dá),而CD34、CD45、CD14、HLA-DR、CD19呈陰性表達(dá)。2.CCK-8生長曲線呈S形。3.誘導(dǎo)分化實驗結(jié)果顯示,子宮結(jié)合帶干細(xì)胞具有成脂、成骨和成軟骨的分化能力。結(jié)論1.無血清培養(yǎng)基能夠在體外擴(kuò)增子宮內(nèi)膜問充質(zhì)干細(xì)胞,并使得其生物學(xué)特性更優(yōu)于胎牛血清培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞,且分化能力無改變。2.GM-CSF對EnMSCs的增殖能力有明顯的促進(jìn)作用,并且隨著GM-CSF的濃度的增高呈遞增趨勢。3. uJZSCs具有很強(qiáng)的增殖擴(kuò)增能力,可作為間充質(zhì)干細(xì)胞的來源。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜 間充質(zhì)干細(xì)胞 粒細(xì)肥—巨噬細(xì)胞刺激因子 子宮結(jié)合帶干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R711.7
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 第一部分 評估無血清培養(yǎng)子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞的可行性12-24
• 材料與方法12-14
• 結(jié)果14-18
• 討論18-20
• 參考文獻(xiàn)20-24
• 第二部分 GM-CSF對子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖的影響24-35
• 材料與方法24-26
• 結(jié)果26-31
• 討論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 第三部分 子宮結(jié)合帶干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定35-46
• 材料與方法35-38
• 結(jié)果38-42
• 討論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 總結(jié)46-47
• 文獻(xiàn)綜述47-53
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況53-54
• 中英文~.略詞匯對照54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 湯元杰;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在前列腺癌骨轉(zhuǎn)移中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

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本文編號：858482