本文關(guān)鍵詞：整體動(dòng)物水平初步探討DNMT3A在人子宮腺肌病發(fā)病過(guò)程中的作用

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【摘要】：目的:我們的前期研究發(fā)現(xiàn)來(lái)自臨床確診的子宮腺肌病(adenomyosis,AM)患者異位子宮內(nèi)膜組織及從組織中分離、鑒定的間質(zhì)細(xì)胞(ESCs)DNMT3A的mRNA與蛋白表達(dá)均顯著下調(diào);經(jīng)轉(zhuǎn)染DNMT3A重組慢病毒表達(dá)載體所構(gòu)建的DNMT3A過(guò)表達(dá)的ESCs+DNMT3A轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的細(xì)胞增殖率及遷移率減慢,細(xì)胞凋亡增加。然而,是否在體內(nèi)也存在相似結(jié)果仍然未知,因此,我們進(jìn)一步從整體動(dòng)物水平探討DNMT3A在子宮腺肌病發(fā)病過(guò)程中的作用。方法:收集臨床確診的AM患者異位子宮內(nèi)膜組織10例及正常對(duì)照內(nèi)膜組織7例,分別分離培養(yǎng)ESCs,蛋白質(zhì)印記法檢測(cè)DNMT3A在上述ESCs中的蛋白表達(dá)水平。設(shè)立正常ESCs(正常組)、異位ESCs(異位組);并選用DNMT3A典型低表達(dá)的異位ESCs,轉(zhuǎn)染DNMT3A過(guò)表達(dá)慢病毒及對(duì)照慢病毒分別構(gòu)建GV205Flag-DNMT3A/異位ESCs(陽(yáng)性組)和GV205/異位ESCs(陰性組)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞;分別注射于用17-β雌激素緩釋片頸部皮下包埋人工控制生理周期的裸鼠背部皮下,每組12只裸鼠,動(dòng)態(tài)觀察接種細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)情況。結(jié)果:(1)DNMT3A在異位ESCs中的蛋白表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組ESCs;(2)蛋白質(zhì)印記法檢測(cè)到DNMT3A在GV205Flag-DNMT3A/異位ESCs中高表達(dá),確定轉(zhuǎn)染成功;(3)以免疫組化法檢測(cè)四組裸鼠細(xì)胞種植部位組織處人間質(zhì)細(xì)胞特征性波形蛋白表達(dá),均為陽(yáng)性;(4)測(cè)量統(tǒng)計(jì)細(xì)胞接種部位瘤樣組織,陽(yáng)性組平均體積為15.375±9.546mm3,小于陰性組平均體積16.75±9.907mm3,比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。正常對(duì)照組平均體積為18.417±8.218mm3,顯著小于異位組平均體積32±16.548mm3,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。異位組平均體積大于陰性組和陽(yáng)性組,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)DNMT3A高表達(dá)能夠抑制ESCs的增殖,減緩瘤樣組織的生長(zhǎng),在整體動(dòng)物水平上進(jìn)一步表明DNMT3A在AM的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用;(2)本實(shí)驗(yàn)利用人ESCs接種至人工控制生理周期的裸鼠背部皮下進(jìn)行整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn),為相似疾病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究提供參考。
【關(guān)鍵詞】：DNMT3A 子宮腺肌病 子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞 整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R711.74
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料與方法11-24
• 2.1 主要材料及試劑11-12
• 2.2 儀器設(shè)備和產(chǎn)地12-13
• 2.3 實(shí)驗(yàn)步驟13-24
• 2.3.1 收集標(biāo)本13
• 2.3.2 異位及正常對(duì)照ESCs的分離培養(yǎng)及鑒定13-15
• 2.3.3 蛋白質(zhì)印記法檢測(cè)異位及正常ESCs中DNMT3A蛋白表達(dá)情況15-19
• 2.3.4 DNMT3A過(guò)表達(dá)慢病毒載體感染異位ESCs19-20
• 2.3.5 蛋白質(zhì)印記法檢測(cè)GV205Flag-DNMT3A/異位ESCs中DNMT3A的蛋白表達(dá)情況(步驟同 2.3.3)20
• 2.3.6 裸鼠整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)20-22
• 2.3.7 測(cè)量細(xì)胞種植部位瘤樣組織的體積22-23
• 2.3.8 免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞注射部位瘤樣組織的波形蛋白表達(dá)23
• 2.3.9 數(shù)據(jù)處理23-24
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-30
• 3.1 ESCs的細(xì)胞鑒定24
• 3.2 蛋白質(zhì)印記法檢測(cè)ESCs中DNMT3A的蛋白表達(dá)水平24-25
• 3.3 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中DNMT3A的蛋白表達(dá)情況25-26
• 3.4 裸鼠整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)26-30
• 3.4.1 裸鼠的飼養(yǎng)26
• 3.4.2 雌激素緩釋片的頸部皮下包埋及細(xì)胞接種過(guò)程26-27
• 3.4.3 測(cè)量細(xì)胞接種部位瘤樣組織體積27-29
• 3.4.4 免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞注射部位組織波形蛋白的表達(dá)29-30
• 第4章 討論30-33
• 第5章 結(jié)論33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述38-49
• 參考文獻(xiàn)45-49

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：856683