本文關(guān)鍵詞：納秒電脈沖誘導(dǎo)人卵巢癌順鉑敏感及耐藥細(xì)胞凋亡及機(jī)制研究

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【摘要】：卵巢癌為死亡率居首位的女性生殖器惡性腫瘤,耐藥性的產(chǎn)生直接影響卵巢癌化療效果及患者生存率,因此克服卵巢癌細(xì)胞耐藥是卵巢癌治療亟需解決的問題。納秒脈沖電場(nanosecond pulsed electric fields, nsPEFs)因其特有的細(xì)胞內(nèi)處理效應(yīng)及非熱損傷特點(diǎn),受到國內(nèi)外生物工程領(lǐng)域和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究者們極大關(guān)注,研究表明利用納秒脈沖電場治療腫瘤具有潛在優(yōu)勢。研究表明在特定脈沖參數(shù)納秒脈沖電場作用后,線粒體介導(dǎo)了某些腫瘤細(xì)胞凋亡。本課題組前期實(shí)驗(yàn)提示,納秒脈沖電場有可能誘導(dǎo)COC1和COC1/DDP細(xì)胞線粒體途徑凋亡。本實(shí)驗(yàn)選擇體外培養(yǎng)的人卵巢癌順鉑敏感細(xì)胞株COCl及耐藥細(xì)胞株COC1/DDP為研究對象,試圖利用納秒脈沖電場跨細(xì)胞膜傳遞而直接作用于細(xì)胞核、線粒體等亞細(xì)胞單位的特性,以期為納秒級脈沖電場對耐藥腫瘤的治療提供初步依據(jù)。目的：探討納秒脈沖電場對體外培養(yǎng)的人卵巢癌順鉑敏感細(xì)胞COC1及順鉑耐藥細(xì)胞COC1/DDP的生長抑制、凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)及可能機(jī)制。方法：COC1和COC1/DDP細(xì)胞處理組以脈寬32 ns、場強(qiáng)10 kV/cm的納秒脈沖電場處理10 min,對照組細(xì)胞未經(jīng)nsPEF處理。WST-8法分析nsPEF處理后0.5 h、6 h、12 h和24 h, COC1及COC1/DDP實(shí)驗(yàn)組及對照組細(xì)胞存活率；為研究nsPEFs處理后12 h凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)及可能機(jī)制,應(yīng)用Annexin V-FITC/PI雙染結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,同時用Hochest33342熒光染色觀察細(xì)胞核變化；JC-1熒光染色定量及定性分析線粒體膜電位變化；化學(xué)發(fā)光法檢測caspase-3蛋白酶活性；PI染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期。結(jié)果：1.納秒脈沖電場處理后0.5 h、6 h、12 h和24 h,與對照組相比,COC1處理組細(xì)胞存活率降低(p=-0.001；p=-0.001；P=0.001； P=0.013),COC 1/DDP處理組細(xì)胞存活率也降低(P0.001；P=0.001；P0.001；P0.001),兩種細(xì)胞在納秒脈沖作用后12h細(xì)胞存活率最低。納秒脈沖作用后各時間點(diǎn),與COC 1細(xì)胞相比,COC 1/DDP細(xì)胞存活率較高(p=-0.001；P0.001；P0.001；p=-0.026).2.納秒脈沖電場處理后12 h,與對照組相比,COC1處理組細(xì)胞早期及晚期凋亡率均高(p=-0.001；p=-0.001),COC1/DDP處理組細(xì)胞早期及晚期凋亡率也增加(P=-0.005；P=-0.016),與COC1處理組相比,COC 1/DDP處理組早期及晚期凋亡率均較低(P=-0.002；P=0.001)；Hochest33342染色兩種細(xì)胞處理組均可以明顯地看到凋亡小體和呈亮藍(lán)色致密濃染的顆粒塊狀熒光。3.納秒脈沖電場處理后12 h,JC-1熒光染色COC1/DDP處理組細(xì)胞出現(xiàn)較多橘黃色或彌散分布的綠色熒光,COC 1處理組細(xì)胞則大多呈彌散分布的綠色熒光；與對照組相比,COC1處理組及COC1/DDP處理組JC-1紅／綠熒光比值均降低(P=-0.001；P=0.002)。4.納秒脈沖電場處理后12 h,COC 1細(xì)胞處理組caspase-3活性為對照組1.26±0.04倍,COC 1/DDP細(xì)胞處理組caspase-3活性為對照組1.16±0.02倍,兩者處理組caspase-3活性均比對照組增高(P=0.000；P=0.000)。5.納秒脈沖電場處理后12 h,與對照組相比,COC1處理組處于G0/G1期細(xì)胞百分率減少(P=0.002),處于S期細(xì)胞百分率升高(P=0.007)。COC1/DDP細(xì)胞處于G0/G1期、S期及G2/M期細(xì)胞百分率對照組與處理組間均無明顯差別(P0.05)。結(jié)論：納秒脈沖電場抑制COC1及COC1/DDP細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,阻滯COC 1細(xì)胞周期于S期。在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中,線粒體的膜電位(mitochondrial transmembrane potential,ΔTm)下降,caspase-3蛋白酶活性增強(qiáng),線粒體可能在納秒脈沖電場誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中起重要作用。
【關(guān)鍵詞】：納秒脈沖電場 人卵巢癌細(xì)胞 化療耐藥 細(xì)胞凋亡 線粒體跨膜電位
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-15
• 1 材料與方法15-20
• 1.1 材料15-17
• 1.1.1 細(xì)胞15-16
• 1.1.2 主要試劑16
• 1.1.3 主要儀器設(shè)備16-17
• 1.2 方法17-20
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17
• 1.2.2 納秒脈沖電場處理17
• 1.2.3 WST-8法檢測細(xì)胞存活率17-18
• 1.2.4 Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率18
• 1.2.5 熒光顯微鏡檢測Hochest33342熒光18
• 1.2.6 JC-1檢測線粒體跨膜電位18-19
• 1.2.7 化學(xué)發(fā)光法檢測caspase-3蛋白酶活性19
• 1.2.8 PI染色、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期19-20
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法20
• 2 結(jié)果20-25
• 2.1 納秒脈沖電場降低COC1及COC1/DDP細(xì)胞存活率20-21
• 2.2 納秒脈沖電場誘導(dǎo)COC1及COC1/DDP細(xì)胞凋亡21-22
• 2.3 納秒脈沖電場引起COC1及COC1/DDP細(xì)胞線粒體膜電位降低及caspase-3蛋白酶活性增強(qiáng)22-24
• 2.4 納秒脈沖電場對COC1及COC1/DDP細(xì)胞周期的影響24-25
• 3 討論25-28
• 全文總結(jié)28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 文獻(xiàn)綜述32-41
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 致謝41-42
• 研究生期間發(fā)表論文42

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