本文關(guān)鍵詞：TLR4高表達(dá)對HPV感染陽性宮頸癌細(xì)胞功能的影響研究

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【摘要】：宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一,HPV持續(xù)感染是其主要致病因素。包括TLR4在內(nèi)的人類天然免疫受體家族TLRs在機體感染防御中發(fā)揮重要作用,而且與炎癥性腫瘤的發(fā)生有著密切聯(lián)系,它可通過介導(dǎo)慢性炎癥反應(yīng)調(diào)控腫瘤微環(huán)境,直接或間接地影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。因此,與炎癥和免疫極度相關(guān)的TLR4及其信號通路無疑成為宮頸癌這類炎癥性腫瘤發(fā)生機制研究的良好靶點和途徑。但目前,有關(guān)TLR4對宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的作用及作用機制的研究報道還較少。本研究從比較HPV高危亞型——HPV-16感染(HPV-16陽性)的宮頸癌SiHa細(xì)胞和無HPV感染(HPV陰性)的宮頸癌C33A細(xì)胞中的TLR4差異性表達(dá)檢測(實時熒光定量PCR)入手,進(jìn)一步用流式細(xì)胞術(shù)、Annex V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒、MTS、Wound healing、Transwell等方法進(jìn)行TLR4高表達(dá)(LPS刺激)對宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞周期、凋亡抵抗、生長繁殖、侵襲轉(zhuǎn)移等方面的作用影響研究,以期揭示TLR4介入HPV感染對宮頸癌的實際作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1.TLR4在HPV感染的宮頸癌細(xì)胞SiHa中高表達(dá),即HPV感染可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的TLR4表達(dá)。2.TLR4協(xié)同HPV感染可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞繁殖。3.TLR4協(xié)同HPV感染可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的抗凋亡。4.TLR4協(xié)同HPV感染可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力。5.TLR4的高表達(dá)在一定程度上阻滯HPV感染陽性宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)入,可能以此適當(dāng)進(jìn)行細(xì)胞繁殖的調(diào)節(jié)。綜上,我們的研究結(jié)果綜合顯示：TLR4在HPV感染的宮頸癌細(xì)胞株上具有更為活躍的表達(dá)；而TLR4的高表達(dá)總體對HPV感染導(dǎo)致的宮頸癌的發(fā)生發(fā)展起到促進(jìn)作用。這在一定程度上提示：TLR4通路的激活可能是HPV感染導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的機制之一,靶向TLRs的宮頸癌臨床應(yīng)用基礎(chǔ)研究值得進(jìn)一步開展。
【關(guān)鍵詞】：Toll樣受體4 宮頸癌 人乳頭狀瘤病毒 SiHa(HPV-16陽性)細(xì)胞 C33A(HPV陰性)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 縮略詞對照表9-11
• 第一章 前言11-17
• 1 宮頸癌的概述11-14
• 1.1 宮頸癌流行病學(xué)11
• 1.2 宮頸癌的癥狀11-12
• 1.3 宮頸癌的預(yù)防12
• 1.4 人乳頭狀瘤病毒12-13
• 1.5 高危型HPV16引發(fā)宮頸癌的機制13-14
• 2 TLR4與宮頸癌的關(guān)系14-16
• 2.1 TLR4分子概述14-15
• 2.2 TLR4與炎癥腫瘤——宮頸癌的關(guān)系15-16
• 3 本研究的目的和意義16-17
• 第二章 材料和方法17-27
• 1 主要儀器設(shè)備17-18
• 2 主要實驗試劑18-19
• 3 實驗材料19
• 4 實驗內(nèi)容和方法19-26
• 4.1 細(xì)胞培養(yǎng)19-21
• 4.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇19
• 4.1.2 換液19-20
• 4.1.3 細(xì)胞傳代20
• 4.1.4 細(xì)胞凍存20-21
• 4.2 TLR4表達(dá)的差異檢測——qRT-PCR21-23
• 4.2.1 總RNA的提取21-22
• 4.2.2 TLR4引物設(shè)計22
• 4.2.3 qRT-PCR22-23
• 4.3 TLR4的表達(dá)對C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞周期的影響——流式細(xì)胞術(shù)檢測23-24
• 4.4 細(xì)胞增殖比MTS法檢測24
• 4.5 TLR4的表達(dá)對C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響比較24-26
• 4.5.1 細(xì)胞遷移檢測——Wound-Healing24-25
• 4.5.2 細(xì)胞侵襲檢測——Transwell25-26
• 5 數(shù)據(jù)分析26-27
• 第三章 實驗結(jié)果與分析27-39
• 1 qRT-PCR法進(jìn)行的TLR4表達(dá)比較檢測27-29
• 1.1 無LPS刺激時C33A細(xì)胞與SiHa細(xì)胞TLR4表達(dá)的比較27
• 1.2 不同濃度LPS刺激下C33A細(xì)胞與SiHa細(xì)胞TLR4表達(dá)的比較27-28
• 1.3 25ug/ml LPS刺激下C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞不同時間段TLR4的表達(dá)比較28-29
• 2 MTS細(xì)胞增殖實驗29
• 3 C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞的周期檢測29-33
• 3.1 無LPS處理C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞細(xì)胞周期比較29-31
• 3.2 LPS處理C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞對細(xì)胞周期的影響31-33
• 4 C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞的凋亡檢測33-35
• 4.1 無LPS刺激下C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞凋亡檢測33-34
• 4.2 LPS處理C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞后,對細(xì)胞凋亡的影響34-35
• 5 細(xì)胞遷移檢測35-37
• 5.1 無LPS處理C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞的遷移能力比較35-36
• 5.2 LPS處理C33A細(xì)胞和SiHa細(xì)胞對細(xì)胞遷移能力的影響36-37
• 6 細(xì)胞侵襲檢測37-39
• 第四章 討論39-42
• 1 HPV感染可促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞TLR4的表達(dá)39-40
• 2 TLR4對SiHa及C33A細(xì)胞繁殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移和細(xì)胞周期的影響比較40-42
• 2.1 TLR4與HPV感染聯(lián)合促進(jìn)腫瘤細(xì)胞繁殖40
• 2.2 TLR4與HPV感染聯(lián)合促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的抗凋亡40-41
• 2.3 TLR4與HPV感染聯(lián)合促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力41
• 2.4 TLR4的高表達(dá)在一定程度上阻滯HPV感染細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)入,可能以此進(jìn)行細(xì)胞繁殖的調(diào)節(jié)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 致謝45

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本文編號：767967