本文關(guān)鍵詞：GRIM-19在小鼠圍著床期子宮內(nèi)膜中表達(dá)及其作用的研究

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【摘要】：目的胚胎著床是生命開始的初始環(huán)節(jié),包括定位、黏附、植入三個(gè)步驟,其調(diào)控機(jī)制復(fù)雜而精細(xì)。GRIM-19 (gene associated with retinoid-interferon-induced mortality-19)為干擾素/維甲酸聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因(GRIMs)家族成員之一,是線粒體復(fù)合物I的一部分,在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和免疫反應(yīng)等方面發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)GRIM-19在早期胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用,但目前其在胚胎著床中的作用未曾有過相關(guān)報(bào)道。本課題通過研究GRIM-19在小鼠圍著床期子宮內(nèi)膜的表達(dá)和定位情況,探討GRIM-19在胚胎著床中的作用。在此基礎(chǔ)上,通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究GRIM-19在著床過程中對(duì)細(xì)胞凋亡及免疫反應(yīng)的影響,進(jìn)一步探討GRIM-19在胚胎著床中的可能作用機(jī)制。研究方法體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：收集早期妊娠第1-6天小鼠子宮組織,采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)GRIM-19蛋白在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)及定位情況；收集早期妊娠、假孕和雌孕激素處理小鼠子宮組織,采用Western blotting和Real-time PCR檢測(cè)GRIM-19蛋白和mRNA水平；原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)方法檢測(cè)早期妊娠第1-6天小鼠子宮組織細(xì)胞凋亡情況。體外實(shí)驗(yàn)：采用pEGFP GRIM-19質(zhì)粒GRIM-19-siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)使RL95-2細(xì)胞株過表達(dá)或低表達(dá)GRIM-19,檢測(cè)其對(duì)RL95-2-BeWo共培養(yǎng)體外著床模型球狀體粘附率的影響,AnnexinV/PI雙染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；采用Westernblotting和Real-time PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后STAT3、TNF-α及IL-11蛋白和mRNA水平。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差、中位數(shù)(第一個(gè)四分位數(shù),第三個(gè)四分位數(shù))或數(shù)字表示,組間差異采用獨(dú)立樣本資料的U檢驗(yàn),t檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)。P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1. GRIM19在小鼠正常妊娠1-6天子宮內(nèi)膜的腔上皮和腺上皮細(xì)胞均有表達(dá),且表達(dá)具有時(shí)間特異性,GRIM-19蛋白和mRNA在妊娠D4天著床窗口期子宮內(nèi)膜中表達(dá)水平顯著低于妊娠D0-3及D5-6天,p0.05。假孕小鼠D1-6天子宮內(nèi)膜組織中GRIM-19蛋白和mRNA表達(dá)量無明顯變化(p0.05)。2.孕激素組GRIM19蛋白和mRNA水平較對(duì)照組表達(dá)無顯著差異(p0.05)但雌激素和雌+孕激素組表達(dá)明顯降低(p0.05)3.小鼠正常妊娠D4(著床窗口期)子宮內(nèi)膜組織中細(xì)胞凋亡明顯減少。4. pEGFP GRIM-19質(zhì)粒和GRIM-19-siRNA轉(zhuǎn)染RL95-2細(xì)胞后,GRIM-19過表達(dá)組球狀體粘附率(37.8±2.13)明顯低于對(duì)照組(84.2±1.56)及干擾組(79.8±1.72)(p0.05)。5. GRIM-19過表達(dá)組與對(duì)照組和干擾組相比,細(xì)胞凋亡明顯增加(p0.05)6. GRIM-19過表達(dá)組,STAT3及IL-11蛋白和mRNA水平明顯減低,TNF-α蛋白和mRNA水平明顯升高。GRIM-19干擾組,STAT3及IL-11蛋白和mRNA水平明顯升高,TNF-α蛋白和mRNA水平明顯減低。結(jié)論GRIM-19在胚胎著床過程中發(fā)揮重要作用,GRIM-19可能通過與多種細(xì)胞因子的相互作用來調(diào)控細(xì)胞凋亡和免疫反應(yīng)從而參與著床過程,有望成為新型抗生育技術(shù)的潛在靶分子。
【關(guān)鍵詞】：干擾素/維甲酸聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因 子宮內(nèi)膜 胚胎著床
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714.8
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 主要符號(hào)說明10-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-27
• 結(jié)果27-29
• 討論29-33
• 結(jié)論33-34
• 附圖34-43
• 附表43-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章52-54
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表54

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7 王s，

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