本文關(guān)鍵詞：Foxo3a基因調(diào)控大鼠卵巢顆粒細(xì)胞體外發(fā)育及預(yù)防順鉑對卵巢的毒性作用

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【摘要】：目的研究Foxo3a基因?qū)Υ笫舐殉差w粒細(xì)胞體外發(fā)育的調(diào)控及其預(yù)防順鉑卵巢毒性作用。方法大鼠原代顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng),利用HE染色法及免疫熒光法進(jìn)行原代顆粒細(xì)胞鑒定;構(gòu)建攜帶Foxo3a基因的重組腺病毒AD-r Foxo3a,利用RT-PCR及Western-blot法檢測Foxo3a表達(dá);實(shí)驗(yàn)分為3組:實(shí)驗(yàn)組(AD-r Foxo3a組)、陰性對照組(r AD組)及空白對照組(Control組),分別繪制各組細(xì)胞生長曲線,Western-blot法檢測各組cyclin D1、p27、Bax、Bim蛋白表達(dá),利用流式細(xì)胞術(shù)、Hoechst33342/PI法分別檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞加入最適濃度順鉑后細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果(1)體外分離培養(yǎng)大鼠原代卵巢顆粒細(xì)胞存活率90%,細(xì)胞純度95%;(2)重組腺病毒AD-r Foxo3a感染顆粒細(xì)胞36 h后Foxo3a基因在m RNA水平高表達(dá),感染48 h后在蛋白水平高表達(dá);(3)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖受到抑制,G1期細(xì)胞比例及細(xì)胞凋亡率較空白對照組及實(shí)驗(yàn)對照組增加(P0.01),后兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(3)實(shí)驗(yàn)組Bim、p27、cyclin D1蛋白較對照組高表達(dá),而各組Bax蛋白表達(dá)無明顯差異;(4)加入順鉑24 h后實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率高于空白對照組及實(shí)驗(yàn)對照組(P0.01),后兩組細(xì)胞凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論過表達(dá)Foxo3a基因在體外可能通過促進(jìn)cyclin D1和p27蛋白表達(dá)誘導(dǎo)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞靜止在G1期,通過增加Bim蛋白表達(dá)誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡;同時過表達(dá)Foxo3a基因在體外不能逆轉(zhuǎn)順鉑導(dǎo)致的顆粒細(xì)胞凋亡,其對于卵泡發(fā)育的調(diào)控及預(yù)防順鉑對卵巢的毒性作用還有待體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院婦產(chǎn)科;廣州荔灣區(qū)中醫(yī)醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【關(guān)鍵詞】： Foxoa基因 重組腺病毒 卵巢顆粒細(xì)胞 順鉑
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81041101) 廣東省科技計(jì)劃(2013B021800145)~~
【分類號】：R711.75
【正文快照】： 卵巢早衰(POF)是指女性在40歲以前發(fā)生的以閉經(jīng)、不育、雌激素缺乏及促性腺激素水平升高為特征的一種疾病[1]。其中由于化療藥物細(xì)胞毒性作用導(dǎo)致的化療性卵巢早衰(CIPOF)是導(dǎo)致POF的一個重要原因[2]。近年來,叉頭轉(zhuǎn)錄因子FOXO亞家族成員之一Foxo3a被認(rèn)為在保護(hù)卵巢功能方面具

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本文編號：737370