本文關(guān)鍵詞：土槿乙酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制

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【摘要】：子宮內(nèi)膜癌是一種常見(jiàn)的生殖道惡性疾病,嚴(yán)重威脅女性的身體健康。子宮內(nèi)膜癌約占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%,其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈明顯上升趨勢(shì)。約有28%的子宮內(nèi)膜癌患者在確診時(shí)已經(jīng)發(fā)生局部或遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移。傳統(tǒng)化療藥物毒副反應(yīng)較大,對(duì)正常細(xì)胞也有很強(qiáng)的殺傷作用,尤其是晚期以及復(fù)發(fā)性的的子宮內(nèi)膜癌患者的治療十分棘手。因此,臨床上亟需尋找一種毒副作用小,且可抑制腫瘤遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的治療藥物。土荊皮是松科植物金錢(qián)松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥根皮或近根樹(shù)皮,其性溫、味辛、歸肺、脾經(jīng),氣微,味苦而澀,有毒,具有殺蟲(chóng)止癢的功效,常用于治療癬癥。土槿乙酸(Pseudolaric acid B, PAB)是從土荊皮中提取的主要成分之一,為二萜酸化合物,分子式為C23H28O8,具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒作用。實(shí)驗(yàn)方法：1.土槿乙酸誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞凋亡的研究。采用常規(guī)方法培養(yǎng)Ishikawa細(xì)胞,觀察給藥后的Ishikawa細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度和不同給藥時(shí)間土槿乙酸對(duì)Ishikawa細(xì)胞增殖的影響并計(jì)算IC50值；流式細(xì)胞分析術(shù)檢測(cè)不同濃度和不同作用時(shí)間土槿乙酸對(duì)Ishikawa細(xì)胞的周期、凋亡情況的影響。2.土槿乙酸抑制人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞轉(zhuǎn)移的研究。采用平板克隆方法檢測(cè)不同濃度的土槿乙酸對(duì)Ishikawa細(xì)胞形成克隆能力的影響；劃痕愈合方法檢測(cè)不同濃度不同時(shí)間土槿乙酸作用于Ishikawa細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞劃痕愈合能力的影響；Transwell培養(yǎng)方法檢測(cè)不同濃度土槿乙酸對(duì)Ishikawa細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。3.土槿乙酸誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞Ishikawa凋亡及抑制其轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。采用Western-Blotting方法在蛋白水平檢測(cè)不同濃度土槿乙酸作用不同作用時(shí)間后,Ishikawa細(xì)胞增值信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白ERK1/2、p-ERK1/2蛋白及腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白VEGF、MMP9及E-cad等表達(dá)情況的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.不同濃度、不同作用時(shí)間PAB處理人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞增殖有顯著影響,PAB對(duì)Ishikawa細(xì)胞的IC50值為19.332μM; PAB能夠體外誘導(dǎo)Ishikawa細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期G2/M期阻滯從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。2.不同濃度的PAB作用于Ishikawa細(xì)胞后,劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PAB能夠明顯抑制細(xì)胞遷移；Transwell培養(yǎng)侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PAB顯著降低Ishikawa細(xì)胞穿膜的個(gè)數(shù)；平板克隆結(jié)果顯示PAB作用于Ishikawa細(xì)胞后,顯著降低克隆形成率。3.不同濃度的PAB作用于Ishikawa細(xì)胞后,蛋白水平上p-ERKl/2與總ERK1/2的比值降低,VEGF、MMP9蛋白表達(dá)下調(diào),E-cad蛋白表達(dá)上調(diào)。結(jié)論：1.土槿乙酸可以誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞凋亡。2.土槿乙酸可以抑制人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞轉(zhuǎn)移。3.土槿乙酸通過(guò)影響細(xì)胞增殖信號(hào)通路的關(guān)鍵分子MAPK及轉(zhuǎn)移相關(guān)基因蛋白MMP9、E-cad、VEGF的表達(dá)發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 Ishikawa細(xì)胞 土槿乙酸 凋亡 轉(zhuǎn)移 機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-14
• 引言14-19
• 0.1 子宮內(nèi)膜癌14-17
• 0.1.1 子宮內(nèi)膜癌流行現(xiàn)狀14-15
• 0.1.2 子宮內(nèi)膜癌病理現(xiàn)狀15
• 0.1.3 子宮內(nèi)膜癌治療進(jìn)展15-17
• 0.2 土槿乙酸簡(jiǎn)介17-18
• 0.3 本課題的設(shè)計(jì)思想及研究?jī)?nèi)容18-19
• 第1章 土槿乙酸誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞凋亡的研究19-34
• 1.1 材料與儀器19-21
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料19
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑19-20
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器20-21
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-25
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 1.2.2 MTT比色法檢測(cè)不同濃度及不同作用時(shí)間土槿乙酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞增殖的影響22-23
• 1.2.3 FCM檢測(cè)不同濃度及不同作用時(shí)間土槿乙酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞周期的影響23-24
• 1.2.4 FCM檢測(cè)不同濃度及不同作用時(shí)間土槿乙酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞凋亡的影響24-25
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-31
• 1.3.1 土槿乙酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞形態(tài)的影響25
• 1.3.2 MTT法檢測(cè)土槿乙酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞增殖的影響25-27
• 1.3.3 FCM檢測(cè)不同濃度及不同作用時(shí)間土槿乙酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞凋亡的影響27-29
• 1.3.4 FCM檢測(cè)不同濃度及不同作用時(shí)間土槿乙酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞周期的影響29-31
• 1.4 討論31-32
• 1.5 小結(jié)32-34
• 第2章 土槿乙酸抑制人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞轉(zhuǎn)移的研究34-48
• 2.1 材料與儀器34-35
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料34
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑34-35
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器35
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法35-38
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)35
• 2.2.2 粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度土槿乙酸作用后對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞粘附能力的影響35-36
• 2.2.3 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度土槿乙酸作用后對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞遷移能力的影響36-37
• 2.2.4 Transwell方法檢測(cè)不同作用濃度土槿乙酸作用后對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞侵襲能力的影響37
• 2.2.5 平板克隆方法檢測(cè)不同作用濃度土槿乙酸作用后對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞克隆形成能力的影響37-38
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-46
• 2.3.1 粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)土槿乙酸對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞粘附能力的影響38-39
• 2.3.2 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度土槿乙酸作用后對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞遷移能力的影響39-42
• 2.3.3 Transwell方法檢測(cè)不同作用濃度土槿乙酸作用后對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞侵襲能力的影響42-44
• 2.3.4 平板克隆方法檢測(cè)不同作用濃度土槿乙酸作用后對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞克隆形成能力的影響44-46
• 2.4 討論46-47
• 2.5 小結(jié)47-48
• 第3章 土槿乙酸誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞Ishikawa凋亡及抑制其轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制48-60
• 3.1 材料與方法48-50
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料48-49
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑49
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器49-50
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法50-53
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)50
• 3.2.2 Western blot檢測(cè)土槿乙酸作用后人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞中蛋白表達(dá)的變化50-53
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-56
• 3.3.1 Western blot法檢測(cè)土槿乙酸作用后人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞中相關(guān)蛋白表達(dá)的變化53-56
• 3.4 討論56-58
• 3.4.1 PAB誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的研究信號(hào)56-57
• 3.4.2 PAB抑制人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞轉(zhuǎn)移信號(hào)通路的研究信號(hào)57-58
• 3.5 小結(jié)58-60
• 第4章 結(jié)論與展望60-62
• 4.1 結(jié)論60-61
• 4.2 進(jìn)一步工作的方向61-62
• 致謝62-63
• 參考文獻(xiàn)63-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加科研情況69

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本文編號(hào)：651408