發(fā)布時(shí)間：2017-08-08 07:37

  本文關(guān)鍵詞：胚胎停育絨毛組織中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)及臨床意義

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【摘要】：目的:1.檢測(cè)胚胎停育患者和正常早孕者絨毛組織中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L m RNA及蛋白的表達(dá)量及陽(yáng)性染色定位;2.分析胚胎停育患者和正常早孕者絨毛組織中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L在m RNA水平及蛋白水平的表達(dá)差異并探討其臨床意義。方法:隨機(jī)選取2013年1月至2014年6月在青島市市立醫(yī)院婦產(chǎn)科門(mén)診就診的經(jīng)B型超聲(B超)證實(shí)為胚胎停止發(fā)育實(shí)行清宮術(shù)的40例患者為觀察組,并選擇同時(shí)期40例正常早孕而要求終止妊娠者作為對(duì)照組,獲取兩組患者絨毛組織進(jìn)行研究。1.采用實(shí)時(shí)定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)法檢測(cè)兩組患者絨毛組織中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L m RNA的相對(duì)表達(dá)量。2.用免疫組織化學(xué)中鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法(SP法)確定DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L蛋白在兩組絨毛組織滋養(yǎng)細(xì)胞中的染色定位,并用圖像分析軟件Image-Pro Plus 6.0檢測(cè)4種蛋白在絨毛組織中的表達(dá)量。3.用Western Blot方法進(jìn)一步檢測(cè)DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L蛋白在兩組患者絨毛組織中的表達(dá)。4.應(yīng)用SPSS17.0軟件對(duì)RT-qPCR、免疫組織化學(xué)及Western Blot所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.兩組絨毛組織均表達(dá)DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L,此外,無(wú)論在mRNA水平或蛋白水平,DNMT3B表達(dá)量都顯著高于其他三種DNMTs。2.在m RNA水平,與對(duì)照組相比,胚胎停育患者絨毛組織中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L的表達(dá)量均無(wú)明顯改變,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.在蛋白水平,免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,在兩組絨毛組織中,四種DNMTs均呈不同程度陽(yáng)性染色,DNMT1與DNMT3L陽(yáng)性染色定位在絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì),DNMT3A與DNMT3B陽(yáng)性染色定位在細(xì)胞核。此外,通過(guò)圖像分析軟件及Western Blot結(jié)果顯示,胚胎停育患者絨毛中的DNMT3A蛋白的表達(dá)量明顯低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.DNMT1、DNMT3A、DNMT3B與DNMT3L四種蛋白之間表達(dá)量無(wú)明顯關(guān)聯(lián)(P0.05)。結(jié)論:1.胚胎停育絨毛組織中DNMT3A蛋白的低表達(dá)可能參與胚胎停育的發(fā)病機(jī)制。2.通過(guò)檢測(cè)胚胎停育患者絨毛組織中DNMTs的表達(dá)量可能為臨床進(jìn)行早期干預(yù)和治療提供新的途徑。
【關(guān)鍵詞】：妊娠初期 胎兒疾病 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 絨毛膜組織
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R714.21
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-10
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料10-14
• 1.1 研究對(duì)象及標(biāo)本采集10
• 1.2 主要儀器設(shè)備10-11
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及其配制11-14
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法14-24
• 2.1 RT-qPCR方法14-17
• 2.2 免疫組織化學(xué)方法17-19
• 2.3 Wewstern Blot方法19-24
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-27
• 3.1 胚胎停育組和對(duì)照組年齡及停經(jīng)時(shí)間比較24
• 3.2 胚胎停育組和對(duì)照組絨毛組織中DNMTs mRNA的表達(dá)情況24
• 3.3 胚胎停育組和對(duì)照組 DNMTs 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果24-25
• 3.4 胚胎停育組和對(duì)照組絨毛組織中 DNMTs 蛋白表達(dá)變化25-27
• 第四章 討論27-30
• 第五章 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 附圖34-39
• 綜述39-49
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果49-50
• 致謝50-51

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：638880