本文關鍵詞：雷帕霉素聯(lián)合卡鉑對宮頸腺癌Hela細胞生長的影響

  更多相關文章： 雷帕霉素 卡鉑 宮頸腺癌 Hela細胞 化療 協(xié)同作用

【摘要】：研究背景:在宮頸癌、子宮內膜癌及卵巢癌并稱的婦科三大惡性腫瘤中,宮頸癌發(fā)病率位居首位,且大部分患者出現(xiàn)在發(fā)展中國家,每年全球約有27萬人死于此病,這給女性的健康及生命帶來了嚴重的威脅。雖然在宮頸癌中宮頸腺癌比宮頸鱗癌少見,但與鱗癌相比,腺癌的預后差、死亡率高,而且近些年宮頸腺癌的發(fā)病率較前增加并有年輕化的趨勢。因宮頸腺癌對放療的敏感性低,故化療被予以重視。目前宮頸腺癌的化療方案仍是以鉑類抗癌藥物為基礎,既往以順鉑為主。而近些年發(fā)現(xiàn)卡鉑與順鉑在宮頸癌的抗腫瘤效果方面無明顯差異,但其腎毒性、消化道反應、神經(jīng)毒性等不良反應明顯小于順鉑,所以在宮頸癌化療中優(yōu)于順鉑,這一點國內外文獻均有報道�？ㄣK(CBP)屬于第二代鉑類化合物,1980年被發(fā)現(xiàn),1990年在我國批準生產(chǎn)并應用于臨床。卡鉑是通過改變腫瘤細胞DNA的化學結構而影響細胞復制,從而起到抗腫瘤作用。雖然其不良反應小于順鉑,但是其毒副作用及耐藥性依舊限制了臨床的用藥劑量,因此探索新型的藥物進行抗腫瘤治療或增強現(xiàn)有化療藥物的敏感性成為宮頸腺癌化療研究的熱點。雷帕霉素(RAPA,又名西羅莫司)是一種大環(huán)內酯類抗生素,它的抗真菌作用及低毒性特點最先在實驗中被發(fā)現(xiàn),其后又有實驗證實了其免疫抑制以及預防冠脈支架植入后血管再狹窄等作用。而同時雷帕霉素對晚期腎癌、乳腺癌、復發(fā)性膠質母細胞瘤、骨肉瘤、晚期非小細胞肺癌等惡性腫瘤也有顯著的抗腫瘤作用,并可以增加其它抗癌藥物的敏感性。因此我們推測雷帕霉素作為一種抗腫瘤藥物對宮頸腺癌亦有殺傷作用,在它與卡鉑的聯(lián)合用藥中二者具有相互促進作用,可以增加卡鉑的抗腫瘤效果。目的:觀察雷帕霉素(RAPA)及卡鉑(CBP)在單獨和聯(lián)合給藥下對Hela細胞增殖、凋亡、細胞周期阻滯等方面的影響,從而為宮頸腺癌化療尋求新藥,以及增加現(xiàn)有化療藥物的敏感性提供理論依據(jù)。方法:(1)MTT染色法檢測雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞增殖的影響。(2)流式細胞術PI染色法檢測雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞周期分布的影響。(3)Annexin V-7AAD雙染法檢測雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞凋亡的影響。(4)逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術檢測雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞中Bcl-2/Bax基因表達的影響。結果:(1)MTT染色法檢測結果顯示:雷帕霉素、卡鉑單獨應用時對宮頸腺癌Hela細胞的增殖有抑制作用,呈一定的時間依賴性,且卡鉑的抑制效果優(yōu)于雷帕霉素;雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應用組增殖抑制率高于雷帕霉素、卡鉑單獨應用組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)流式細胞術(FCM)PI染色法檢測結果顯示:雷帕霉素、卡鉑單獨應用時可使宮頸腺癌Hela細胞中G1期細胞比例增加,S期與G2期細胞比例減少,呈一定的時間依賴性,且卡鉑的作用效果優(yōu)于雷帕霉素。雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應用組作用效果優(yōu)于雷帕霉素、卡鉑單獨應用組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)Annexin V-7AAD雙染法檢測結果顯示:雷帕霉素、卡鉑單獨應用時對宮頸腺癌Hela細胞的凋亡有促進作用,呈一定的時間依賴性,且卡鉑的促進效果優(yōu)于雷帕霉素;雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應用組凋亡率高于雷帕霉素、卡鉑單獨應用組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(4)逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術檢測結果顯示:雷帕霉素、卡鉑單獨應用時可使宮頸腺癌Hela細胞中促進凋亡的Bax基因的表達增加、抑制凋亡的Bcl-2基因的表達降低,呈一定的時間依賴性,且卡鉑的作用效果優(yōu)于雷帕霉素。雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應用組作用效果優(yōu)于雷帕霉素、卡鉑單獨應用組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:(1)雷帕霉素、卡鉑單獨應用時均可對宮頸腺癌Hela細胞起到抑制其增殖、誘導其凋亡的作用,并與作用時間呈正相關,提示二者對宮頸腺癌可能均有抗腫瘤作用,且卡鉑的作用效果優(yōu)于雷帕霉素。(2)雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應用時,其對Hela細胞的作用效果優(yōu)于雷帕霉素、卡鉑的單獨給藥,二者在抑制Hela細胞增殖、誘導Hela細胞凋亡上具有協(xié)同促進作用,以此推測雷帕霉素可以增強卡鉑在宮頸腺癌中的化療效果。(3)雷帕霉素、卡鉑對宮頸腺癌Hela細胞的抗腫瘤作用機制及相互的協(xié)同促進作用可能與阻滯細胞周期進展、降低凋亡基因Bcl-2/Bax的表達有關。
【關鍵詞】：雷帕霉素 卡鉑 宮頸腺癌 Hela細胞 化療 協(xié)同作用
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-14
• 英文縮寫對照表14-15
• 第1章 引言15-17
• 第2章 材料與方法17-26
• 2.1 實驗材料17-19
• 2.1.1 細胞系17
• 2.1.2 主要試劑17-18
• 2.1.3 主要實驗器材18-19
• 2.2 實驗方法及步驟19-25
• 2.2.1 藥物、試劑配置及備品處理19-20
• 2.2.2 細胞培養(yǎng)20-21
• 2.2.3 最佳藥物作用濃度篩選及實驗分組21
• 2.2.4 MTT染色法檢測雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞增殖的影響21-22
• 2.2.5 流式細胞術（FCM）PI染色法檢測雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞周期阻滯的影響22
• 2.2.6 Annexin V-7AAD雙染法檢測雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞凋亡的影響22-23
• 2.2.7 逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術檢測雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞中Bcl-2/Bax基因表達的影響23-25
• 2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析25-26
• 第3章 結果26-34
• 3.1 最佳藥物作用濃度篩選結果26-27
• 3.2 雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞增殖的影響27-28
• 3.2.1 雷帕霉素、卡鉑單獨作用對Hela細胞增殖的影響27
• 3.2.2 雷帕霉素、卡鉑聯(lián)合作用對Hela細胞增殖的影響27-28
• 3.3 雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌HELA細胞周期的影響28-29
• 3.3.1 雷帕霉素、卡鉑單獨作用對Hela細胞周期的影響28
• 3.3.2 雷帕霉素、卡鉑聯(lián)合作用對Hela細胞周期的影響28-29
• 3.4 雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞凋亡的影響29-31
• 3.4.1 雷帕霉素、卡鉑單獨作用對Hela細胞凋亡的影響29
• 3.4.2 雷帕霉素、卡鉑聯(lián)合作用對Hela細胞凋亡的影響29-31
• 3.5 雷帕霉素、卡鉑單獨及聯(lián)合應用對宮頸腺癌Hela細胞凋亡基因Bcl-2/Bax表達的影響31-34
• 3.5.1 雷帕霉素、卡鉑單獨作用對Hela細胞中Bcl-2/Bax基因表達的影響31
• 3.5.2 雷帕霉素、卡鉑聯(lián)合作用對Hela細胞中Bcl-2/Bax基因表達的影響31-34
• 第4章 討論34-41
• 4.1 雷帕霉素聯(lián)合卡鉑對人宮頸腺癌Hela細胞的抗腫瘤作用35-36
• 4.2 雷帕霉素聯(lián)合卡鉑對人宮頸腺癌Hela細胞的抗腫瘤作用的分子機制36-39
• 4.2.1 雷帕霉素對宮頸腺癌Hela細胞抑制增值及促進凋亡作用的分子機制36-38
• 4.2.2 卡鉑對宮頸腺癌Hela細胞抑制增值及促進凋亡作用的分子機制38-39
• 4.3 雷帕霉素與鉑類藥物的協(xié)同作用39-41
• 第5章 結論41-42
• 參考文獻42-46
• 綜述46-71
• 參考文獻60-71
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果71-72
• 致謝72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉虹;邵榮光;;自噬在腫瘤發(fā)生與發(fā)展過程中的調節(jié)作用[J];藥學學報;2016年01期

2 李功勤;夏良斌;;宮頸癌乏氧誘導因子-1α和谷胱甘肽-S-轉酶-π的表達及與化療藥物耐藥性關系的研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2015年13期

3 曲奎堯;唐鎖勤;;鉑類藥物在兒童實體瘤化療中的應用[J];世界臨床藥物;2015年05期

4 張文芳;潘春燕;張印星;;mTOR/P70S6K信號通路在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2015年04期

5 陳艷輝;;紫杉醇聯(lián)合卡鉑化療并同步放療治療中晚期宮頸癌近期及遠期療效[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2015年04期

6 張小艷;肖紅;薛平;羅建民;;雷帕霉素對K562細胞溶酶體的影響[J];臨床薈萃;2014年08期

7 田亞麗;張建清;楊媚;白鴿;馬曉麗;張莉;;以卡鉑為基礎的化療與晚期實體瘤患者靜脈血栓栓塞風險關系的Meta分析[J];中國全科醫(yī)學;2014年13期

8 張建忠;柯櫻;沈佳琳;;鉑類抗腫瘤藥物的研發(fā)進展及市場情況[J];上海醫(yī)藥;2013年23期

9 韓璐;賀珊;;雷帕霉素抑制人宮頸癌裸鼠移植瘤生長的作用及其機制[J];腫瘤防治研究;2013年11期

10 相媛媛;張莘;林仲秋;周暉;徐國才;張丙忠;;雷帕霉素聯(lián)合順鉑對卵巢癌SKOV3細胞株凋亡和周期的影響[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2013年10期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李欣;mTOR通路參與柯薩奇病毒B3誘導的HeLa細胞凋亡機制研究[D];中南大學;2014年

2 李杰;mTOR靶向抑制劑雷帕霉素對慢性粒細胞白血病細胞的作用及機制[D];河北醫(yī)科大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 羅鴻斌;雷帕霉素衍生物FIM-A（AP23573）體外抗腫瘤活性及其機制的研究[D];福建醫(yī)科大學;2013年

2 楊麗肖;雷帕霉素與順鉑聯(lián)合應用對人宮頸癌裸鼠皮下移植瘤生長的影響[D];大連醫(yī)科大學;2010年

，

本文編號：608943