本文關(guān)鍵詞：雷帕霉素聯(lián)合卡鉑對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

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【摘要】：研究背景:在宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌及卵巢癌并稱的婦科三大惡性腫瘤中,宮頸癌發(fā)病率位居首位,且大部分患者出現(xiàn)在發(fā)展中國(guó)家,每年全球約有27萬(wàn)人死于此病,這給女性的健康及生命帶來(lái)了嚴(yán)重的威脅。雖然在宮頸癌中宮頸腺癌比宮頸鱗癌少見(jiàn),但與鱗癌相比,腺癌的預(yù)后差、死亡率高,而且近些年宮頸腺癌的發(fā)病率較前增加并有年輕化的趨勢(shì)。因?qū)m頸腺癌對(duì)放療的敏感性低,故化療被予以重視。目前宮頸腺癌的化療方案仍是以鉑類抗癌藥物為基礎(chǔ),既往以順鉑為主。而近些年發(fā)現(xiàn)卡鉑與順鉑在宮頸癌的抗腫瘤效果方面無(wú)明顯差異,但其腎毒性、消化道反應(yīng)、神經(jīng)毒性等不良反應(yīng)明顯小于順鉑,所以在宮頸癌化療中優(yōu)于順鉑,這一點(diǎn)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)均有報(bào)道�？ㄣK(CBP)屬于第二代鉑類化合物,1980年被發(fā)現(xiàn),1990年在我國(guó)批準(zhǔn)生產(chǎn)并應(yīng)用于臨床�？ㄣK是通過(guò)改變腫瘤細(xì)胞DNA的化學(xué)結(jié)構(gòu)而影響細(xì)胞復(fù)制,從而起到抗腫瘤作用。雖然其不良反應(yīng)小于順鉑,但是其毒副作用及耐藥性依舊限制了臨床的用藥劑量,因此探索新型的藥物進(jìn)行抗腫瘤治療或增強(qiáng)現(xiàn)有化療藥物的敏感性成為宮頸腺癌化療研究的熱點(diǎn)。雷帕霉素(RAPA,又名西羅莫司)是一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,它的抗真菌作用及低毒性特點(diǎn)最先在實(shí)驗(yàn)中被發(fā)現(xiàn),其后又有實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其免疫抑制以及預(yù)防冠脈支架植入后血管再狹窄等作用。而同時(shí)雷帕霉素對(duì)晚期腎癌、乳腺癌、復(fù)發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、骨肉瘤、晚期非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤也有顯著的抗腫瘤作用,并可以增加其它抗癌藥物的敏感性。因此我們推測(cè)雷帕霉素作為一種抗腫瘤藥物對(duì)宮頸腺癌亦有殺傷作用,在它與卡鉑的聯(lián)合用藥中二者具有相互促進(jìn)作用,可以增加卡鉑的抗腫瘤效果。目的:觀察雷帕霉素(RAPA)及卡鉑(CBP)在單獨(dú)和聯(lián)合給藥下對(duì)Hela細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期阻滯等方面的影響,從而為宮頸腺癌化療尋求新藥,以及增加現(xiàn)有化療藥物的敏感性提供理論依據(jù)。方法:(1)MTT染色法檢測(cè)雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞增殖的影響。(2)流式細(xì)胞術(shù)PI染色法檢測(cè)雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞周期分布的影響。(3)Annexin V-7AAD雙染法檢測(cè)雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞凋亡的影響。(4)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞中Bcl-2/Bax基因表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)MTT染色法檢測(cè)結(jié)果顯示:雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)應(yīng)用時(shí)對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞的增殖有抑制作用,呈一定的時(shí)間依賴性,且卡鉑的抑制效果優(yōu)于雷帕霉素;雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用組增殖抑制率高于雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)應(yīng)用組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)PI染色法檢測(cè)結(jié)果顯示:雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)應(yīng)用時(shí)可使宮頸腺癌Hela細(xì)胞中G1期細(xì)胞比例增加,S期與G2期細(xì)胞比例減少,呈一定的時(shí)間依賴性,且卡鉑的作用效果優(yōu)于雷帕霉素。雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用組作用效果優(yōu)于雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)應(yīng)用組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)Annexin V-7AAD雙染法檢測(cè)結(jié)果顯示:雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)應(yīng)用時(shí)對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞的凋亡有促進(jìn)作用,呈一定的時(shí)間依賴性,且卡鉑的促進(jìn)效果優(yōu)于雷帕霉素;雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用組凋亡率高于雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)應(yīng)用組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示:雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)應(yīng)用時(shí)可使宮頸腺癌Hela細(xì)胞中促進(jìn)凋亡的Bax基因的表達(dá)增加、抑制凋亡的Bcl-2基因的表達(dá)降低,呈一定的時(shí)間依賴性,且卡鉑的作用效果優(yōu)于雷帕霉素。雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用組作用效果優(yōu)于雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)應(yīng)用組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)應(yīng)用時(shí)均可對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞起到抑制其增殖、誘導(dǎo)其凋亡的作用,并與作用時(shí)間呈正相關(guān),提示二者對(duì)宮頸腺癌可能均有抗腫瘤作用,且卡鉑的作用效果優(yōu)于雷帕霉素。(2)雷帕霉素與卡鉑聯(lián)合應(yīng)用時(shí),其對(duì)Hela細(xì)胞的作用效果優(yōu)于雷帕霉素、卡鉑的單獨(dú)給藥,二者在抑制Hela細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡上具有協(xié)同促進(jìn)作用,以此推測(cè)雷帕霉素可以增強(qiáng)卡鉑在宮頸腺癌中的化療效果。(3)雷帕霉素、卡鉑對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞的抗腫瘤作用機(jī)制及相互的協(xié)同促進(jìn)作用可能與阻滯細(xì)胞周期進(jìn)展、降低凋亡基因Bcl-2/Bax的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：雷帕霉素 卡鉑 宮頸腺癌 Hela細(xì)胞 化療 協(xié)同作用
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-14
• 英文縮寫對(duì)照表14-15
• 第1章 引言15-17
• 第2章 材料與方法17-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 2.1.1 細(xì)胞系17
• 2.1.2 主要試劑17-18
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)器材18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟19-25
• 2.2.1 藥物、試劑配置及備品處理19-20
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)20-21
• 2.2.3 最佳藥物作用濃度篩選及實(shí)驗(yàn)分組21
• 2.2.4 MTT染色法檢測(cè)雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞增殖的影響21-22
• 2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)（FCM）PI染色法檢測(cè)雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞周期阻滯的影響22
• 2.2.6 Annexin V-7AAD雙染法檢測(cè)雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞凋亡的影響22-23
• 2.2.7 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測(cè)雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞中Bcl-2/Bax基因表達(dá)的影響23-25
• 2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析25-26
• 第3章 結(jié)果26-34
• 3.1 最佳藥物作用濃度篩選結(jié)果26-27
• 3.2 雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞增殖的影響27-28
• 3.2.1 雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)作用對(duì)Hela細(xì)胞增殖的影響27
• 3.2.2 雷帕霉素、卡鉑聯(lián)合作用對(duì)Hela細(xì)胞增殖的影響27-28
• 3.3 雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌HELA細(xì)胞周期的影響28-29
• 3.3.1 雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)作用對(duì)Hela細(xì)胞周期的影響28
• 3.3.2 雷帕霉素、卡鉑聯(lián)合作用對(duì)Hela細(xì)胞周期的影響28-29
• 3.4 雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞凋亡的影響29-31
• 3.4.1 雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)作用對(duì)Hela細(xì)胞凋亡的影響29
• 3.4.2 雷帕霉素、卡鉑聯(lián)合作用對(duì)Hela細(xì)胞凋亡的影響29-31
• 3.5 雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞凋亡基因Bcl-2/Bax表達(dá)的影響31-34
• 3.5.1 雷帕霉素、卡鉑單獨(dú)作用對(duì)Hela細(xì)胞中Bcl-2/Bax基因表達(dá)的影響31
• 3.5.2 雷帕霉素、卡鉑聯(lián)合作用對(duì)Hela細(xì)胞中Bcl-2/Bax基因表達(dá)的影響31-34
• 第4章 討論34-41
• 4.1 雷帕霉素聯(lián)合卡鉑對(duì)人宮頸腺癌Hela細(xì)胞的抗腫瘤作用35-36
• 4.2 雷帕霉素聯(lián)合卡鉑對(duì)人宮頸腺癌Hela細(xì)胞的抗腫瘤作用的分子機(jī)制36-39
• 4.2.1 雷帕霉素對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞抑制增值及促進(jìn)凋亡作用的分子機(jī)制36-38
• 4.2.2 卡鉑對(duì)宮頸腺癌Hela細(xì)胞抑制增值及促進(jìn)凋亡作用的分子機(jī)制38-39
• 4.3 雷帕霉素與鉑類藥物的協(xié)同作用39-41
• 第5章 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述46-71
• 參考文獻(xiàn)60-71
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果71-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

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