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微小RNA let-7在重度子癇前期母體外周血中的表達(dá)及意義

發(fā)布時(shí)間：2017-07-06 14:22

本文關(guān)鍵詞：微小RNA let-7在重度子癇前期母體外周血中的表達(dá)及意義

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【摘要】：目的:妊娠期高血壓疾病(Hypertensive disorder complicating pregnancy,HDCP)是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍生兒病率及死亡率的主要原因。子癇前期(preeclampsia,PE)屬于HDCP的范疇,如未早期診斷和(或)及時(shí)治療,將嚴(yán)重威脅母嬰健康,但是目前,其發(fā)病機(jī)制至今不明。因此,研究PE的發(fā)生機(jī)制對(duì)提高PE診斷和治療有非常重要的臨床意義。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一類內(nèi)源性非編碼小RNA,let-7家族是mi RNAs的一類,在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因的表達(dá)。let-7家族與PE相關(guān)性的研究相對(duì)少見。在本次研究中,通過檢測(cè)重度子癇前期(severe preeclampsia,SPE)及正常妊娠(normal pregnancy,NP)婦女外周血白細(xì)胞中微小RNA let-7家族成員中l(wèi)et-7a、let-7b、let-7g、let-7i的表達(dá)變化,初步探索let-7與PE的相關(guān)性,為進(jìn)一步研究PE的發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。方法:收集吉林大學(xué)第二醫(yī)院2015年10月至2016年2月產(chǎn)科住院SPE和NP婦女新鮮外周血標(biāo)本。查閱其相關(guān)臨床資料并記錄。PE的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照全國(guó)統(tǒng)一教材《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版。本實(shí)驗(yàn)選取的各組患者均排除心血管疾病、肝腎疾病、糖尿病及急慢性感染性疾病等妊娠合并癥病史。采用mi Rcute mi RNA提取分離試劑盒提取外周血總RNA后,用紫外分光光度儀測(cè)定法檢測(cè)總RNA的濃度、OD值和純度�？俁NA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,選用U6作為內(nèi)參基因,利用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)micro RNA let-7家族中的let-7a、let-7b、let-7g、let-7i進(jìn)行擴(kuò)增。采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件和2-ΔΔCT相對(duì)定量法處理數(shù)據(jù)。結(jié)果:1、let-7a、let-7b、let-7g、let-7i在NP對(duì)照組、SPE婦女外周血白細(xì)胞中均有表達(dá)。2、經(jīng)Pearson和Spearman’s相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),let-7a、let-7b、let-7g、let-7i在外周血白細(xì)胞的表達(dá)水平與年齡、體質(zhì)指數(shù)不相關(guān)(P0.05)。3、let-7a、let-7g在SPE組和NP組外周血白細(xì)胞中的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、let-7b、let-7i在SPE組和NP組外周血白細(xì)胞中的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、應(yīng)用SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)合比較Ct值法得到了目的基因let-7a、let-7b、let-7g、let-7i相對(duì)于內(nèi)參基因U6的表達(dá)定量,該方法可行,簡(jiǎn)單且特異性較好。2、外周血白細(xì)胞中l(wèi)et-7a、let-7b、let-7g、let-7i在NP對(duì)照組和SPE婦女均有表達(dá)。3、外周血白細(xì)胞中l(wèi)et-7a、let-7b、let-7g、let-7i表達(dá)水平可能與年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)無(wú)關(guān)。4、外周血白細(xì)胞中l(wèi)et-7a、let-7g表達(dá)水平與SPE存在相關(guān)性,具體機(jī)制有待深入研究。5、外周血白細(xì)胞中l(wèi)et-7b、let-7i表達(dá)水平與SPE不相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：子癇前期 微小RNA let-7 qRT-PCR
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R714.244
【目錄】：

中文摘要4-6
Abstract6-11
英文縮略詞表11-12
第1章引言12-19
1.1 研究背景12-13
1.2 文獻(xiàn)綜述13-19
第2章實(shí)驗(yàn)材料與方法19-25
2.1 一般資料19-20
2.1.1 研究對(duì)象19
2.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)19
2.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)19
2.1.4 主要儀器和設(shè)備19-20
2.1.5 主要試劑及耗材20
2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-25
2.2.1 標(biāo)本采集20
2.2.2 外周血白細(xì)胞中總RNA提取20-22
2.2.3 總RNA的純度檢測(cè)22
2.2.4 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA22-23
2.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR23-24
2.2.6 數(shù)據(jù)處理24-25
第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-34
3.1 病例組與正常對(duì)照組臨床資料比較25
3.2 產(chǎn)物特異性25-26
3.3 內(nèi)參U6、let-7a、let-7b、let-7g及l(fā)et-7i的實(shí)時(shí)熒光定量PCR的擴(kuò)增曲線26-27
3.4 Let-7 的表達(dá)分析27-30
3.5 Let-7a在SPE患者外周血中的表達(dá)情況30
3.6 Let-7b在SPE患者外周血中的表達(dá)情況30-31
3.7 Let-7g在SPE患者外周血中的表達(dá)情況31-32
3.8 Let-7i在SPE患者外周血中的表達(dá)情況32-34
第4章討論34-37
第5章結(jié)論37-38
參考文獻(xiàn)38-45
作者簡(jiǎn)介及攻讀碩士期間所取得的科研成果45-46
致謝46