本文關(guān)鍵詞：雌激素結(jié)合不同受體差異性調(diào)控A2780細(xì)胞株中miR-214的表達(dá)

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【摘要】：[目的]探討在人卵巢上皮性癌細(xì)胞株A2780中,雌激素通過結(jié)合不同的雌激素受體,差異性調(diào)控miR-214的表達(dá)。[方法]1、構(gòu)建ER α及ERβ高表達(dá)載體,培養(yǎng)A2780細(xì)胞株。將培養(yǎng)好的細(xì)胞分為a、b、c三組。a組將ER α過表達(dá)載體通過慢病毒感染A2780細(xì)胞；b組將ERβ過表達(dá)載體通過慢病毒感染A2780細(xì)胞；c組將未處理的A2780細(xì)胞作為對照組。2、慢病毒感染A2780細(xì)胞24小時(shí),RT-PCR及Western Blot檢測a、b、c三組細(xì)胞感染前后ER α、ERβ mRNA及蛋白的表達(dá)水平。3、慢病毒感染A2780細(xì)胞24小時(shí)后,RT-PCR檢測三組細(xì)胞miR-214的表達(dá)水平。4、10-6mol/L的17-β雌二醇刺激各組細(xì)胞24小時(shí)后,RT-PCR檢測a、b、c三組細(xì)胞內(nèi)miR-214的表達(dá)水平。5、先添加100nM的雌激素受體拮抗劑(ICI182,780)處理各組細(xì)胞6小時(shí)后再添加10-6mol/L的17-β雌二醇處理12小時(shí),RT-PCR檢測三組細(xì)胞內(nèi)miR-214表達(dá)水平。[結(jié)果]1、慢病毒感染A2780細(xì)胞24小時(shí)后,RT-PCR檢測a組細(xì)胞ER α mRNA 2-ΔΔCt為7931.25±65.81較c組53.76±6.09明顯升高(P0.01)。b組ERβmRNA為100.66±15.72,較c組15.34±2.25明顯升高(P0.01)。2、Western Blot檢測a組細(xì)胞ERα/β-actin為1.77±0.25較c組1.14±0.18明顯升高(P0.05)。b組ERβ/β-actin為0.82±0.04,較c組0.65±0.06明顯升高(P0.05)。3、RT-PCR檢測慢病毒感染細(xì)胞24h后,在17-β雌二醇刺激之前,各組細(xì)胞內(nèi)miR-214的相對表達(dá)水平,miR-214的相對表達(dá)分別為0.18±0.05,0.17±0.03,0.14±0.04,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)4、RT-PCR檢測10-6mol/L 17-β雌二醇刺激三組細(xì)胞24小時(shí)后,a組miR-214的相對表達(dá)2-ΔΔCt值為0.038±0.014,較c組0.144±0.045明顯降低(P0.05),b組為1.325±0.643,較c組明顯升高(P0.05)。5.RT-PC檢測(ICI182、780)處理各組細(xì)胞后,a、b、c三組細(xì)胞內(nèi)miR-214的相對表達(dá)2-ΔΔCt值分別為0.305±0.024,0.292±0.017,0.266±0.013三組對比無明顯差異(P0.05)。[結(jié)論]1、通過慢病毒介導(dǎo)ER α及ER β過表達(dá)載體后感染A2780細(xì)胞的方法,我們成功建立了高表達(dá)ER α及ER β的卵巢癌細(xì)胞株,為后續(xù)的研究奠定了基礎(chǔ)。2、在沒有雌激素刺激時(shí),慢病毒介導(dǎo)過表達(dá)載體感染A2780細(xì)胞不影響miR-214的表達(dá)。3、細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)ERα,雌激素能夠降低細(xì)胞內(nèi)miR-214的表達(dá)。4、細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)ERβ,雌激素能夠促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)miR-214的表達(dá)。5、雌激素受體拮抗劑能夠抑制雌激素對miR-214表達(dá)的調(diào)控作用,證明雌激素對miR-214表達(dá)的差異性調(diào)控是由不同的雌激素受體介導(dǎo)的。6、以上結(jié)論證實(shí)雌激素通過結(jié)合不同受體能差異性調(diào)控卵巢癌A2780細(xì)胞內(nèi)靶基因miR-214的表達(dá)。也許能為尋找卵巢癌的發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù),也可能為卵巢癌的靶向治療提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：雌激素 雌激素受體α 雌激素受體β 卵巢癌 miR-214
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 縮略詞表(以字母順序排列)5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-28
• 討論28-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 綜述39-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果48-49
• 致謝49

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1 湯月芬;施慎遜;;雌激素與女性抑郁[J];國際精神病學(xué)雜志;2008年02期

2 張s，

本文編號：524109